阿胶加工工艺过程中DNA降解规律研究

目的本文以阿胶传统工艺加工过程样品为研究对象,探讨关键加工阶段阿胶样品中驴基因组DNA核基因和线粒体基因的降解变化规律。方法提取阿胶工艺过程中的驴基因组DNA,分别利用超微量分光光度计、琼脂糖凝胶电泳、普通PCR、荧光定量PCR和简单序列重复（SSR）微卫星毛细管电泳（CE）检测方法对提取的DNA质量进行评价。结果研究结果显示,在原料驴皮、化皮、双效、浓缩和加辅料阶段,琼脂糖凝胶电泳均能检测到清晰的条带,普通PCR可扩增到200~1 600 bp左右的片段,而在凝胶阶段DNA降解最为严重,只能利用琼脂糖凝胶电泳检测到100~800 bp的目的片段,利用荧光定量PCR检测技术线粒体基因在阿胶加工各个阶段均可检测出,核基因凝胶阶段未检出;通过PCR-SSR-CE检测在凝胶阶段核基因未检出特征峰,更进一步证明了凝胶阶段DNA核基因降解严重。结论对阿胶工艺加工过程DNA变化规律发现,随着阿胶加工的深入进行,各个阶段DNA发生不同程度的降解,其中凝胶成品阶段降解最为严重,本研究对比普通PCR、荧光定量PCR和简单序列重复微卫星毛细管电泳检测方法,发现荧光定量PCR检测方法最快速、灵敏和可靠,通过比较发现以线粒体基因为靶基因在阿胶的各个加工阶段均能满足DNA溯源的要求。

千金子脂肪油自组装胶束对4种千金子素在大鼠体内肠吸收的影响研究

目的:研究不同千金子脂肪油用量的自组装胶束对4种千金子素(千金子素L1、L2、L3、L8)在大鼠体内肠吸收的影响。方法:以千金子脂肪油(用量分别为0、0.2、0.4、1、4 g/L)和脱氧胆酸钠为载体,过量加入4种千金子素(40 mg/L),制备包载4种千金子素的自组装胶束溶液,作为含药肠灌流液。取大鼠60只,建立在体单向肠灌流模型,按不同千金子脂肪油用量的含药肠灌流液分组进行不同肠段(十二指肠、空肠、回肠、结肠)的灌流实验。采用高效液相色谱法测定灌流前后肠灌流液中4种千金子素的含量;计算在不同肠段中4种千金子素的吸收速率常数(Ka)和小肠表观吸收系数(Peff);选择吸收效果较好的回肠段为对象,考察并计算4种千金子素的累积吸收量。结果:不同千金子脂肪油用量的自组装胶束均能使4种千金子素在各肠段的Ka值和Peff值呈现不同程度的升高。当千金子脂肪油用量为0.4 g/L时,4种千金子素在各肠段均呈现最大吸收,且与不含脂肪油组比较其Peff值均显著升高(P<0.05或P<0.01)。按不同脂肪油用量组各肠段的Ka、Peff值排序,4种千金子素在各肠段的吸收效果总体上呈现空肠最好、结肠最差的趋势。与不含脂肪油组比较,千金子脂肪油用量为0.2~4 g/L时,4种千金子素在大鼠回肠的累积吸收量均显著升高(P<0.05或P<0.01),且以0.4 g/L脂肪油用量组为最高。结论:不同用量千金子脂肪油与脱氧胆酸盐形成的自组装胶束能不同程度地增加千金子素L1、L2、L3、L8在大鼠各肠段的吸收量,且空肠为上述千金子素的主要吸收肠段。

乌头驴和三粉驴微卫星遗传多态性分析

实验旨在了解德州驴中乌头驴和三粉驴2个品系的遗传多态性。利用13个微卫星位点,通过建立多重多色毛细管电泳荧光检测方法,对39头三粉驴和16头乌头驴进行遗传多样性分析,对等位基因数、多态信息含量(PIC)、遗传杂合度和有效等位基因数进行统计分析。结果表明:13对微卫星位点三粉驴PIC指数平均值为0.47,乌头驴PIC指数平均值为0.40,德州驴2个品系PIC总的平均值为0.47。其中乌头驴品系平均等位基因数为3.31,平均观测杂合度为0.27,有效等位基因数为2.11。三粉驴品系平均等位基因数为4.46,平均观测杂合度为0.33,有效等位基因数为2.61。由此可见,三粉驴比乌头驴的遗传多态性高,但2个驴品系的遗传杂合度均偏低,遗传变异程度较小。

基于多元统计分析比较香附的4种醋制方法

目的:比较4种醋制方法(醋蒸法、醋煮法、醋煮蒸法、醋炙法)制备的醋香附饮片中化学成分的差异。方法:建立醋香附的HPLC特征图谱;以共有峰的相对峰面积为指标,采用SPSS 23.0软件对5批生香附和20批醋香附饮片进行聚类分析,采用SIMCA-P 13.0软件对25批样品进行主成分分析和正交偏最小二乘判别分析。结果:建立了4种醋制方法制备的20批醋香附饮片特征图谱,确定18个共有峰,聚类分析和主成分分析结果一致,4种醋制方法中,醋炙法、醋煮蒸法的样品分别聚为一类,醋煮法和醋蒸法样品聚为一类。正交偏最小二乘判别分析结果表明5-羟甲基糠醛对区分4种醋制方法贡献最大(VIP>2.0),α-香附酮和香附烯酮对区分4种醋制方法贡献较小(VIP<0.7)。结论:5-羟甲基糠醛含量在醋炙品中最高,对区分4种醋制方法的贡献最大。

HPLC法比较4种醋香附中黄酮类成分含量研究

目的:采用高效液相色谱(HPLC)法比较4种醋制方法制备的醋香附饮片中黄酮类成分的差异,为控制香附炮制品的质量提供依据。方法:以芦丁、木犀草苷和木犀草素为指标性成分,采用Intersil ODS-3 C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以甲醇为流动相A,0.1%磷酸水为流动相B,梯度洗脱(0~35 min,38%~38%A;35~45 min,38%~50%A;45~70 min,50%~50%A;70~110 min,50%~90%A),流速1.0 mL/min,柱温25℃,检测波长为350 nm。结果:对芦丁、木犀草素和木犀草苷在选定的浓度范围内线性关系良好,其相关系数均>0.9997,加样回收率为98.10%、97.73%、98.20%,RSD%为1.56%、1.58%、1.22%,重复性、稳定性、精密度良好。3种黄酮成分总量由高到低依次为醋炙品>醋煮品>醋煮蒸品>醋蒸品>生品。结论:建立的HPLC法测定不同香附醋制品中芦丁、木犀草素和木犀草苷含量的方法简单、可行、重现性好,3种黄酮成分总量在醋炙品中最高。