APP17肽对心肺复苏大鼠海马神经元NGF、BDNF表达的影响

目的观察心肺复苏术后大鼠海马神经元神经生长因子(nerve growth factor,NGF)、脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)表达的变化,以及APP17肽对NGF、BDNF表达的影响。方法采用窒息法制作大鼠呼吸心跳骤停模型,然后行心肺复苏术(cardiopulmonary re-suscitation,CPR)。♂性Wistar大鼠18只,随机分3组:手术对照组(A组)、心肺复苏组(B组)、心肺复苏+APP17肽组(C组),复苏至自主循环恢复(return of spontaneous circula-tion,ROSC)时静脉注射APP17肽10μg·(300g)-1。应用免疫组化方法观察各组大鼠复苏2h后海马神经元表达NGF、BDNF情况。结果与对照组(A组)相比心肺复苏组(B组)大鼠海马神经元NGF、BDNF表达明显降低(P<0.05);心肺复苏+APP17肽组(C组)NGF、BDNF表达明显增加,高于B组和A组(P<0.01)。结论心肺复苏模型大鼠自主循环恢复2h海马神经元NGF、BDNF表达降低,APP17肽能恢复神经元NGF、BDNF的表达,对缺血、缺氧性神经元损伤有保护作用。

p27^Kip1在RA诱导人神经前体细胞分化中的作用

目的观察全反式视黄酸(RA)对体外培养的人神经前体细胞的诱导作用,研究在这个过程中细胞周期调节蛋白p27Kip1、p21Cip1及相关分子cdk2、cyclinE的变化,探讨p27Kip1在RA诱导的人神经前体细胞分化过程中的作用。方法取12wk的人胚胎前脑纹状体,原代培养人神经前体细胞。在细胞进入对数生长期时给予1μmol·L-1RA诱导。在诱导的d1、3、7,用相差显微镜观察细胞形态的变化;用免疫细胞化学染色、RT-PCR等方法检测p27Kip1、p21Cip1及其相关的cdk2、cyclinE的变化。结果在RA诱导d3,人神经前体细胞形态发生变化,至d7时已接近成熟神经元形态。免疫细胞化学染色结果显示p27Kip1的表达在RA诱导d3增加,在RA诱导d7时明显增加,与未经RA诱导的细胞相比差异有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR结果显示,p27Kip1 mRNA的表达在RA诱导d3增加,并在RA诱导d5达到高峰,而p21Cip1 mRNA的表达在RA诱导后略呈下降趋势。cdk2、cy-clinE的mRNA水平在RA诱导前后没有明显变化。结论p27Kip1在RA诱导的人神经前体细胞分化过程中具有重要作用,并且其表达增加是通过转录水平调节的。

多肽P165对糖尿病小鼠学习记忆功能及海马神经元蛋白表达的影响

目的研究多肽P165对糖尿病模型小鼠学习记忆能力及海马神经元蛋白表达的影响。方法用链脲佐菌素诱发小鼠糖尿病模型,应用P165(0.07,0.17,0.3mg·kg-1)灌胃治疗,5wk后进行Morris水迷宫试验;小鼠脑组织海马做Akt、PI3K、P-CREB、Bcl-2、Bax、CytoC免疫组织化学染色;另一部分鼠脑海马,做Bcl-2、Bax抗体蛋白免疫印记。结果①水迷宫试验:糖尿病模型小鼠到达站台游动时间比正常对照组延长(P<0.01);而P165(0.07,0.17,0.3mg·kg-1)灌胃治疗组较DM组动物分别缩短(P<0.01)。②神经免疫组织化学实验及Westernblot结果:糖尿病给予P165小鼠与对照组小鼠海马组织内神经元表达细胞存活相关蛋白及抗凋亡相关蛋白PI3K、Akt、P-CREB、Bcl-2阳性细胞数相似,明显高于糖尿病小鼠(P<0.01);糖尿病给予P165小鼠与对照组小鼠表达凋亡蛋白Bax、CytoC阳性细胞数相似,明显少于糖尿病小鼠(P<0.05)。Westernblot结果相同。结论糖尿病小鼠海马神经元表达细胞存活相关蛋白下降,神经元表达细胞凋亡相关蛋白增加,导致其学习记忆能力下降。P165应用可以使上述蛋白恢复到接近正常,从而改善糖尿病小鼠学习记忆能力。

APP17肽对心肺复苏大鼠海马神经元IR IRS-1表达的影响

目的观察APP17肽对心肺复苏大鼠海马神经元CA1区胰岛素受体(IR)、胰岛素受体底物-1(IRS-1)表达的影响。方法24只SD大鼠随机分为3组：假手术对照组(对照组)、心肺复苏组(复苏组)、APP17肽组,每组8只。用室息法制作大鼠心肺复苏模型。APP17肽组于自主循环恢复(ROSC)时立即静脉注射APP17肽3．33μg/100 g体质量,约5 mL；对照组和复苏组给予等剂量生理盐水。2 h后断头取脑行免疫组化染色,观察3组大鼠海马CAl区神经元IR、IRS-1表达的变化。结果与对照组相比复苏组大鼠海马CA1区IR、IRS-1染色阳性神经元明显减少(P＜0．05-0．01)差异有统计学意义；与复苏组相比APP17肽组IR、IRS-1阳性神经元明显增加,差异有统计学意义(P＜0．05～0．01)。结论心肺复苏大鼠海马神经元IR、IRS-1表达降低,复苏早期给予APP17肽干预可使其表达恢复正常或接近正常。

术后激光对巩固玻璃体切割治疗增殖性糖尿病视网膜病变手术效果的观察

目的：观察玻璃体切割结合氩激光治疗增殖性糖尿病视网膜病变（proliferative diabetic retinopathy，PDR）的效果，探讨术后激光治疗对于巩固手术效果的作用。方法：49例53眼PDR病例均行玻璃体切割结合术中眼内氩激光全视网膜光凝治疗，延长术后观察时间至12～36mo，复查时及时行荧光眼底血管造影（fundus fluorescein angiography，FFA）检查后补打激光，临床观察术后12～36mo中视力的恢复情况及PDR控制情况。结果：行玻璃体切割结合术中全视网膜光凝的53眼中，视力有不同程度提高者42眼（79％），视力不变者5眼（10％），视力下降者6眼（11％）。在观察的12～36mo中，47例51眼补打激光，53眼视力稳定，未出现糖尿病视网膜病变的进展。结论：玻璃体切割结合眼内氩激光全视网膜光凝是治疗与控制PDR行之有效的方法，延长术后观察时间并及时补打激光对巩固手术效果起到一定的作用。

APP5肽对糖尿病小鼠学习记忆功能与海马神经元蛋白表达的影响

目的研究APP5肽对糖尿病模型小鼠学习记忆能力及海马神经元蛋白表达的影响。方法用链脲佐菌素诱发小鼠糖尿病模型,应用APP5肽(0.0014 mg/kg)皮下注射治疗,5周后进行Morris水迷宫试验;小鼠脑组织海马做Akt、PI3K、P-CREB、Bcl-2、Bax、CytoC免疫组织化学染色;另一部分鼠脑海马,做Bcl-2、Bax抗体蛋白免疫印记。结果(1)水迷宫试验:糖尿病模型小鼠到达站台游动时间比正常对照组延长(P<0.01);而APP5肽皮下注射治疗组较DM组动物分别缩短(P<0.01)。(2)神经免疫组织化学实验和Western blot:给予APP5肽糖尿病小鼠与对照组小鼠海马组织内神经元表达细胞存活相关蛋白及抗凋亡相关蛋白PI3K、Akt、P-CREB、Bcl-2阳性细胞数相似,明显高于糖尿病小鼠(P<0.01);APP5肽给予糖尿病小鼠与对照组小鼠表达凋亡蛋白Bax、cytoC阳性细胞数相似,明显少于糖尿病小鼠(P<0.01)。Western blot结果相同。结论糖尿病小鼠海马神经元表达细胞存活相关蛋白下降,神经元表达细胞凋亡相关蛋白增加,导致其学习记忆能力下降。APP5肽应用可以使上述蛋白恢复到接近正常,从而改善糖尿病小鼠学习记忆能力。

基底前脑胆碱能神经元损毁:一种老年性痴呆方法学动物模型的复制及应用要点

目的介绍一种老年性痴呆的方法学动物模型-基底前脑胆碱能神经元损毁模型的复制及应用要点，以及该模型比较生物学研究的有关进展。方法采用鹅膏覃氨酸基底前脑区Maynert基底核定位注射造模，通过水迷宫实验测试动物的学习记忆能力。结果该手术方法能造成动物学习记忆能力下降，但各组内动物个体差异极大，变异系数为27.1％-46．2％。以正常动物平均成绩的95％置信区间为标准。对造模的成功率进行筛选，表明该模型的成功率为50％～75％，说明了进行模型筛选的重要意义。结论基底前脑胆碱能神经元损毁模型对老年性痴呆研究具有重要价值，但在应用中需要注意有关方法学问题。

β淀粉样肽前体蛋白N端328-332类似物165对谷氨酸引起神经毒作用的影响

目的通过观察β淀粉样肽前体蛋白N端328-332(APP5肽)类似物165对谷氨酸引起神经毒性作用的影响,进一步证实APP5肽类似物165的神经营养作用。方法以人神经母细胞瘤株SY5Y为细胞模型,分为正常对照组、谷氨酸500μmol/L损伤组和谷氨酸500μmol/L加APP5肽及类似物165各40μmol/L保护组。以MTT代谢率、LDH漏出率、细胞轴突长度和胞体面积作为观察指标。结果与正常对照组相比,谷氨酸损伤组MTT代谢率降低,LDH漏出率升高,轴突长度和胞体面积均缩小;而加入APP5肽及类似物165保护后,可使上述指标得以改善。结论APP5肽及类似物165具有神经营养作用,可减轻谷氨酸引起的神经元损伤。

痰瘀阻窍证高脂血症大鼠学习记忆能力的动态变化

目的观察以高脂饲料喂饲大鼠建立的高脂血症动物模型在学习记忆能力方面的动态变化,探讨痰浊血瘀动物模型向痰瘀阻窍证发展的规律。方法雄性SD大鼠,自由进食高脂饲料2周、4周、8周、16周后,采用Morris水迷宫和物体识别的实验方法检测模型大鼠学习记忆能力的时程变化特点。结果Morris水迷宫试验结果表明,与对照组比较,高脂饲料喂养4周起,大鼠的学习记忆能力明显下降,16周时最为显著,表现为逃避潜伏期延长,目标象限时间百分比减少。物体识别试验结果表明,高脂饲料喂养2周起,大鼠学习记忆能力有所下降,8周起下降明显,16周时最为显著,表现为新旧物体分辨指数下降,物体探索时间减少。结论高脂血症大鼠随着造模时间的延长,出现学习记忆能力逐渐减低的动态变化,以16周时最为显著,提示痰瘀阻窍证随着大鼠痰浊血瘀证时间的延长而呈现出加速型进展,可作为研究中医痰瘀阻窍证的动物模型。

中医痰浊血瘀证候的生物学基础研究

目的:动态观察高脂饲料对大鼠血液指标的影响,探讨中医"痰浊"、"血瘀"证候的生物学基础。方法:高脂饲料喂养SD大鼠2、4、8、16周后,检测血脂、血液流变学、血浆内皮素和血清一氧化氮(NO)含量。结果:与正常对照组比较,高脂饲料喂养大鼠血清总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇及动脉粥样硬化指数LDL/HDL和TC/HDL在2周内迅速增高,一直持续到16周(P<0.01);高密度脂蛋白胆固醇在16周时明显增高(P<0.05);甘油三酯在2周时即有增高的趋势,在16周时明显增多(P<0.01)。血液黏度在8周时明显升高,红细胞变形指数在8周时明显降低。内皮素明显升高,NO有降低的趋势,二者比值明显升高。结论:高脂血症大鼠的造模过程中,血脂、血液流变学及血管内皮损伤因素均出现了变化;这些可能反映中医"痰浊证"与"血瘀证"相关的生物学基础。

急性重复低氧对小鼠脑组织中糖酵解和线粒体氧化磷酸化以及能量负荷的影响

目的探讨小鼠在重复急性低氧暴露后脑组织中的糖酵解、线粒体氧化磷酸化及能量负荷的变化。方法成年BALB/c小鼠重复低氧暴露5次,测定每次低氧暴露时的平均耐受时间、体温及第0、1、3、5次低氧暴露后脑组织中的磷酸果糖激酶(PFK)、丙酮酸激酶(PK)、线粒体复合体Ⅰ活性和磷酸腺苷水平。结果重复低氧暴露使小鼠低氧耐受性增强,体温降低,脑组织中PFK和PK活性先增高后降低,复合体Ⅰ活性持续降低,能量负荷保持稳定。结论重复急性低氧使小鼠脑组织的糖酵解活性出现规律性变化,线粒体的氧化磷酸化受抑制,但能量负荷保持稳定。

星形胶质细胞在帕金森病发病机制中的作用

帕金森病是中老年人常见的中枢神经系统变性疾病。星形胶质细胞可能参与了其发病过程,一方面,它可以通过释放神经营养因子、谷胱甘肽等保护多巴胺能神经元,在帕金森病中发挥保护作用;另一方面,它也可能通过释放一些促炎症因子而推动帕金森病的发生和发展。

药理研究中常用学习记忆障碍动物模型的行为学分析

目的本研究对老年、基底前脑损伤、东莨菪碱注射和双侧颈总动脉结扎大鼠四种药理研究中常用的学习记忆障碍动物模型的行为学表现进行了分析。方法采用水迷宫及旷场分析法对上述四种动物模型组及正常青年对照和假手术组进行了研究,数据采用多因素方差分析法处理。结果发现老年动物学习记忆能力减弱,对新环境的紧张程度增强,但空间认知能力及兴奋性无明显改变;基底前脑损伤动物的学习记忆及空间认知能力明显下降,但兴奋性及情绪反应正常;东莨菪碱动物模型不但学习记忆及空间认知能力明显下降,而且兴奋性异常增强;双侧颈总动脉结扎动物的学习记忆及空间认知能力明显下降,但兴奋性及情绪反应正常。结论从行为学角度将上述四种动物模型进行了比较,为药理学研究应用这些模型提供了背景资料。