H9N2亚型禽流感病毒血凝素蛋白分子特征分析及其对小鼠致病力的研究

旨在了解H9N2禽流感病毒(AIV)山东分离株血凝素(HA)的遗传变异情况及其对哺乳动物的致病性。对5株H9N2AIV山东分离株的HA蛋白的分子特征进行了分析,并以BABL/c小鼠为模型评价其致病性。结果表明:5株AIV均属于CK/Beijing谱系,其中2株病毒的HA具有人样受体结合特征(Leu234),3株病毒具有禽样受体结合特征(Gln234)。裂解位点分析表明,5株病毒均具有低致病性AIV特征;个别病毒的潜在糖基化位点存在增加或缺失现象。攻毒BABL/c小鼠后,2株病毒能够在小鼠肺部复制,病理切片显示间质性肺炎病变,通过免疫组化染色在细支气管上皮细胞检测到病毒。研究表明,H9N2亚型AIV在进化过程中HA基因及其编码的蛋白存在一定的差异性,且5株山东分离株中有2株具备感染哺乳动物的能力。该试验结果为从分子水平上深入研究H9N2亚型AIV HA蛋白氨基酸位点与跨种传播的关系提供了理论依据。

新型猪源H1N1流感病毒的分离鉴定及在实验条件下气源性传播的特点

新型猪源性H1N1流感病毒能引起人和猪的呼吸道传染性疾病,自2009年4月起在全球范围内暴发,引起广泛的关注和研究,本试验拟对其分离株的气源性传播特点进行研究。2011年1月,华东某地区出现流感疫情,本研究从病死猪的鼻腔棉拭子和肺脏中分离到1株新型猪源性H1N1流感病毒A/swine/Shandong/07/2011;用荧光定量PCR方法检测发病猪场舍内、外的空气样品中病毒含量;建立气溶胶传染模型来分析该株病毒在实验条件下气源性传播的特点。结果显示:猪舍内空气样品的阳性率为26.10%,病毒含量在3.14～5.72log10copies.m-3空气之间;舍外下风向10m处空气样品的阳性率为40.70%,病毒含量在2.24～3.77log10copies.m-3空气之间;在传染模型中,A/swine/Shandong/07/2011能够造成气溶胶感染组试验猪的感染,但感染率比直接接触组低。研究表明,A/swine/Shandong/07/2011株具有形成病毒气溶胶的能力,在实验条件下能够引起气源性感染。

猪舍环境气载微生物监测

为评估不同养猪场猪圈环境卫生质量,采用ANDERSEN-6级和AGI-30(All Glass Impinger,AGI)空气微生物样品收集器分别对5个不同养猪环境中微生物气溶胶的含量与构成成分予以监测。结果表明,猪舍空气中气载需氧菌含量介于0.466×104~2.585×104 CFU·m-3,气载厌氧菌含量介于0.060×104~2.025×104CFU·m-3,气载真菌含量介于0.265×103~1.490×103 CFU·m-3,气载内毒素含量介于0.114×103~0.533×103 EU·m-3,气载阴性菌含量介于0.014×103~0.840×103 CFU·m-3,气载阴性菌在需氧菌含量中的比例为0.30%~3.2%。需氧革兰阴性菌群主要有肠杆菌属、假单胞菌属、莫拉菌属。气载肠杆菌属中大肠杆菌、成团肠杆菌和克雷伯菌为主要菌种;气载假单胞菌属中嗜麦芽窄食单胞菌为主要菌种;莫拉菌属在各猪场环境只检测到腔隙莫拉菌。此外,只在猪场C、D分别分离到了不动杆菌菌属和根瘤菌属。通过该研究,对猪场舍环境的微生物含量及成分有了一个全面的认识,为评估环境质量奠定基础,对环境卫生控制有指导意义。

冬季大棚养鸭模式中微生物气溶胶对肉鸭应激和生产性能的影响

本研究通过评估不同饲养卫生清洁状况下微生物气溶胶的浓度对肉鸭生产性能的影响,为建立家禽养殖环境微生物气溶胶标准提供参考。选用600只1日龄的樱桃谷肉鸭,随机平均分配到1个对照组(A组)和4个清洁卫生条件逐步变差的试验组(B、C、D、E组),每组3个重复,每个重复40只。使用国际标准的Andersen-6级和AGI-30空气微生物采集器收集各组空气样品,检测微生物气溶胶浓度。检测鸭血清促肾上腺皮质激素(ACTH)浓度变化,评估其应激强度。与此相应地对肉鸭生长性能、屠宰指标等进行检测与评定,分析微生物气溶胶对肉鸭机体的影响。结果显示:当肉鸭舍的微生物气溶胶浓度升高至气载需氧菌为2.96×105CFU/m3、气载真菌为2.63×104CFU/m3、气载革兰氏阴性菌为3.09×104CFU/m3、气载内毒素为41.78×103EU/m3时(D组),该组肉鸭的血清ACTH浓度、料重比、死淘率显著或极显著高于对照组(P<0.05或P<0.01),该组肉鸭的平均日增重、胸肌率、胸肌重、屠宰率、屠体重显著或极显著低于对照组(P<0.05或P<0.01)。由此可见,微生物气溶胶可显著降低肉鸭的生产性能,气载需氧菌2.96×105CFU/m3、气载真菌2.63×104CFU/m3、气载革兰氏阴性菌3.09×104CFU/m3、气载内毒素41.78×103EU/m3可初步作为肉鸭养殖环境中的微生物气溶胶上限标准。

REP-PCR对医护人员鼻腔中鲍曼不动杆菌分离株的溯源分析

目的对医护人员鼻腔中的鲍曼不动杆菌进行分离鉴定,对其来源和传播途径进行分析。方法用棉拭子采集10名医护人员和10名非医护人员(大学生)鼻腔样品,分离鉴定非重复鲍曼不动杆菌,采用K-B法检测其对13种常用抗生素的敏感性;利用多重PCR扩增OXA型碳青霉烯酶耐药基因;应用基因外重复回文序列REP-PCR对分离株进行分子多样性分析。结果共分离19株鲍曼不动杆菌,其中分离自医护人员鼻腔12株,分离自非医护人员鼻腔7株。K-B法检测Ab的耐药性,医护人员鼻腔分离株对环丙沙星(CIP)、亚胺硫霉素(IPM)、头孢曲松(CRO)、环磷酰胺(CTX)和新诺明(SXT)耐药率均≥41.7%,非医护人员分离株耐药率均≤3%;耐药基因检测19株菌中都携带OXA-51基因,且医护人员鼻腔分离株携带OXA-23菌株数多于非医护人员鼻腔分离株。另外两种未检出耐药基因(OXA-24和OXA-58)。REP-PCR显示,医护人员鼻腔分离株、非医护人员鼻腔分离株Ab的8种基因型(A-H)中同源性≥90%的有33株菌,占94.29%(33/35)。结论鲍曼不动杆菌不仅能通过直接接触传播,也可能存在气源性传播途径。

固体甲醛熏蒸消毒对畜禽舍微生物气溶胶的影响

使用国际标准的Anderson-6级空气微生物收集器检测消毒前后牛、羊、鸡、猪舍内和舍外的气载需氧菌、气载真菌和气载大肠杆菌浓度变化,并分析以上各菌种在上述收集器不同层级中的比例变化。结果显示,消毒后的动物舍内的气载需氧菌、气载真菌和气载大肠杆菌浓度均显著低于消毒前的浓度(P<0.05或P<0.01),消毒后的舍内以上微生物气溶胶浓度与舍外的浓度差异不显著(P>0.05),且消毒后舍内的气载需氧菌、气载真菌和气载大肠杆菌在收集器5,6层级上的比例整体上呈现大幅下降的趋势。由此可见,固体甲醛熏蒸的消毒方式可有效降低畜禽舍内的微生物气溶胶浓度,且对可进入肺泡的小颗粒微生物气溶胶消毒效果更佳。