过瘤胃氨基酸对反刍动物生产性能及氮排放的影响

[目的]研究过瘤胃赖氨酸(RPLys)、过瘤胃蛋氨酸(RPMet)对反刍动物生产性能及氮排放的影响。[方法]以荷斯坦牛为例,选用40头体重600 kg左右且泌乳期60 d左右的健康荷斯坦牛进行试验,随机分为4组,每组10头,分别为L组(日粮中补充30 g/头·d RPLys)、M组(日粮中补充30 g/头·d RPMet)、LM组(日粮中补充RPLys、RPMet各30 g/头·d)和CK组(不添加RPLys、RPMet),分别测定日均干物质采食量、日均产奶量、乳脂率、乳蛋白率、乳糖率、乳体细胞数、粪氮、尿氮、氮总排放量。[结果]与CK组相比,L组、M组、LM组日均干物质采食量、乳糖率无显著变化(P>0.05),日均产奶量、乳蛋白率显著增加(P<0.05),乳体细胞数、粪氮、尿氮、氮总排放量均显著降低(P<0.05);L组乳脂率无显著变化(P>0.05),M组、LM组乳脂率显著增加(P<0.05)。[结论]RPLys和RPMet可改善奶牛生产性能,调节乳房健康水平,降低氮排放,减少环境污染,助力畜牧业绿色高效发展。

谷氨酰胺对肠产毒素性大肠杆菌感染小鼠肠道损伤的保护作用

【目的】探究谷氨酰胺(glutamine,Gln)对肠产毒素性大肠杆菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)感染小鼠肠道损伤的保护作用,为Gln缓解大肠杆菌性肠损伤提供理论依据。【方法】选取健康的SPF级昆明小鼠24只,随机分为3组:对照组(Con)、模型组(ETEC)、Gln干预组(ETEC+Gln)。Con和ETEC组小鼠采用灌胃方式每天给予0.2 mL生理盐水,ETEC+Gln组小鼠给予0.2 mL 1%Gln,于试验第7天,ETEC和ETEC+Gln组小鼠采用灌胃方式给予0.2 mL 8.6×109 CFU/mL ETEC K88,试验期10 d。每天对小鼠进行称重;采用HE和PAS染色观察空肠病理变化;采用ELISA法检测血清炎症因子的浓度;采用实时荧光定量PCR和Western blotting分别检测空肠炎症因子(IL-1β、IL-6、TNF-α、IFN-γ)、紧密连接蛋白(Occludin、Claudin-1、ZO-1)、肠上皮细胞增殖(TGF-β1、PCNA、EGF)和凋亡(Bax、Bcl-2)相关指标的mRNA和蛋白表达水平;采用免疫组化检测空肠Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)和核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)的蛋白表达情况。【结果】与Con组相比,ETEC组小鼠体重显著下降(P<0.05),而Gln处理缓解了体重下降的趋势;ETEC组小鼠脾脏指数显著高于Con和ETEC+Gln组(P<0.05);与ETEC组相比,Gln处理显著提高了小鼠空肠绒毛高度、绒毛高度/隐窝深度比值、杯状细胞数量和黏液层厚度(P<0.05)。与Con和ETEC+Gln组相比,ETEC组小鼠血清IL-1β和TNF-α含量、D-乳酸(D-lac)浓度、二胺氧化酶(DAO)活性均显著升高(P<0.05);与ETEC组相比,Gln干预显著降低了小鼠空肠IL-1β、IL-6、TNF-α、IFN-γ、TLR4、NF-κB p65和Bax的mRNA表达水平(P<0.05),显著增加了小鼠空肠Occludin、Claudin-1、ZO-1、Bcl-2、PCNA和TGF-β1的mRNA和蛋白表达水平(P<0.05)。【结论】Gln干预可通过抑制肠道炎症反应、促进肠道上皮细胞增殖和提高肠上皮细胞紧密连接等缓解ETEC K88感染引起的小鼠肠道损伤。

表现腺胃炎的蛋用型鸡J亚群-白血病病毒的分离与鉴定

从表现腺胃炎的尼克珊瑚粉商品代蛋鸡中分离到J亚群-白血病病毒(ALV-J)。将病料或鸡白细胞接种于CEF,培养12 d,分别采用单克隆抗体间接免疫荧光试验检测,结果10只鸡中有9只鸡分离到ALV-J,其中有4只鸡还存在与禽网状内皮增生病病毒(REV)的共感染。通过PCR扩增gp85基因,与已发表的20株ALV-J进行同源性比较。结果表明,与来自白羽肉鸡的HPRS103的同源性为97.8%,而与来自蛋用型鸡的SD07LK1株的同源性为93.0%。本研究发现,在某些仅仅发生腺胃炎的鸡也可能普遍存在ALV-J感染,再次显示了腺胃炎病料中病毒感染的多样性。ALV-J可能成为致腺胃炎的病原之一,但其致病作用有待进一步研究。

大麻素受体1拮抗剂利莫那班对肉仔鸡下丘脑食欲调控因子和腺苷酸激活蛋白激酶基因表达的影响

研究旨在探讨大麻素受体1(CB1)拮抗剂利莫那班(SR141716)对肉仔鸡下丘脑食欲调控因子和腺苷酸激活蛋白激酶(AMPK)基因表达的影响。选取1日龄体重相近的健康爱拔益加(AA)肉仔鸡20只,7日龄时随机分为2个组,进行第3脑室埋管,恢复3 d。10日龄08:00试验组以1μg剂量脑室注射SR141716,对照组同时注射等量的二甲基亚砜(DMSO)。统计每只鸡在注射后2 h的采食量,然后采集血液和下丘脑样品,测定血清中丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶活性及葡萄糖、尿酸、总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇含量,利用荧光定量PCR技术检测下丘脑中AMPKα1、AMPKα2以及食欲调控相关基因厌食神经肽(POMC)、促食神经肽Y (NPY)、刺鼠色蛋白相关蛋白(AgRP)、可卡因和苯丙胺调节转录物(CART)的基因表达量。结果表明:1)与对照组相比,肉仔鸡脑室注射SR141716后,2 h内的采食量显著降低(P<0.05)。2)与对照组相比,肉仔鸡脑室注射SR141716显著提高了血清中低密度脂蛋白胆固醇含量(P<0.05),对其他血清生化指标无显著影响(P>0.05)。3)与对照组相比,肉仔鸡脑室注射SR141716显著降低了下丘脑AMPKα1、AMPKα2、POMC和AgRP的基因表达量(P<0.05),显著提高了下丘脑CART的基因表达量(P<0.05),对下丘脑NPY的基因表达量无显著影响(P>0.05)。由此可见,脑室注射CB1受体拮抗剂SR141716可降低肉仔鸡食欲,并影响中枢AMPK及其下游食欲调控因子POMC的基因表达;中枢通过抑制促食神经肽AgRP和提高抑食神经肽CART的基因表达,参与肉仔鸡食欲调控。

热应激对肉仔鸡肝AMPKα1及脂肪代谢相关分子基因表达的影响

旨在探讨热应激对肉仔鸡肝脂肪代谢的影响及其可能的内在分子机制。试验选取体重相近的健康28日龄AA肉仔鸡96只,随机分成4组,每组4个重复,每个重复6只鸡,分别为24h热应激组、24h对照组和72h热应激组、72h对照组。热应激组设定温度为(33±1)℃,对照组设定温度为(23±1)℃。热应激24和72h后,2个时间点各组分别取8只鸡采集血浆并屠宰收集肝样品。统计生产性能,使用分光光度计测定血浆中葡萄糖(GLU)、尿酸(UA)、总胆固醇(TCHO)、总胆汁酸(TBA)、甘油三脂(TG)含量,利用RT-PCR检测肝中SREBP-1c、FATP-1、LXR、APOB、CYP7A1、FXR、AMPKα1的基因表达量。试验结果表明:1)24和72h热应激均显著降低肉仔鸡平均体增重与采食量(P<0.05)。2)24h热应激显著提高肉仔鸡血浆中葡萄糖和总胆汁酸含量(P<0.05),72h热应激显著提高肉仔鸡血浆中葡萄糖、甘油三酯和总胆固醇含量(P<0.05)。3)脂肪调控因子FATP-1、SREBP-1c、APOB和LXR基因表达检测发现,24h热应激处理下没有出现显著差异,72h热应激处理时则均显著升高(P<0.05);胆汁酸合成相关基因FXR和CYP7A1在24h热应激处理下没有出现显著差异,在72h热应激处理下则有升高的趋势(0.05<P<0.1);24h热应激处理对肝AMPKα1基因表达无显著影响,72h热应激处理则显著提高AMPKα1在肝的基因表达量(P<0.05)。由此可知,热应激显著降低肉仔鸡生产性能;短期热应激对肉仔鸡肝脂肪代谢影响有限,而长期热应激则显著影响肉仔鸡肝脂肪代谢;热应激时,肝AMPKα1与脂肪代谢相关分子基因表达的变化趋势相似,提示AMPK信号通路可能参与热应激影响肉仔鸡脂肪代谢的调控过程。

耐镉乳酸菌对镉暴露仔鸡体重、脏器系数和组织中矿物元素含量的影响

本试验旨在探究耐镉乳酸菌对镉暴露仔鸡体重、脏器系数和组织中镉、钙、铁、锌、铜、锰、硒含量影响。选取1日龄如皋黄鸡30只,随机分为3组,每组10个重复,每个重复1只鸡。对照组试验鸡第3~6周灌喂1 mL/(d·只)无菌生理盐水;镉暴露组试验鸡第3~6周灌喂1 mL/(d·只)无菌生理盐水,并在第4~6周饮水中添加5 mg/L镉;镉+耐镉乳酸菌组试验鸡第3~6周灌喂1 mL/(d·只)耐镉乳酸菌液(1×10^(9) CFU/mL),并在第4~6周饮水中添加5 mg/L镉。预试期2周,正试期4周。结果表明:1)各组之间仔鸡体重无显著差异(P>0.05)。2)镉暴露组和镉+耐镉乳酸菌组心脏系数显著低于对照组(P<0.05),且镉暴露组和镉+耐镉乳酸菌组之间心脏系数无显著差异(P>0.05)。3)镉暴露组的各组织中镉含量显均显著高于对照组(P<0.05),且各组织中镉含量的高低依次为肾脏>肝脏>脾脏>肺脏>心脏>胸肌。镉+耐镉乳酸菌组的脾脏中镉含量显著低于镉暴露组(P<0.05)。4)镉+耐镉乳酸菌组肝脏中硒含量显著低于对照组和镉暴露组(P<0.05)。镉+耐镉乳酸菌组和镉暴露组肾脏中硒含量显著低于对照组(P<0.05)。镉暴露组肺脏中钙含量显著高于对照组和镉+耐镉乳酸菌组(P<0.05),镉+耐镉乳酸菌组和镉暴露组肺脏中锌含量显著低于对照组(P<0.05),镉+耐镉乳酸菌组肺脏中铜含量显著低于对照组(P<0.05),镉暴露组肺脏中锰含量显著高于对照组和镉+耐镉乳酸菌组(P<0.05)。镉+耐镉乳酸菌组脾脏中钙和铜含量显著低于对照组和镉暴露组(P<0.05)。镉暴露组心脏中钙含量显著低于对照组(P<0.05),镉+耐镉乳酸菌组和镉暴露组心脏中硒含量显著高于对照组(P<0.05)。由此可见,仔鸡镉暴露时,心脏系数降低,肝脏、肾脏、肺脏、脾脏、心脏和胸肌中镉含量增加,肾脏中硒含量和心脏中钙含量降低;添加耐镉乳酸菌对镉暴露仔鸡心脏系数的降低无改善作用,但降低了脾脏和肝脏中镉含量,并增加了心脏中硒和钙含量。

糖皮质激素对鸡胚肝细胞脂肪和胆汁酸代谢相关基因表达的影响

为揭示应激导致家禽肝脏代谢异常的机理,本研究探查了糖皮质激素——地塞米松(DEX)对鸡胚肝细胞脂肪和胆汁酸代谢相关基因表达的影响。选取19胚龄的无特定病原体(SPF)鸡蛋,原代培养鸡胚肝细胞(37℃、5%CO2),用0(对照)、200、500、1 000 nmol/L的地塞米松分别处理24 h。结果表明:与对照组相比,高剂量(500、1 000 nmol/L)地塞米松处理显著降低了脂肪代谢相关基因——脂肪酸转运蛋白1 (FATP-1)、固醇调节元件结合蛋白-1C(SREBP-1C)、载脂蛋白B100(APOB100)、肝脏X受体(LXR)以及胆汁酸摄取相关基因Na+/牛磺胆盐共转运体(NTCP)的mRNA相对表达水平(P<0.05),显著提高了胆汁酸排出相关基因——胆盐输出泵(BSEP)的mRNA相对表达水平(P<0.05);低剂量(200 nmol/L)地塞米松处理显著提高胆汁酸合成相关基因——胆固醇7-羟化酶(CYP7A1)和法尼酯X受体(FXR)的mRNA相对表达水平(P<0.05),同时,SREBP-1C的mRNA相对表达水平显著降低(P <0.05),BSEP的mRNA相对表达水平显著上升(P<0.05)。由此得出,高剂量糖皮质激素对鸡胚肝细胞的脂肪合成、转运和胆汁酸的摄取具有抑制作用;低剂量糖皮质激素可以促进胆汁酸的合成和排出,部分反应具有剂量依赖性。

促肾上腺皮质激素释放因子在肉仔鸡食欲调控中的作用

本试验以活体肉仔鸡为研究对象,以静脉注射方式外源导入促肾上腺皮质激素释放因子(CRF),分析肉仔鸡采食量的变化和下丘脑、肠道中食欲调控相关基因的表达情况,对CRF在肉仔鸡食欲调控中的作用进行探究。选取体重相近的1日龄雄性爱拔益加(AA)肉仔鸡20只,7日龄时随机分为2个组,每组10只鸡,单笼单饲。试验组肉仔鸡于10日龄08:00翅静脉注射1 000.0μg/kg BW的CRF,对照组同时注射等量的生理盐水。注射2 h后,统计采食量,10日龄10:00进行屠宰取样,利用实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测下丘脑、十二指肠、空肠和回肠中与食欲相关基因胃饥饿素、促肾上腺皮质激素释放因子受体(CRFR) 1、CRFR2、生长激素促分泌素受体-1α(GHSR-1α) mRNA相对表达量。结果表明:与对照组相比,静脉注射CRF显著降低了肉仔鸡采食量(P<0.05);显著提高了肉仔鸡下丘脑中胃饥饿素和CRFR1 mRNA相对表达量(P<0.05),而下丘脑中CRFR2和GHSR-1αmRNA相对表达量无显著变化(P>0.05);显著提高了肉仔鸡十二指肠、空肠和回肠中CRFR1、CRFR2和GHSR-1αmRNA相对表达量(P <0.05),显著降低了十二指肠胃饥饿素mRNA相对表达量(P <0.05),而在空肠和回肠中胃饥饿素mRNA相对表达量无显著变化(P>0.05)。由此可见,静脉注射CRF能降低肉仔鸡采食量,诱导中枢胃饥饿素的基因表达,下丘脑CRFR1、胃饥饿素以及肠道CRFR1、CRFR2、GHSR-1α基因表达上调导致的食欲抑制可能是造成采食量下降的原因。

汶上芦花鸡种质资源的遗传多样性分析

为了评估汶上芦花鸡群体的遗传多样性,本研究采用联合国粮农组织(FAO)和国际动物遗传学会(ISAG)联合推荐的27对微卫星引物,对济宁汶上芦花鸡的100个个体(60只母鸡,40只公鸡)进行了遗传多样性检测,分析了该群体在DNA水平上的遗传多样性。结果,共检测到86个等位基因,每个微卫星座位的等位基因数从2个到6个不等,平均等位基因数为3.185,平均期望杂合度和多态信息含量分别为0.465 5和0.402 3。对分布在不同地方的3个群体的遗传距离分析表明,群体间的遗传距离为0.05~0.10。以上结果表明,汶上芦花鸡群体的遗传多样性偏低,必须采取一定的措施保护这一优良地方品种。

1株H1N1亚型猪流感病毒的全基因组特征及其对小鼠的致病性

旨在了解河南省猪流感病毒的流行情况及其遗传进化和基因组特征。2018年4月,从河南省某一出现疑似流感症状猪群中采集鼻拭子样品150份用于分离病毒,对分离病毒的全基因组进行序列测定和分析。同时感染6周龄BALB/c小鼠,研究其对小鼠的致病性。结果显示,获得1株H1N1亚型病毒[命名为A/swine/Henan/NY20/2018(H1N1)]。遗传进化表明,其HA和NA基因属于欧亚类禽H1N1分支,PB2、PB1、PA、NP和M基因属于2009甲型H1N1分支,NS基因属于经典H1N1分支。HA蛋白的裂解位点序列为PSIQSR↓GL,具有低致病性流感病毒的分子特征,在小鼠肺和鼻甲有效复制并能引起肺组织病理学变化。本研究分离到1株3源重排H1N1亚型病毒,对小鼠呈现一定致病力,提示应进一步加强对SIV的监测。

一株栖稻假单胞菌NYCS1-5的鉴定及其对玉米的耐盐促生功能

本试验针对实验室前期保藏的菌株NYCS1-5进行了细胞和菌落形态鉴定、生理生化分析、耐盐促生功能研究、16S rDNA系统发育树分析,鉴定此菌株为栖稻假单胞菌(Pseudomonas oryzihabitans)。经研究,栖稻假单胞菌NYCS1-5同时具备较强的解磷和溶磷能力,也具有一定的解钾能力和产IAA的功能,该菌耐盐范围可达7%。通过玉米营养液培养实验也研究了菌株NYCS1-5对玉米在有盐(100 mmol/L Na Cl)、无盐条件下的促生功能,记录玉米在生长第4、10和12 d的株高和根长生长状况。在有盐条件下,玉米生长10 d时,菌株NYCS1-5处理组的玉米生理株高和根长分别提高了21.36%和16.64%,均达到显著性差异,菌株NYCS1-5表现出对玉米的耐盐促生功能。在无盐条件下,菌株NYCS1-5对玉米生理株高及根长也表现出了一定的促进作用;玉米生长12 d时,菌株NYCS1-5处理组的玉米生理株高增加了17.38%,达到显著差异。因此,此栖稻假单胞菌NYCS1-5对玉米等作物有耐盐促生应用价值。

奶牛自动计量食槽的开发

采食量是限制奶牛产奶性能的主要因素,是影响奶牛繁殖性能的重要因素,也是奶牛健康状况的重要标志。笔者开发了一种能自动识别奶牛个体、记录奶牛个体采食量的装置,其计算管理软件还可自动分析个体的采食量变化情况、个体间采食量差异情况、群组采食量变化情况、个体采食行为习惯、饲料供应和消耗情况等。

忆熊远著先生二三事

熊远著院士离开我们已经快4年了,他那伟岸的身躯、慈祥的笑容仍时时浮现在眼前。作为我国猪育种事业的先驱和开创者,他为我国猪育种事业做出的杰出贡献更是让人铭记于心,高山仰止。我与熊先生的接触并不多,但在为数不多的接触中有几件事让我记忆深刻,难以忘怀,受益良多。已经记不清是哪一年了,突然有一天熊先生给我打电话,问我能否给他的团队讲讲猪综合选择指数的构建原则及国外猪综合选择指数的应用情况,这顿时让我感到意外、惊喜和不安。

UHPLC-MS/MS法测定氟苯尼考明胶纳米药物在小鼠体内的血药浓度

为了建立一种测定氟苯尼考明胶纳米药物在小鼠体内血药浓度的超高效液相色谱-质谱联用(UHPLC-MS/MS)方法。采用内标法对比法,以甲砜霉素为内标,利用乙酸乙酯提取血浆中的药物,优化色谱质谱条件,建立了测定氟苯尼考明胶纳米在小鼠血液中浓度的方法。结果表明,方法特异性良好,氟苯尼考在6.17~789.6 ng·mL^-1内线性关系良好,提取回收率、准确度、精密度和稳定性均符合要求。本试验建立了一个专属性强,灵敏度高,重现性好的UHPLC-MS/MS方法,能够准确的测定氟苯尼考明胶纳米药物在小鼠体内的血药浓度。

猪TLR3 mRNA的表达特征与调控分析及其与感染蓝耳病的关系

克隆了猪Toll样受体3(toll-like receptor 3,TLR3)的部分编码区,分析了其在物种间的同源性;检测了不同组织及感染猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)前后不同品种猪肺组织TLR3基因mRNA水平的表达变化,分析了猪TLR3基因5′调控区对转录的影响。结果显示:猪与牛、绵羊等哺乳动物TLR3的同源性较高,与鸡、斑马鱼的同源性较低;TLR3mRNA在猪肝脏、肾脏和小肠组织中的表达较高,而在心脏、子宫、淋巴结、大脑、肌肉、大肠和肺组织中的表达较低,在小脑和扁桃体中几乎检测不到其表达;TLR3基因在抗蓝耳病的大蒲莲猪和对蓝耳病易感的杜大长杂交猪肺组织中的表达存在显著差异,大蒲莲猪中的表达量均显著高于杜大长杂交猪(未攻毒,P<0.05;攻毒,P<0.01);攻毒大蒲莲猪肺组织TLR3mRNA表达量升高,杜大长杂交猪的表达量下降;荧光素酶分析表明,5′调控区-2 952bp至-2 603bp、-1 632bp至-1 079bp区段有增强TLR3表达的顺式元件。结果表明:TLR3的高表达可能与猪对蓝耳病的抗性有关。