艾滋病痴呆综合征患者HIV-1B gp120基因的克隆及真核表达

目的克隆艾滋病痴呆综合征（ADC）患者体内不同部位的HIV-1Bgpl20基因，并在人神经胶质瘤细胞U87中表达。方法分别以一例ADC患者尸检标本的外周（淋巴结）和中枢（脉络丛、大脑枕叶白质）来源的基因组DNA为模板，PCR扩增HIV-1gp120基因，序列测定后，将目的基因插入表达载体pcDNA3．1（＋），构建重组表达载体gp120／peDNA3．1（＋），将所构建的重组表达载体用脂质体法转染人神经胶质瘤U87细胞，间接免疫荧光法测定HIV-1Bgp120的表达情况。结果克隆了ADC患者体内外周淋巴结、脉络丛、大脑枕叶白质3个部位的HIV-1Bgp120基因，所构建的表达质粒gp120／pcDNA3．1（＋）转染U87细胞后可表达目的蛋白。结论ADC患者不同部位来源的HIV-1Bgp120基因均可在U87细胞中表达，为进一步研究HIV-1Bgp120包膜蛋白的神经毒性及其作用机制提供条件。

艾滋病痴呆综合征患者HIV-1 nef基因多样性分析

目的研究艾滋病痴呆综合征（ADC）患者体内HIV-1nef基因变异规律，为ADC发病机制的研究提供依据。方法提取1例ADC病例尸检标本的外周（脾）和中枢神经系统（基底核、额叶灰质、脑膜、颞叶）共5个部位组织中的基因组DNA，PCR扩增HIV-1nef基因，与pMDl9-T克隆载体连接后，蓝白斑筛选挑取阳性菌落测序，序列经BLAST分析后，每个部位取5个序列，利用Bioedit、MEGA4等生物学软件进行基因距离、系统进化树以及同义／非同义替换值（ds／dn）等分析。结果该ADC患者感染的是HIV-1B亚型，与标准序列HXB2比较，该病例的HIV-1nef基因存在变异，且外周组织与中枢神经系统各组织间以及中枢神经组织不同部位的基因变异不同，相同组织来源的nef序列基因距离较小，外周和中枢的nef基因距离差异较大，该病例HIV-1nef基因在外周和中枢神经系统变异时均受到负向选择压力。结论ADC患者体内HIV-1nef基因存在多样性，且不同组织部位的基因变异不同，其导致的Nef蛋白某些氨基酸位点的改变对其生物学活性的影响有待进-步研究。