人巨细胞病毒感染致血管内皮细胞损伤机制的研究

目的观察人巨细胞病毒(HCMV)感染对人血管内皮细胞氧化应激的影响及对血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)和糖基化终产物受体(RAGE)时序性表达的影响,研究HCMV感染致动脉粥样硬化(AS)的作用机制。方法用HCMV感染血管内皮细胞,用激光共聚焦显微镜检测细胞内活性氧(ROS)的改变;采用RT-PCR方法检测不同感染时段细胞VCAM-1及RAGEmRNA的表达。结果HCMV感染血管内皮细胞后,HCMV组荧光强度显著高于对照组(P<0.01)。感染0 h时,VCAM-1 mRNA有基础水平的表达,4 h开始升高,8 h时达高峰,12 h开始回落,24 h回落更明显,与0 h比较,均有统计学意义(P<0.01),48 h接近0 h表达水平(P>0.05)。感染0 h时,RAGEmRNA有基础水平的表达,4 h开始升高,8 h时表达水平明显升高,随感染时间延长,表达量逐渐增高,感染24 h时达高峰,48 h开始回落,仍维持在较高的水平,各时段与0 h比较,均有统计学意义(P<0.01)。结论HCMV感染血管内皮细胞后能够增强氧化应激,促进VCAM-1及RAGE的mRNA表达,并且呈时间依赖性。HCMV有可能通过增强氧化应激、上调VCAM-1及RAGE的表达介导血管内皮细胞的炎症反应,促进动脉粥样硬化的发生、发展。

祛毒养心冲剂对病毒性心肌炎的疗效及机制

目的探讨祛毒养心冲剂对病毒性心肌炎(VMC)的疗效及作用机制。方法将60只小鼠随机分为正常对照组、病毒组、药物组,每组20只。后两组小鼠每只腹腔注射柯萨奇病毒(CVB3)液,正常对照组腹腔注射不含病毒的Eagle′s液。药物组于接种病毒后24 h灌胃给予祛毒养心冲剂。21 d后,处死所有小鼠并取其心脏。进行心肌病理检查,采用实时荧光定量PCR法和免疫组化技术检测心肌组织中白细胞介素-6(IL-6)mRAN和蛋白的表达。结果与病毒组相比,应用祛毒养心冲剂治疗后,小鼠心肌组织病变积分显著下降(P<0.05),心肌组织中IL-6的表达明显降低(P<0.05)。结论祛毒养心冲剂对VMC具有明显治疗作用,其作用机制是通过抑制IL-6在心脏中的表达而实现的。

巨细胞病毒感染人脐静脉内皮细胞后RAGEmRNA的时序性表达及其意义

目的:研究人巨细胞病毒(HCMV)感染对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)糖基化终产物受体(RAGE)表达的影响,探讨HCMV感染致动脉粥样硬化的作用机制。方法:用HCMV感染HUVEC,采用RT-PCR方法检测不同感染时段细胞RAGEmRNA的表达。结果:HCMV感染HUVEC后,0 h时RAGEmR-NA有基础水平的表达,4 h开始升高,8 h时表达水平明显升高,随感染时间延长,表达量逐渐增高,感染24 h时达高峰,48 h开始回落,72 h表达量仍维持在较高的水平,显著高于0 h。各时段与0 h比较,均有统计学意义(P<0.01)。结论:HCMV感染人脐静脉内皮细胞后能够促进RAGE mRNA的表达,并且呈时间依赖性。HCMV有可能通过上调RAGE介导内皮细胞的炎症反应,促进动脉粥样硬化的发生、发展。

巨细胞病毒感染致人脐静脉内皮细胞E选择素时序性的表达

目的:观察人类巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)作用于血管内皮细胞(vein endothelialcells,ECV)对E选择素时序性的表达,探讨HCMV感染致动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)发生和发展的可能机制。方法:用HCMV感染ECV,采用RT-PCR方法检测不同感染时段细胞E选择素mRNA及蛋白的表达。结果:HCMV感染ECV后,感染0 h时E选择素mRNA有基础水平的表达,4 h升高并达高峰,8 h时开始回落,12 h回落显著,24 h回落更明显,与0 h比较,差异均有统计学意义(P<0.01),48 h接近0 h表达水平(P>0.05)。结论:HCMV感染ECV后能够促进E选择素表达,并且呈时间依赖性。HCMV有可能通过上调E选择素的表达,介导ECV的炎症反应,促进AS的发生、发展。

荧光巨细胞病毒的构建及活性检测

目的构建表达绿色荧光蛋白的巨细胞病毒Towne株,检测其活性,研究其在抗巨细胞病毒药物筛选中的应用价值。方法将PHM673质粒扩增纯化,采用脂质体转染法转入原代培养的人胚肺成纤维细胞,感染人巨细胞病毒,获得重组病毒GFP-HCMV,采用空斑法纯化重组病毒,采用PCR法鉴定,获得携带绿色荧光蛋白的重组巨细胞病毒。用抗病毒药物更昔洛韦进行干预,检测重组病毒荧光表达强度与药物浓度的关系。结果成功构建携带绿色荧光蛋白的重组巨细胞病毒,荧光病毒的活性与原始病毒的活性差异无统计学意义(P>0.05),生长繁殖并没有受到影响。重组病毒的荧光表达强度与抗巨细胞病毒药物更昔洛韦抑制病毒的效价有关。结论该荧光病毒可以作为研究病毒致病机制和抗病毒药物筛选的新型工具。