反向嵌套PCR法高效扩增辽宁碱蓬甜菜碱醛脱氢酶cDNA5′末端序列

采用反向嵌套PCR法 ,根据已获得的辽宁碱蓬甜菜碱醛脱氢酶cDNA的部分序列 ,设计一条 5′末端磷酸化的特异性反转录引物和两对特异性反向嵌套PCR引物 ,成功地克隆了辽宁碱蓬甜菜碱醛脱氢酶cDNA 5′末端。与锚定PCR法相比 ,反向嵌套PCR法具有特异性强、扩增效率高等优点 ,是一种非常有效的扩增cDNA 5′末端序列的方法。

一步PCR快速扩增辽宁碱蓬甜菜碱醛脱氢酶cDNA3′末端序列(英文)

根据已获得的辽宁碱蓬甜菜碱醛脱氢酶cDNA的部分序列 ,设计一条基因特异性引物 ,与通用引物并用 ,一步PCR成功地克隆了辽宁碱蓬甜菜碱醛脱氢酶cDNA 3′末端。与常规的 3′RACE法相比 ,一步PCR法具有快速、简便、经济等优点 ,是一种非常快捷的扩增cDNA

形目15种鸟类线粒体ND6基因序列差异及其系统进化关系

采用PCR和质粒克隆测序方法 ,首次获得形目 15种鸟类线粒体基因组的ND6基因全长 5 2 2bp的序列。经对位排列 ,序列间未见有插入和缺失 ,共有 2 16个变异位点 ,种间序列差异为 5 17%～ 19 92 %。以白鹳为外群 ,用NJ法构建 15种鸟类的进化关系树。研究结果表明 :构建的系统树将形目 15种鸟类分为 2个支系。第 1支系包括蒙古沙、环颈、灰斑和反嘴鹬。第 2支系包括红脚鹬、林鹬、青脚鹬、翘嘴鹬、翻石鹬、大滨鹬、尖尾滨鹬、斑尾塍鹬、中杓鹬、大杓鹬和白腰杓鹬 ,其中鹬属的 3个种和杓鹬属的 3个种分别组成一个单系 ;翘嘴鹬和翻石鹬、大滨鹬和尖尾滨鹬分别聚为姊妹群 ,表现出较近的亲缘关系 ;斑尾塍鹬独立分支出来。分子证据提示 :鹬科中的塍鹬属、科中的斑属应提升为亚科分类阶元 ;反嘴鹬与科鸟类亲缘关系较近 ,组成一个单系 ,将其归入科下属的一个类群更为合理 ,与核型研究结果及Sibley新分类体系的观点相一致 [动物学报 49(1) :6 1～ 6 7,2 0 0 3]。

人类疱疹病毒-5～8型与口腔扁平苔藓发病间的关系

目的探索人类疱疹病毒(HHV)-5～8型与口腔扁平苔藓(OLP)发病之间的关系。方法选用实时定量聚合酶链反应检测方法,分别采集36例OLP患者的外周血白细胞、血浆、唾液以及病损区脱落细胞、非病损区脱落细胞和活检组织作为研究对象,另外选取43例健康人相同部位组织作为对照组。结果 HHV-5在OLP组中的阳性样本检出率依次为白细胞50.00%(8/16)、唾液25.00%(4/16)、活检组织80.00%(4/5)、病损区脱落细胞50.00%(8/16)、非病损区脱落细胞18.75%(3/16),健康对照组则依次为白细胞30.00%(3/10)、唾液20.00%(2/10);HHV-6在OLP组中的阳性样本检出率依次为白细胞18.75%(3/16)、活检组织40.00%(2/5)、病损区脱落细胞12.50%(2/16),健康对照组仅唾液10.00%(1/10);HHV-7在OLP组中的阳性样本检出率仅有唾液30.00%(6/20),健康对照组也仅有唾液15.00%(3/20);HHV-8在所有样本中未检出。结论 HHV-5与OLP的发病有关联(χ2=6.8290,P<0.05,Pearson列联系数0.2080),HHV-5检出的病毒拷贝数在试验组内的白细胞列与病损脱落细胞列之间差异有统计学意义(P<0.01)。但HHV-6和7与OLP的发病关系不能确定。

一步PCR法快速扩增辽宁碱蓬胆碱单加氧酶cDNA3′末端序列

根据已获得的辽宁碱蓬 (SuaedaliaotungensisKitag)胆碱单加氧酶cDNA的部分序列 ,设计一条基因特异性引物 ,与通用引物并用 ,一步PCR成功地克隆了辽宁碱蓬胆碱单加氧酶cDNA 3′末端。与常规的3′_RACE法相比 ,一步PCR法具有快速、简便、经济等优点 ,是一种非常快捷的扩增cDNA

甘油脱水酶gldC基因克隆、表达与鉴定

目的 :表达及纯化甘油脱水酶γ亚基蛋白。方法 :使用PCR及DNA重组技术 ,将甘油脱水酶γ亚基基因gldC重组到含麦芽糖结合蛋白 (MBP)的融合蛋白表达载体pMAL -c2x中 ,在大肠杆菌中进行表达。结果 :转化重组质粒pMAL gldC的大肠杆菌经IPTG诱导 ,SDS -PAGE分析显示表达出的MBP -gldC融合蛋白相对分子质量约 6 6kD ,与预期大小一致 ,并经Westernblot分析证实。用直链淀粉树脂亲和层析纯化得到电泳均一的融合蛋白。结论 :成功地获得甘油脱水酶γ亚基融合蛋白 。

甘油脱水酶β亚基融合蛋白在大肠杆菌中的表达和纯化

为了表达及纯化甘油脱水酶β亚基蛋白,采用PCR及DNA重组技术将甘油脱水酶β亚基基因gldB重组到含麦芽糖结合蛋白(MBP)的融合蛋白表达载体pMAL-c2x中,在大肠杆菌中进行表达。结果表明,转化重组质粒pMAL/gldB的大肠杆菌经IPTG诱导,SDS-PAGE分析显示:表达出的MBP-gldB融合蛋白相对分子质量约72000,与预期大小一致,并经Westernblot分析证实。进一步通过直链淀粉树脂亲和层析纯化得到电泳均一的融合蛋白。已获得的重组甘油脱水酶β亚基蛋白有利于研究其生物学性能。

农杆菌介导的单子叶植物基因转化研究进展

综述了影响农杆菌介导单子叶植物基因转化的因素,消除基因沉默的策略及农杆菌介导单子叶植物基因转化的研究进展。

形目12种鸟类线粒体细胞色素b基因序列差异及其系统发育关系

采用PCR直接测序方法首次对形目 (Charadriiformes) 12种鸟类 :蒙古沙 (Charadriusmongolus)、环颈(Charadriusalexandrinus)、大杓鹬 (Numeniusmadagascariensis)、白腰杓鹬 (Numeniusarquata)、中杓鹬 (Numeniusphaeo pus)、红脚鹬 (Tringatotanus)、林鹬 (Tringaglareola)、翘嘴鹬 (Xenuscineres)、翻石鹬 (Arenariainterpres)、大滨鹬 (Calidristenuirostris)、反嘴鹬 (Recurvirostraavosetts)和砺鹬 (Haematopusostralensis)线粒体cytb基因全序列进行测定 ,并以白鹳(Ciconiaciconia)的同源序列作为外群构建系统发生树。经比对 ,形目 12种鸟类线粒体cytb基因全序列均包括1143bp ,序列间未见有插入和缺失 ,共有 381个变异位点 ,种间序列差异值为 5 16 %～ 16 0 1%。重建的系统树将形目 12种鸟类分为 2个支系 :第 1支系包括红脚鹬、林鹬、翻石鹬、大滨鹬、翘嘴鹬、中杓鹬、大杓鹬和白腰杓鹬 ,其中红脚鹬、林鹬、翻石鹬、大滨鹬、翘嘴鹬聚为一支 ,中杓鹬、大杓鹬和白腰杓鹬聚为另一支 ;第 2支系包括蒙古沙、环颈、反嘴鹬和砺鹬 ,其中反嘴鹬与砺鹬互为姐妹群 ,然后再与属的两个种蒙古沙和环颈组成的姐妹群构成并系群。分子证据提示 :第 1支系中各属间及种间的系统关系与形态学研?

重组甘油脱水酶的活性鉴定

通过MBTH方法对重组甘油脱水酶活性进行检测,确定稳定的酶活检测系统.结果显示重组甘油脱水酶的活性明显高于野生菌.此外,甘油脱水酶单个亚基及亚基两两组合未检测到酶活性.这一结果将对酶活性研究具有重要的意义.

纳豆激酶的研究进展

纳豆激酶是一种在日本发现的高效血栓溶解酶，综述了纳豆激酶的发现、活性测定、分离纯化、溶栓作用研究及开发现状.

反义人端粒酶逆转录酶基因转染对人胃癌细胞系的影响

目的探讨反义人端粒酶(hTERT)基因治疗的可行性。方法构建hTERT基因的反义表达载体,经脂质体介导转染人未分化胃癌细胞系HGC-27,通过Southernblot检测外源反义基因的整合;RT-PCR及DNA测序法检测反义基因的转录;RT-PCR半定量方法检测被封闭目的基因mRNA的转录水平;TRAP及PCRELISA方法检测细胞的端粒酶活性;流式细胞仪检测细胞周期变化。结果外源反义hTERT基因已整合入细胞并获稳定转录,且能显著封闭目的基因转录的mRNA,并显著抑制HGC-27细胞的端粒酶活性,抑制HGC-27细胞的增殖并促进其凋亡。结论端粒酶反义hTERT基因可有效地应用于胃癌的基因治疗。