硼替佐米通过干预Parkin介导的线粒体自噬导致神经毒性的研究

目的 探讨硼替佐米神经毒性的具体机制。方法 观察硼替佐米干预下大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞的活性。检测胱天蛋白酶3(Cleaved-caspase-3),B淋巴细胞瘤-2/B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(B-cell lymphoma-2/BCL2-Associated X,Bcl-2/Bax),自噬膜型LC3/胞浆型LC3(LC3Ⅱ/LC3Ⅰ),P62蛋白,Parkin蛋白,线粒体内膜转位酶23蛋白(Mitochondrial Endomembrane Transposase 23 Protein,TIM23)的表达。透射电镜下观察线粒体超微结构和自噬泡,荧光显微镜下观察硼替佐米作用下细胞的自噬情况,进一步验证硼替佐米调控Parkin功能。构建动物模型,进一步证实硼替佐米对坐骨神经线粒体自噬的影响。结果 硼替佐米(50 nmol/L)作用下,PC12细胞的增殖率显著下降,电镜下自噬泡数目减少,线粒体结构毁坏严重,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达水平显著下降,而P62表达水平显著升高,LC3免疫荧光明显减弱。线粒体标志物Parkin、TIM23蛋白表达水平显著降低,伴有线粒体结构的破坏。过表达Parkin后,硼替佐米对PC12细胞的毒性明显降低。动物实验结果,硼替佐米可以导致小鼠动物行为学异常,坐骨神经纤维形态不完整,可见明显的脱髓鞘,坐骨神经免疫组化显示LC3和Parkin表达水平显著降低。结论 硼替佐米可通过降低Parkin表达,抑制其介导的线粒体自噬通路,从而抑制PC12细胞的增殖导致神经毒性。