胎儿骨髓和肝脏间充质干细胞的表型和生物学性状研究

为研究胎儿骨髓和肝脏间充质干细胞的表型和生物学性状 ,取胎龄为 4 - 5个月水囊引产胎儿 ,将骨髓和肝脏细胞在SF(含 2 %FCS)培养基中培养 ,进行电镜观察 ,测定生长曲线 ,用流式细胞术对培养细胞进行表型测定 ,细胞周期分析 ,用SA方法测定Ⅰ ,Ⅲ型胶原和vWF因子表达。结果表明 :从胎儿骨髓和肝脏培养出的间充质干细胞 ,两者在形态学、生长特性、免疫表型上是相似的 ,肝脏间充质干细胞有更好的支持造血的功能。结论提示 ,从胎儿骨髓和肝脏可分离培养出间充质干细胞 ,在体外有效扩增且保持其低分化状态。

肝素促进脐血巨核祖细胞体外扩增

目的 :探索肝素在脐带血CD34+ 细胞定向扩增巨核祖细胞中的作用。方法采用免疫磁珠法 (MACS)分选CD34+ 细胞 ,在TPO ,IL 1 1的扩增体系中加入肝素 ,巨核祖细胞集落分析 (CFU MK)测定巨核祖细胞扩增倍数 ,流式细胞仪检测巨核祖细胞分化过程中的特异性标记 (CD34+ ,CD41a+ ,CD61 + ,CD34+ CD41a+ ,CD41a+ CD61 + ) ,巨核细胞特异性抗体 (CD41a)免疫组化染色和透射电镜观察鉴定巨核细胞形态及超微结构 ,血小板体外活化实验及NOD SCID小鼠异种体内移植实验评价扩增的巨核祖细胞的功能。结果 :TPO( 5 0ng ml)与IL 1 1 ( 5 0ng ml)双因子联合应用 ,7天巨核祖细胞克隆扩增倍数为 83 1 7± 39 41倍 ,1 0天为 2 0 5 0 6± 74 2 6倍 ,流式细胞仪分析显示 7天CD34+ CD41a+ 细胞扩增 1 0 5 1± 4 79倍 ,0天加入肝素后 ,7天巨核祖细胞克隆扩增倍数为 1 0 8 2 5± 32 67倍 ,1 0天为 333 0 6± 2 7 5 4倍 ,7天CD34+ CD41a+ 细胞扩增到 2 9 93± 6 39倍 ,为无肝素组的 2 85倍 ,与双因子组相比有统计学差异 (P <0 0 1 ) ,肝素在第 5天及第 7天加入没有增加巨核祖细胞扩增效果。经全身照射预处理的NOD SCID小鼠静脉输注扩增第 7天的巨核细胞 (TPO、IL 1 1、肝素联合 ) 。

纤维蛋白封闭剂复合人胚关节软骨细胞体内构建可注射性软骨

目的：研究以纤维蛋白封闭剂（FS）为载体，复合人胚关节软骨细胞，体内构建可注射性组织工程软骨的可行性。方法：常规分离消化，体外单层培养胎儿关节软骨细胞，观察软骨细胞的生物学特性。分别将1×10^7、2×10^7、3×10^7第4代软骨细胞与FS混合接种于裸鼠皮下，并于第10周取材判断体内形成软骨的能力。结果：3～4代软骨细胞保持了很高的增殖和分泌基质的能力。软骨细胞与FS的复合物体内接种后各组均可形成软骨样组织块，其湿重、GAG含量随着接种细胞数量的增多而增高，各组之间差异具有显著性（P〈0．05）。3×10^7细胞组GAG含量与正常人胚关节软骨没有差异（P〉0．05）。组织切片显示软骨细胞位于类似正常软骨组织的陷窝中，阿尔新蓝染色及Ⅱ型胶原表达阳性，细胞内富含高尔基体、粗面内质网及大量分泌泡。结论：FS和人胚关节软骨细胞可以作为理想的支架材料和种子细胞应用于可注射软骨组织的构建。