吲哚美辛对荷瘤小鼠抗肿瘤作用机制的实验研究

用微观放射自显影技术及免疫组化法探讨了非甾体类抗炎药吲哚美辛(IN)对Lewis肺癌的生长抑制作用机制。结果显示:与对照组相比,实验组IN的抑瘤率为55.05%;IN可显著下调Bcl-2蛋白的表达(t=6.154,P<0.001),对Bax蛋白的表达没有明显影响(t=2.101,P>0.05)。放射自显影结果显示,在肿瘤细胞的细胞膜、细胞浆及细胞核中均有黑色银颗粒分布,且在用药后12 h时肿瘤组织中的平均银颗粒数高于4、7、243、6 h时。以上结果表明,IN可抑制Lewis肺癌的生长,其机制与下调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达及降低Bcl-2/Bax的比值有关;IN可进入到肿瘤细胞内发挥抗肿瘤作用。

二甲基亚砜对CAOV3细胞端粒酶活性的可逆性抑制作用

目的探讨卵巢癌细胞CAOV3经二甲基亚砜(Dimethylsulfoxide,DMSO)作用后及停止用药后端粒酶活性变化与细胞周期进展之间的关系。方法台盼蓝拒染法计数活细胞,流式细胞术观察细胞周期分布,端粒重复序列扩增法(TRAP)、聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染法检测端粒酶活性。结果生长曲线显示DMSO对CAOV3细胞具有生长抑制作用,且具有浓度和时间依赖性。经1.4%DMSO作用96h后,CAOV3细胞主要受阻于G0/G1期,其端粒酶活性完全被抑制。去除药物后,细胞逐渐由G0/G1期向S期过渡,其端粒酶活性亦逐渐恢复,并于去除药物24h时,S期细胞百分率与端粒酶活性均明显高于用药前水平。结论DMSO对CAOV3细胞具有可逆性阻滞细胞周期进展,并下调其端粒酶活性的作用。CAOV3细胞端粒酶活性表达可能存在细胞周期依赖性调节。

脑梗死后远隔部位小脑皮层Nogo-A蛋白表达

目的探讨大鼠脑缺血后不同时间轴突生长抑制因子Nogo-A在远隔部位小脑皮质的动态表达。方法 60只大鼠随机分为假手术组(n=30只)和大脑中动脉闭塞组(n=30只),每组分为1、3、5、7和10 d五个不同的亚组;采用改良的ZeaLonga法制备大鼠大脑中动脉闭塞模型;HE染色观察小脑皮质组织形态学改变;免疫组化染色检测小脑皮质Nogo-A蛋白的表达。结果 Nogo-A蛋白免疫反应性细胞广泛分布于小脑皮层少突胶质细胞(OLG)构成的髓鞘区域,主要位于OLG(胞体小、胞浆少和突起少)的细胞浆,并于脑缺血后第5 d、7 d和10 d较假手术组明显增高(P<0.05),第1 d和3 d无统计学差异(P>0.05)。结论大鼠大脑中动脉闭塞后远隔部位小脑皮层Nogo-A主要由OLG表达且呈动态变化。

PGE_2在内毒素诱导的幼鼠急性胃黏膜损伤中的变化及PAF受体拮抗剂对其影响

目的:探讨前列腺素E2(PGE2)在内毒素(LPS) 腹腔注射(ip)诱导的幼鼠急性胃黏膜损伤中的保护作用．方法:18日龄Wistar大鼠,随机分为对照组、 LPS组、PAF受体拮抗剂预防组和治疗组四组.用内毒素(E coli O55:B5脂多糖)5 mg／kg ip 制备幼年大鼠内毒素血症模型,同等量生理盐水ip为对照组,于注射后1．5,3,6,24,48． 72 h处死动物,大体及光学显微镜下观察胃黏膜损伤情况,用放射免疫方法测定胃黏膜 PGE2浓度．观察分别于内毒素ip前和注射后 0．5h应用血小板活化因子(PAF)受体拮抗剂 BN52021(GinkgolideB)5 mg/kg ip对胃黏膜损伤和胃黏膜PGE2浓度影响．结果:内毒素组6h胃黏膜损伤最重,黏膜表面可见大片糜烂、出血、条索状坏死,光镜下上皮脱落,黏膜内有出血,核碎裂、固缩,凋亡小体出现;应用PAF受体拮抗剂后黏膜表面上皮仅见充血水肿,光镜下损伤仅限于黏膜上皮:内毒素组6h胃黏膜PGE2浓度最低,此时 PGE2浓度在LPS组(134．5±9.3μg／L)与对照组 (245．1±8．9 μg／L)间差异显著(P<0．01);在PAF 受体拮抗剂预防组(304．4±15．0μg／L)、PAF 受体拮抗剂治疗组(315．9±43．7 μg／L)与LPS 组(134．5±9．3 μg／L)间均差异显著(P<0．01); PAF受体拮抗剂预防组(304．4±15．0μg／L)和治疗组(315．9±43．7μg／L)与对照组(245．1± 8．9μg/L)间差异显著(P<0．05)．结论:内毒素血症时胃黏膜PGE2下降,PAF受体拮抗剂可以改善这种PGE2下降;PGE2对内毒素造成的幼鼠急性胃黏膜损伤有保护作用．

Bcl-2和Bax蛋白在大鼠脑缺血预处理脑组织中的表达及意义

目的:探讨Bcl2和Bax蛋白在大鼠局灶性脑缺血预处理脑组织中的表达及意义。方法:线栓法阻断SD大鼠大脑中动脉建立脑缺血预处理及脑缺血模型。TTC染色法测量脑梗死体积,免疫组织化学检测前脑皮质、基底核Bcl2和Bax蛋白的表达。结果:与缺血组相比,预处理缺血组脑梗死体积明显减小(P<0.01),Bcl2蛋白表达细胞数明显增加(P<0.01),Bax蛋白表达减少(P<0.05)。结论:缺血预处理诱导Bcl2蛋白表达增加和Bax蛋白表达下降可能是缺血预处理诱导抗凋亡、产生脑保护机制的原因之一。

胰岛素样生长因子-1对局灶性脑缺血/再灌注脑损伤保护机制的研究

目的建立单侧大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤模型,研究胰岛素样生长因子-(1IGF-1)对局灶性脑缺血/再灌注损伤影响的可能机制。方法54只SD大鼠建立局灶性脑缺血/再灌注模型,随机分成假手术对照组(6只)、脑缺血/再灌注组(24只)、IGF-1治疗组(24只),各组按再灌注时间不同进一步分为24、48和72h3个亚组。用TTC染色法测量各组脑梗死体积,用原位末端标记技术和免疫组织化学方法对各组大鼠脑缺血中心及周围区神经细胞的凋亡和Bcl-2蛋白表达进行检测。结果TTC染色结果显示,与缺血/再灌注组相比,IGF-1治疗组脑梗死体积明显减小(3个时间段t值分别为:t=3.544,4.559,4.271;均P<0.05);凋亡检测结果显示,与缺血/再灌注组相比,IGF-1治疗组凋亡细胞数明显减少(3个时间段t值分别为:t=5.516,P<0.001;t=4.281,P<0.01;t=3.602,P<0.01);免疫组织化学检测结果显示,与缺血/再灌注组相比,IGF-1治疗组Bcl-2蛋白表达的细胞数明显增加(3个时间段t值分别为:t=14.362、7.065和7.273;均P<0.001)。结论IGF-1可明显减小脑梗死体积,减少凋亡细胞数,促进Bcl-2蛋白表达增加可能是IGF-1产生脑保护机制的原因之一。

Iodogen法^(125)I标记重组人粒细胞集落刺激因子的研究

采用Iodogen(四氯二苯基苷脲 )法进行12 5 I标记重组人粒细胞集落刺激因子 (rhG CSF) ,标记物用SephadexG 2 5柱凝胶过滤法分离、纯化 ,用薄层层析法和三氯醋酸法鉴定标记物的放射化学纯度、游离碘率及碘标记率和标记物的稳定性。结果标记物的放化纯度为 97.8% ,碘标记率为 78.4% ,比活度为 86.3 4TBq/mmol。用Iodogen法12 5 I标记rhG CSF ,方法简便、标记率高。

ABO^＊cisAB．03．1．1/ABO^＊ O．02．01．1基因型患者的血型检测及分析

目的明确ABO血型血清学实验发现的患者正反定型不符情况的血型基因型。方法因贫血申请输注红细胞悬液的糖尿病患者,ABO血型检测发现其正反定型不符,应用血型血清学实验A1和A2亚型的分型、T抗原检测以及血清不规则抗体检测方法判定其血清学表型,ABO基因分型及测序技术判定其血型基因型。结果患者红细胞与花生血凝素不发生凝集反应,血清不规则抗体筛查阴性;患者红细胞与抗-A凝集,与抗-A1不凝集,患者血清与A1标准红细胞呈现较强凝集反应,与A2标准红细胞不发生凝集;EXON6 1条等位基因存在261G的缺失,EXON7序列非O等位基因出现700T/C,EXON7测序结果显示突变点为526C/G,646A/T,657C/T,700C/T,703G/A,771C/T,796A/C,829G/A,803G/C,930G/A。结论我们发现该患者血清学方法表现为A2B血型,基因分型为少见的ABO* cisAB.03.1.1/ABO* O.02.01.1。

5-Aza-CdR体外诱导胃癌细胞系p16基因去甲基化及表达增强

目的:观察去甲基化制剂——5-Aza-CdR对体外培养的胃癌细胞SGC7901p16基因启动子区甲基化状态及表达的影响,探讨胃癌细胞p16基因失活的机制及去甲基化制剂对p16基因表达的调控.方法:应用不同浓度的5-Aza-CdR(1×10-7,5×10-7,1×10-6,5×10-6mol/L)处理体外培养的胃癌细胞SGC7901后,MSP法检测用药前后细胞中p16基因的甲基化状态,RT-PCR及Western-blot法检测用药前后细胞中p16基因mRNA及蛋白表达的变化.结果:p16基因在胃癌细胞系SGC7901中启动子区呈异常甲基化状态,在mRNA及蛋白水平低表达.经过1×10-7,5×10-7,1×10-6,5×10-6mol/L5-Aza-CdR处理后,p16基因启动子区呈去甲基化状态,各组mRNA及蛋白表达相应的比值分别与处理前的比例为2.21±0.36,2.01±0.31;2.82±0.39,2.22±0.33;2.98±0.42,3.15±0.43及3.35±0.55,3.75±0.61.结论:5-Aza-CdR能逆转胃癌细胞p16基因甲基化状态,调控p16基因表达.

血小板活化因子对幼鼠肠道免疫屏障功能的影响

目的:探讨血小板活化因子(plateletactivatingfactor,PAF)对肠黏膜分泌型IgA(secretoryIgA,SIgA)的影响.方法:用50μg/kg和65μg/kgPAF对大鼠进行腹腔注射(1μL/g),不同时间点处死动物,应用双抗体-PEG放射免疫法测定肠黏膜中SIgA含量,常规苏木精-伊红染色,光镜观察形态学改变.结果:PAF65组回肠0.5,1.5,3h可见绒毛水肿,固有层血管充血,间质淋巴管扩张,肠腔炎性渗出,上皮脱落,6,24h绒毛水肿.PAF50组0.5,1.5h可见绒毛水肿,固有层血管充血,3,6,24h绒毛水肿.实验组0.5,1.5,3,6hSIgA均较对照组显著降低(PAF50组分别为0.31±0.03mg/L,0.40±0.10mg/L,P<0.01,0.43±0.13mg/L,0.46±0.11mg/L,P<0.05;PAF65组分别为0.28±0.07mg/L,0.36±0.08mg/L,P<0.01,0.40±0.11mg/L,0.42±0.06mg/L,P<0.05vs0.66±0.10mg/L).0.5h下降幅度最大,随时间推移有逐渐升高趋势.结论:PAF可损害肠黏膜的免疫屏障功能,使SIgA降低.

^(99)Tc^m-HL91在大鼠缺血脑内分布的放射自显影观察

目的探讨99Tcm-4,9-二氮-3,3,10,10-四甲基十二烷-2,11-二酮肟(HL91)在大鼠局灶性脑缺血脑内的动态分布规律。方法用线栓法建立大鼠局灶性脑缺血模型,SD大鼠42只分为2组:①预处理脑缺血组(21只),脑缺血预处理20min,再灌注3d后再次脑缺血2h;②脑缺血组(21只),脑缺血2h。两组按再灌注时间不同(5、30min及1、2、4、8、12h)又各分为7个亚组,每组3只。用γ测量和放射自显影方法,观察99TcmHL91在大鼠局灶性脑缺血脑内的动态分布规律。结果γ测量结果示,注药后5min～2h,两组患侧与健侧脑组织单位质量放射性比值(TNT)均为1.0左右,差异无显著性(P>0.05);注药后4h两组TNT明显增加,4、8、12h预处理脑缺血组TNT分别为1.57±0.13、1.93±0.06、2.25±0.17,与同组2h比较,差异均有显著性(P均<0.01),脑缺血组TNT分别为1.22±0.12、1.59±0.07、1.94±0.09,与同组2h比较,差异均有显著性(P<0.05～0.001);注药后4、8、12h预处理脑缺血组与脑缺血组间两两比较,差异均有显著性(P均<0.05)。放射自显影结果示,注药后5min～2h,两组患侧和健侧脑组织银颗粒主要分布于细胞间质和毛细血管中,细胞内分布较少;注药后4h,两组患侧银颗粒主要分布于脑组织神经细胞内,而细胞间质和毛细血管内分布较少;两组8、12h亚组分布规律与4h亚组相同;

丁酸钠联合阿霉素对HeLa细胞端粒酶活性的影响

目的研究阿霉素(ADR)与丁酸钠(NaBu)联用对HeLa细胞增殖和端粒酶活性的影响。方法MTT法检测NaBu、ADR以及两药联用的药效动力学特征;TRAP-银染法检测端粒酶活性;RT-PCR法检测hTERT mRNA表达。结果NaBu、ADR以及两药联用均可抑制HeLa细胞生长,ADR单独作用HeLa细胞48h的IC50为6000nmol/L,与1mmol/L的NaBu联用后降为320nmol/L,两组均呈剂量依赖性。ADR组和NaBu+ADR组的端粒酶活性随ADR浓度增加而降低,呈剂量依赖性,在ADR浓度为100nmol/L时差异有统计学意义(P<0.05);hTERT mRNA表达与端粒酶的变化趋势一致,在ADR浓度为10nmol/L、100nmol/L浓度时差异有统计学意义(P<0.05)。结论NaBu和ADR均可抑制HeLa细胞增殖,联合应用具有协同效应,与抑制端粒酶活性、下调hTERT mRNA表达有关。

NF-κB、Bcl-2和Bax蛋白在大鼠脑缺血预处理脑组织中的表达及意义

目的探讨核转录因子-κB(NF-κB)、凋亡调控蛋白Bcl-2、Bax在大鼠局灶性脑缺血预处理脑组织中的表达及意义。方法线栓法阻断SD大鼠大脑中动脉建立脑缺血预处理及脑缺血模型。TTC染色法测量脑梗死体积,免疫组织化学方法检测前脑皮质、基底核NF-κB、Bcl-2和Bax蛋白的表达。结果与缺血组相比,预处理缺血组脑梗死体积明显减小(p<0.01),NF-κB蛋白和Bax蛋白表达的细胞数减少(p<0.001),Bcl-2蛋白表达细胞数明显增加(p<0.001)。结论缺血预处理可有效抑制NF-κB的激活并减少神经元的凋亡,Bcl-2蛋白表达增加和Bax蛋白表达下降可能是缺血预处理产生耐受的原因之一。

miR-125b在上皮性卵巢癌组织中的表达及意义

目的探讨miR-125b在上皮性卵巢癌组织中的异常表达及意义。方法采用Real-time RT-PCR方法检测24例人上皮性卵巢癌组织及15例正常卵巢组织中miR-125b的表达水平。结果上皮性卵巢癌组织中的miR-125b表达水平显著低于正常组织。结论 miR-125b可能在人类上皮性卵巢癌的发生发展中具有重要作用。

端粒酶hTERT基因转录调节的研究进展

端粒酶是维持端粒长度的一种逆转录酶,对细胞增殖和癌变起重要作用。端粒的磨耗限制大多数体细胞的复制,肿瘤细胞主要通过转录上调端粒酶限制成分———催化亚基端粒酶逆转录酶(hTERT)维持端粒长度。进一步认识端粒酶hTERT基因表达的调节机制,对肿瘤的诊断、防治有着重要意义。现就近几年来E-box结合蛋白、核激素、肿瘤相关病毒蛋白和RNAi抑制hTERTmR-NA表达及其他因素调节端粒酶hTERT基因表达作一综述。

甲磺酸甲酯对CAOV3细胞端粒酶活性的影响

目的:探讨卵巢癌细胞CAOV3经烷化剂甲磺酸甲酯(MMS)作用后端粒酶活性变化与生长状态之间的关系。方法:台盼蓝拒染法计数活细胞,噻唑蓝(MTT)法测定药物作用浓度,流式细胞术观察细胞凋亡,端粒重复扩增法(TRAP)、聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染法检测端粒酶活性。结果:用药组与未用药组活细胞百分率无显著差异。MMS主要使CAOV3细胞受阻于S期,未见凋亡峰。用药组与对照组相比较端粒酶活性增强。结论:MMS对CAOV3细胞端粒酶活性有上调作用。CAOVB细胞对MMS的抗凋亡效应可能与端粒酶活性上调有关。

端粒结构及其相关蛋白对端粒长度调控的研究进展

哺乳类动物染色体末端由一段特殊的TTAGGG重复序列及其相关蛋白组成 ,并形成T环和D环结构 ,称作端粒。端粒 3′伸出端由于富含碱基G ,可形成稳定的G 四联体结构。端粒自身的这些结构及其相关蛋白TRF1、TRF2、TIN2、端锚聚合酶等对端粒长度起着重要的调控作用。

紫外线诱导的人晶状体上皮细胞氧化损伤与小窝蛋白1 mRNA表达量下降有关

目的紫外线(UV)照射导致的氧化损伤是晶状体上皮细胞凋亡的原因之一,而小窝蛋白(Caveolin)参与晶状体上皮细胞凋亡过程。本实验拟研究紫外线造成的氧化损伤中Caveolin-1表达变化与晶体上皮细胞凋亡之间的关系,同时探讨阿司匹林(ASA)作为抗氧化剂对Caveolin-1表达及晶状体上皮细胞凋亡的影响。方法 UVB(4.43 mw/cm2)照射人晶状体上皮细胞系SRA01/04(0 s,5 s,10 s,20 s),按照是否加入阿司匹林分为实验组和对照组。分别检测实验组和对照组细胞活性;利用AnnexinV-EGFP法检测细胞凋亡率;real time RT-PCR方法定量分析Caveolin-1 mRNA的量随照射剂量不同,及加入抗氧化剂前后所产生的变化。结果随UV照射时间延长,单纯紫外线照射组细胞活性,Caveolin-1 mRNA表达量下降,细胞凋亡率增加。加入阿司匹林后,细胞活性增加。5 s,10 s组Caveolin-1 mRNA的表达量较对照组升高,细胞凋亡率较对照组下降(P<0.05)。但是照射20 s的条件下,加药后的细胞凋亡率及Caveolin-1 mRNA的表达量较未加药组无变化(P>0.05)。结论 UV照射可造成人晶状体上皮细胞凋亡,Caveolin-1 mRNA表达量减少,推测Caveolin-1表达量的变化可能与凋亡有关。低剂量的阿司匹林(3μmol/L)可以在一定程度上减少UV照射造成的晶状体上皮细胞凋亡,增加Caveolin-1的表达;但大剂量阿司匹林(>30μmol/L)会起到相反的作用,因此找到一个合适安全的剂量范围具有一定临床意义。

DEK原癌基因与口腔鳞状细胞癌的关系

目的:研究原癌基因DEK在口腔鳞状细胞癌组织中的表达及意义,探讨DEK在口腔鳞状细胞癌发病及转移机制中的作用。方法:采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测33例口腔鳞状细胞癌病灶组织、28例口腔鳞癌转移淋巴结组织和33例癌旁组织中DEK mRNA的表达,并用免疫组织化学法检测DEK蛋白在3种组织中的表达,应用SPSS17.0软件包对结果进行统计学分析。结果 :DEK mRNA及DEK蛋白在口腔鳞状细胞癌转移淋巴结(82.1%、82.1%)和口腔鳞状细胞癌病灶组织(81.2%、76.8%)中的阳性表达率均高于癌旁组织(27.3%、18.2%),且DEK mRNA及DEK蛋白在病灶组织和癌旁组织中的表达差异均具有显著性(P<0.05)。结论:DEK基因在人口腔鳞状细胞癌的发生、发展中起着重要作用。