山东部分地区禽传染性支气管炎流行病学调查

为了解近年来山东省流行的禽传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)S1基因遗传特性,试验于2020-2023年从山东14个地市的肉鸡养殖场及蛋鸡养殖场共收集462份病料(包含组织器官、泄殖腔拭子和咽拭子),采用RT-qPCR和RT-PCR对病料进行IBV检测。结果显示:山东省2020-2023年肉鸡和蛋鸡养殖场IBV阳性检出率为27%(125/462),并在3年试验期间IBV感染率呈现逐年上升趋势,在初春、秋末及冬季感染率较高,以济南(49%)、泰安(33%)和东营(28.9%)地区IBV阳性检出率最高,肉鸡的IBV感染率略高于蛋鸡。试验成功分离37株IBV分离株,其S1基因核苷酸同源性为74.8%~99.8%,分属GⅠ-22、GⅠ-13、GⅠ-7、GⅠ-1、GⅠ-28(LZ05型)和GⅠ-19(QX型)6种基因型,其中QX型为分离株优势基因型(83.7%,31/37)。31株QX型IBV分离株S1基因在第68、116、208、261、333和369位的碱基突变、替换最为频繁。研究提示:山东部分地区IBV感染率呈现逐年上升趋势,多发于寒冷季节且肉鸡发病较为严重,流行毒株仍以QX基因型为主,并且LZ05型首次在鲁中地区被检出。

免疫抑制性病毒多重感染在鸡群疫病发生和流行中的作用

根据近几年各地大型鸡场不同类型病鸡的实验室鉴别诊断结果,结合国内外的研究进展,本文对不同免疫抑制性病毒多重感染在鸡群疫病发生和流行中的作用做了全面的分析和探索。现有资料表明,不同的免疫抑制性病毒的亚临床感染在规模化畜禽群体中是非常普遍的,但往往只有在同一个体发生二重或多重感染时,在它们的相互作用下对个体和群体造成的免疫抑制和其它病理反应才比较明显。在此基础上,本文提出了"条件致病性病毒"的概念,并对其含义和内涵作了讨论。这一观念的引入,可能有助于理解和解释高密度饲养鸡群中疫病的复杂性及其控制的艰难性。鸡群中的免疫抑制性病毒的多重感染造成一部分个体处于"不完全免疫状态",使许多已经多次强化免疫的鸡场中仍有部分个体成为A类病病毒侵袭的对象并成为新的传染源,也容易造成在"免疫选择压"作用下病毒的抗原变异。此外,同一个个体的多重病毒感染,为病毒间通过基因重组产生新病毒创造了条件。

B亚群禽白血病病毒SDAU09C2株的TCID_(50)与p27抗原之间的相关性研究

为了研究B亚群禽白血病病毒(ALV-B)的半数细胞培养物感染量(TCID50)与p27抗原的酶联免疫吸附试验(ELISA)的S/P值之间的相关性,本试验将ALV-B SDAU09C2株接种鸡胚成纤维细胞(CEF细胞),换维持液后连续10d取样,检测10d的TCID50值与p27抗原的S/P值之间的相关性;同时,将该毒株在DF-1细胞系上传代至20代,取其中的第1、5、10、15和20代分别进行TCID50滴度的测定和p27抗原检测。结果表明,在CEF细胞上接种的ALV-B SDAU09C2株连续10d的TCID50值与p27抗原之间存在显著的正相关(r=0.94002;P<0.0001);在DF-1细胞系上传的不同代数之间也呈显著正相关(r=0.96449;P=0.0080)。由此可推测ALV-B的TCID50与p27抗原呈显著正相关,可以用ELISA法测得的p27抗原的S/P值来估测病毒的TCID50值。

B亚群禽白血病病毒灭活疫苗的免疫效力分析

本研究旨在制备B亚群禽白血病的灭活疫苗,探索能否通过种鸡群疫苗免疫减少带毒率,从而加快禽白血病净化。将B亚群禽白血病病毒SDAU09C2株在鸡胚成纤维细胞(CEF)上连续培养复制大量病毒,制备灭活疫苗,用该疫苗免疫9只产蛋祖代鸡,同时设未免疫种鸡对照。收取种蛋孵化,对孵出雏鸡接种SDAU09C2,检测和比较有和无母源抗体鸡的病毒血症、泄殖腔p27、抗体动态。该疫苗在所有经免疫的成年鸡(9/9)诱发抗体反应,在三免后第3周产生的抗体水平最高,ELISA检测S/P值在1.69～1.89(阳性临界值为0.4),且维持4周以上后仍未下降。经过疫苗免疫过的母鸡在其抗体水平最高的前后1周内收集种蛋进行孵化,其雏鸡含母源抗体阳性率的在70%(12/17)左右。雏鸡1日龄攻毒,含母源抗体的12只雏鸡中只有4只检出病毒血症,且持续时间都很短。所有9只不含母源抗体的雏鸡在攻毒后4～8周内全部出现病毒血症,而且在观察期内呈现持续性病毒血症。该疫苗能使全部产蛋祖代鸡产生较高水平的特异性抗体,为雏鸡提供母源抗体,有效预防或减缓ALV-B的早期感染。

二株B亚群禽白血病病毒全基因组序列及其在细胞上的复制性比较

本研究比较了从山东地方品系鸡群分离到的二株B亚型禽白血病病毒(ALV)SDAU09E3和SDAU09C2的全基因组序列及它们在细胞培养上的复制动态。这二株ALV-B的同源性为95.4%,与GenBank中3株B亚群参考株之间的同源性也均在91.0%～94.9%间,而与其它亚群参考株的同源性均低于87.9%。与亚群无关的gag、pol基因和LTR的核苷酸序列比较表明,这二株ALV-Bgp85基因的gag和pol基因与所有比较的参考株的同源性均在93%以上。LTR与其他外源性ALV参考株的LTR间的同源性在72.6%～88.3%范围内,但与E亚群内源性ALV的LTR的同源性只有51.5%。然而,这二个ALV-B的LTR的同源性也只有74.8%,远低于其他基因组部分的同源性,特别是它们的LTR的U3区同源性只有68.8%,二者在二个CAAT分布上也显著不同。对这二株ALV-B在DF-1细胞上的复制动态比较表明,它们在细胞培养上清液中的TCID50值非常类似,但SDAU09E3株核衣壳蛋白p27抗原的含量显著高于SDAU09C2株。这表明,同一亚群的不同毒株在复制过程中,所表达的p27抗原量与所形成的具有传染性的病毒量间没有平行关系。这一差异与LTR-U3区的相关性则有待应用感染性克隆技术来做进一步深入研究。

ELISA与IFA检测鸡血清ALV-A/B特异性抗体相关性比较

为了研究ELISA和IFA检测鸡血清中ALV-A/B特异性抗体的相关性,将A/B亚群禽白血病病毒接种到DF1细胞上,用ELISA检测过的鸡血清作为一抗进行IFA检测,比较ELISA检测的S/P值与IFA检测的血清效价之间的相关性。结果表明ELISA检测鸡血清中ALV-A/B抗体的S/P值与IFA检测ALV-A/B的血清效价之间存在显著正相关(r=0.974 35;P﹤0.001)。由此可推测ELISA检测鸡血清的S/P值与IFA检测的血清效价之间存在显著相关性,且呈正相关。IFA检测血清阳性率与ELISA检测结果完全一致,因此当血清样品数量少时,可用IFA检测替代ELISA检测,既节约检测成本也提高了检测的准确性。