蜂王浆肽对阿尔茨海默症模型斑马鱼运动能力与关键基因表达影响

目的:探究蜂王浆酶解产物(蜂王浆肽)对阿尔茨海默症(Alzheimer's disease,AD)模型斑马鱼的影响。方法:将150尾(4 dpf)的野生型AB品系斑马鱼随机分为正常组、模型组、盐酸多奈哌齐阳性对照组(3.33μg/mL)、蜂王浆酶解液冻干粉-1组(LPR-1,1000μg/mL)和蜂王浆酶解液冻干粉-2组(LPR-2,1000μg/mL),于6孔板中进行实验,每孔容量为3 mL,每组30尾。除正常组外,其它组斑马鱼采用水溶给予六水氯化铝(180μmol/L)方法建立AD斑马鱼模型。各实验组同时给予相应药物处理24 h后,对其运动功能障碍恢复功效、反应能力改善功效、乙酰胆碱酯酶(AchE)抑制功效与脑凋亡抑制功效进行评价,同时计算TNF-α、caspase-3和BDNF基因的相对表达量,分析其对相关基因的影响。结果:LPR-1、LPR-2给药组和模型对照组比较,斑马鱼总运动距离延长(高度显著,P<0.01),每分钟光暗运动速度差值与BDNF基因相对表达量极显著提升(P<0.001);乙酰胆碱酯酶(AchE)荧光值(极显著,P<0.001)与脑部凋亡细胞荧光强度(高度显著,P<0.01)下降,TNF-α基因相对表达量(高度显著,P<0.01)与caspase-3基因相对表达量(显著,P<0.05)降低。结论:LPR-1和LPR-2均具有防治阿尔茨海默症功效,具有在防治阿尔茨海默症功能食品开发中的应用潜力。

蜂王浆蛋白肽的制备、鉴定及抗氧化活性研究

以蜂王浆为原料,以DPPH自由基清除率和OH自由基清除率为评价指标,对蜂王浆的酶解工艺进行了系统研究,并对蜂王浆酶解液中的蛋白肽进行了分子量分布分析、凝胶过滤层析纯化、LC-MS/MS分离鉴定、肽的合成及活性验证。结果表明,在酸性蛋白酶、料液比1:4、初始pH 5、酶解温度45℃、加酶量9000 U/g及酶解时间5 h的条件下酶解蜂王浆,所得产物的DPPH自由基清除率和OH自由基清除率最佳。对最优工艺下得到的酶解液层析分离,得到活性最高的组分为F4。对该组分进行质谱鉴定,并筛选出15种肽段进行进一步验证,结果表明,得到序列为FDRIW、YPDWSW、WHDKIF的三条肽DPPH自由基清除效果较好,IC50分别为3.63、3.59、1.00 mg/mL,具有在功能食品开发中的应用潜力。