固相合成法合成葡萄球菌RNAⅢ抑制肽的鉴定

背景:葡萄球菌感染和生物被膜形成受群体感应机制调控。葡萄球菌RNAⅢ抑制肽可以干预葡萄球菌群体感应系统,阻断葡萄球菌细胞间的信号传导通路,进而抑制葡萄球菌的毒素分泌和生物被膜形成,防治葡萄球菌感染。目的:探讨葡萄球菌RNAⅢ抑制肽(RIP)的人工合成方法。设计、时间及地点:单一样本观察。于2006-08/11在北京宣武医院中心实验室完成。材料:Fmoc-AA、Pipredine、TFA、HMP购自美国MERCK公司;DCC、HOBT、DMAP购自美国ABI公司。方法:采用固相合成法合成RNAⅢ抑制肽,HPLC法纯化,进行质谱分析法、酸水解法、红外光谱分析法和内酰胺酶活性测定法检测。主要观察指标:①合成和纯化结果。②分子量测定结果。③组成成分分析结果。④氨基酸序列分析结果。⑤结构分析结果。⑥生物活性鉴定结果。结果:合成的RNAⅢ抑制肽纯度为97.42%,相对分子质量为914.37,与理论相对分子质量基本一致;与天然RNAⅢ抑制肽具有相同的氨基酸组分、氨基酸序列以及空间结构;生物活性检测证明合成RNAⅢ抑制肽具有和天然RNAⅢ抑制肽相同的功效,可以有效抑制细菌产生RNAⅢ。结论:采用固相合成法成功合成RNAⅢ抑制肽,鉴定分析证实合成的多肽和天然RNAⅢ抑制肽蛋白具有相同的结构和功能。

新的人突触相关蛋白(FRG4)抗原表位分析及抗体制备

目的:分析一个新的人突触相关蛋白(FRG4)抗原表位并制备其多克隆抗体。方法:从人胎肝文库PCR扩增获得FRG4基因全长cDNA序列;通过生物信息学分析,预测FRG4编码氨基酸序列的二级结构、抗原决定簇、功能结构域,并进行了多序列比对;采用固相多肽合成法合成了FRG4抗原多肽,并免疫家兔;用免疫组化检测蛋白在人肝癌细胞HepG2细胞中的表达。结果:通过生物信息学分析选取抗原13肽PKLVKEEVFWRNY,制备兔抗人FRG4多克隆抗体。高效液相色谱检测显示抗体纯度达82.79%,抗体滴度为1∶16000,Westernblot证实该抗体具有较好的反应性和特异性,免疫组化证实其主要在HepG2细胞胞浆中表达。结论:成功制备了新的人突触相关蛋白(FRG4)多克隆抗体。