小鼠GV卵中母源基因的克隆和其中一个基因在植入前胚表达的研究

目的 克隆和筛选小鼠生发泡完整卵母细胞 (GV卵 )中母源基因 ,并检测其中一个基因在植入前不同发育阶段胚中的表达 ,初步了解该基因在卵母细胞发育成熟及早期胚发育中的作用。 方法 应用抑制性消减杂交技术 (SSH) ,以生发泡完整的卵母细胞为检测子 (tester) ,8 细胞胚为驱赶子 (driver) ,建立GV卵中母源基因的cDNA文库。通过斑点杂交法进一步筛选GV卵中母源基因的cDNA文库 ,对阳性克隆进行序列测定和同源性分析 ;并采用RT PCR方法观察其中 1个阳性克隆的基因在着床前胚的表达。 结果 克隆得到 18个基因的cDNA序列和 8个同源EST序列在GV卵中特异表达 ,包括PeroxiredoxinⅡ基因。RT PCR显示PeroxiredoxinⅡ基因呈阶段性差异表达 ,在GV卵、MⅡ卵、1 细胞胚和 2 细胞胚有表达 ,但从MⅡ卵开始表达下降。而在 4 细胞胚、8 细胞胚、桑椹胚和囊胚中不表达。 结论 PeroxiredoxinⅡ基因是GV卵中母源基因cDNA文库中的一个基因 ,提示该基因在卵母细胞发育成熟和合子基因激活中起一定作用。

新型DNA聚合酶-Pfu酶的研究

介绍了PCR技术的发展历程,阐述了DNA聚合酶对于PCR技术发展的重要性。比较了各种DNA聚合酶如Taq、Vent、Pwo和Pfu酶的性能,从而显示新型DNA聚合酶-Pfu酶的性能优势,并指出完善Pfu酶仍需努力的方向。