Sandwich教学法在高职医学院校生物化学实验教学中的应用

目的探讨在高职医学院校生物化学实验教学中应用Sandwich教学法的教学效果。方法以本校2012级高职医学护理专业3年制的6个班学生为研究对象,每班均为50人,随机分到两个实验室授课,每个实验室各25人,符合Sandwich教学方法的适用条件。将上述班级随机分为观察组与对照组两组,每组150人。对照组采用传统教学法进行授课,观察组则引入Sandwich教学法。结果观察组学生平均期末成绩为(82.72±11.28),显著高于对照组(71.29±10.82),差异具有统计学意义(P<0.05);观察组综合成绩平均为(85.32±13.58),明显高于对照组(75.87±11.93),差异具有显著性(P<0.05)。观察组学生中表达对教学效果非常满意者96例(64%),满意36例(24%);对照组学生中仅有66名(44%)学生表示非常满意,24名(16%)学生表示满意,其他均表示为一般或不满意。组间比较观察组学生满意情况明显优于对照组,差异具有显著性(P<0.05)。结论 Sandwich教学法转变了课堂中教师的主导地位,充分发挥了学生的自主性,提升了教学质量与学生满意度。

大鼠软骨生成过程表达的小分子RNA生物信息学分析

目的：分析大鼠软骨形成过程中小分子 RNA（sRNA）表达谱变化及其基因功能,探讨软骨细胞增殖与分化的机制。方法取新生、断乳、性成熟3个时间节点的雌性 SD 大鼠股骨头软骨构建 sRNA 文库,Solexa 测序平台鉴定软骨组织全部 sRNA 序列表达,所得的全部清洁序列与 SD 大鼠基因组信息比对,并做生物信息学分析。结果3个文库筛选出与基因组序列完全匹配序列,分别对应着217921条（41.23%）、196650条（38.74%）、245436条（41.54%）unique sRNA 序列。长度为20~24 nt 的 sRNA 占比：d 0为71.94%、d 21为72.85%、d 42为86.39%；其中,长度为22 nt的 sRNA 约占清洁序列的一半。文库序列分布特征,符合高质量 sRNA 文库的特征。超过总数62%的清洁序列来自于成熟 miRNA 序列,但在3个文库中的占比却仅仅只有0.69%、0.78%和0.63%。约60%的unique sRNA 序列无法与 miRBase 20.0和 Rfam9.1匹配。结论3个 sRNA 文库的 miRNA 这种分布模式,可能暗示着有功能不同或者来源各异的 miRNA,参与了对骨骼发育和骨形成关键阶段软骨细胞增殖与分化的调控。

温度、二硫苏糖醇、基因定点突变对溶菌酶和肽基脯氨酰顺反异构酶蛋白交联反应的影响

目的研究二硫键对溶菌酶和肽基脯氨酰顺反异构酶(PPI)蛋白交联聚集作用的影响。方法以人总RNA为模板设计引物进行人类PPI基因的克隆,以获取的正常型表达载体为模板,利用PCR定点突变的方法破坏掉PPI基因中形成二硫键的两个半胱氨酸残基(Cys),将其构建到p Trc His C-hpp I原核表达系统,经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达获得正常型和突变型PPI蛋白,与溶菌酶在不同温度、还原剂二硫苏糖醇(DTT)存在条件下进行蛋白聚集反应,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western印迹法分析和鉴定交联情况。结果溶菌酶和PPI在临界变性温度时有明显的二聚体和多聚体条带;反应体系中加入DTT后,几乎观察不到交联条带,两者的异源蛋白交联反应出现同样的现象;将突变型PPI置于与正常型PPI完全相同的反应条件下,均没有任何蛋白聚集现象。结论二硫键是蛋白质交联和多聚化发生的前提,破坏二硫键将导致蛋白结构和交联作用的丧失。

不同温度对人类肽基脯氨酰顺反异构酶蛋白及突变体交联反应的影响

目的研究不同温度对人类肽基脯氨酰顺反异构酶(hPPI)体外交联反应的影响。方法以人总RNA为模板设计正反引物进行h PPI基因克隆,以获取的正常型表达载体为模板,利用PCR定点突变的方法将hPPI基因中两个半胱氨酸(Cys)突变为丝氨酸(Ser),经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达正常型和突变型蛋白,在不同温度条件下进行蛋白交联反应,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定交联现象。结论与溶菌酶表现相似,正常型hPPI蛋白交联反应随温度升高而逐渐加快,在达到蛋白变性温度时交联反应最明显,出现大量二聚体和多聚体条带;将突变型hPPI蛋白置于与正常型hPPI蛋白完全相同的反应条件下,观察不到任何交联条带。结论热变性可显著改变蛋白高级结构,蛋白对热变性无明显特异性,在变性温度临界条件下表现出相同的聚合作用;二硫键可导致蛋白结构改变,从而影响交联结果。

甲状腺肿瘤组织中VEGF、p73蛋白表达情况及相互关系研究

目的探析甲状腺肿瘤组织中血管内皮生长因子（VEGF）、肿瘤抑制因子（p73）的表达及其相关性。方法选取某院2013年1月至2014年1月收治的60例甲状腺癌和60例甲状腺腺瘤患者作为观察对象，并将同期60例健康人群作为对照，采用免疫组化（SP）法检测组织中VEGF和p73的表达，并采用Pearson相关分析研究组织中VEGF和p73的相关性。结果甲状腺癌组组织中VEGF阳性表达率86．7％（52，60）显著高于甲状腺腺瘤组71．7％（43，60），高于正常对照组0％，差异均有统计学意义（P〈0．05）；甲状腺癌组组织中p73阳性表达率93．3％（56，60）显著高于甲状腺腺瘤组80．0％（48，60），高于正常对照组0％，差异均有统计学意义（P〈0．05）。甲状腺组织中VEGF和p73呈正相关，在甲状腺癌组织中相关系数r=0．723，P〈0．05，在甲状腺腺瘤组织中相关系数r=0．542，P〈0．05。结论甲状腺肿瘤患者组织中VEGF和p73蛋白表达均显著升高，且二者呈正相关。

大肠杆菌L-酒石酸脱氢酶β亚基体外分子交联

为证明高音等提出的蛋白质交联三步假说,通过PCR技术扩增大肠杆菌L-酒石酸脱氢酶β亚基(L-tartrate dehydratase beta subunit,TtdB)野生型与Cys/Ser突变型目的基因,构建带6×His标签的诱导型表达载体pTrcHisC-TtdB。重组蛋白以包含体形式存在,应用TALON固定化金属亲和树脂(Immobilized metal affinity chromatography,IMAC)以变性的方法纯化,通过分步透析逐步去除变性剂的方法复性,复性率可达70%。将复性后的两种蛋白通过热诱导去折叠和氧化重折叠方法进行体外蛋白质分子交联实验。SDS-PAGE分析表明:野生型TtdB在其变性的临界温度反应时,出现交联二聚体和多聚体;在氧化重折叠后SDS-PAGE前加入100mmol/LDTT时,交联强度明显减弱。这种DTT打不开的交联即为异肽键交联;若在其氧化重折叠反应液中加入DTT则没有任何交联。突变型TtdB在与野生型TtdB相同的热诱导去折叠条件下,完全没有二聚体和多聚体的形成。这说明分子间二硫键的形成能促进随后分子间异肽键的形成。

NSCLC组织中ezrin蛋白、E-钙黏蛋白和CD44V6蛋白表达之间的关系研究

目的研究和探讨非小细胞肺癌(non-small-cell lung cancer,NSCLC)组织中埃兹蛋白(ezrin)的表达情况,并对其和E钙粘蛋白(E-cadherin)、CD44V6蛋白表达之间的关系进行分析。方法研究材料选自2010年6月-2012年12月就诊于学校附院的经手术病理证实的原发性NSCLC患者的相关组织,应用免疫组织化学SP法对ezrin蛋白、E-cadherin蛋白和CD44V6蛋白表达情况进行研究,同时联合Western blot法分析上述三种蛋白在部分NSCLC组织和对应癌旁组织中的表达情况,并对其相关性进行分析。结果在100例NSCLC组织中erzin蛋白主要在肿瘤细胞胞质内均匀弥散分布,呈棕黄色颗粒表达,阳性表达62例,阳性表达率为62%。在40例NSCLC患者癌旁组织中没有发现ezrin蛋白的阳性表达;在40例NSCLC组织中ezrin蛋白相对表达量明显高于相应的癌旁组织,差异具有显著性(P<0.05)。E-cadherin蛋白阳性表达55例,阳性表达率为55%,而CD44V6蛋白阳性表达59例,阳性表达率为58%,ezrin蛋白与E-cadherin蛋白表达呈负相关;而ezrin蛋白与CD44V6蛋白表达呈正相关。结论三种蛋白在NSCLC发展和转移中发挥重要的作用,联合检查有利于判断NSCLC的发展情况和预后情况,有利于临床诊断和治疗。

阿魏酸川芎醇酯对氧化损伤内皮细胞ICAM-1表达的影响

目的观察川芎嗪衍生物阿魏酸川芎醇酯(TMPF)对H2O2引起的脐静脉内皮细胞(ECV304)氧化性损伤的保护作用,并初步探讨其作用机制。方法以H2O2损伤ECV304细胞建立氧化损伤模型,以川芎嗪(TMP)作为阳性对照药物,观察TMPF对氧化损伤的ECV304细胞的保护作用[按试剂盒说明测量微量丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活力;采用Real-Time PCR测定ICAM-1mRNA含量;采用Elisa检测ICAM-1蛋白表达]。结果与正常对照组比较,H2O2损伤组细胞内的MDA含量明显升高(P<0.01),TMP与TMPF各浓度保护组MDA含量明显低于H2O2损伤组(P<0.05或P<0.01),且TMPF保护组MDA含量均低于同剂量TMP保护组(P<0.05);与正常对照组比较,H2O2损伤组细胞内的SOD水平明显降低(P<0.05或P<0.01),在12.5μmol.L-1 TMP保护组和TMPF保护组与H2O2损伤组相比差异无统计学意义(P>0.05),在TMP和TMPF的其他浓度上与H2O2损伤组相比差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。H2O2可上调ICAM-1mRNA的含量,正常对照组ICAM-1mRNA的含量为H2O2损伤组的0.245倍,25.0μmol.L-1 TMP保护组ICAM-1mRNA的含量为H2O2损伤组的0.454倍,25.0μmol.L-1 TMPF保护组ICAM-1mRNA的含量为H2O2损伤组的0.376倍。H2O2损伤组细胞ICAM-1蛋白的表达量显著高于正常对照组(P<0.01),25.0μmol.L-1 TMP保护组ICAM-1蛋白的表达量低于H2O2损伤组(P<0.05),而25.0μmol.L-1 TMPF保护组ICAM-1蛋白的表达量显著低于H2O2损伤组(P<0.01)。结论 TMPF对H2O2引起内皮细胞氧化性损伤有明显的保护作用,能减少内皮细胞脂质过氧化物MDA的生成,提高SOD活性,TMPF能降低损伤细胞ICAM-1mRNA的含量及其蛋白表达。TMPF对氧化损伤内皮细胞中ICAM-1表达上调有较强的抑制作用,这可能是TMPF对内皮细胞氧化损伤保护作用的重要机制。

基于转化医学理念的高职医学院校生物化学教学改革初探

我国现行的医学教育体系存在着基础与临床严重脱节的问题,转化医学能弥补这一缺陷。本教改将转化医学理念应用于高职医学生物化学教学,取得了较好效果。本文总结了教学内容与相关临床知识的选取原则、教学效果评价机制及融合思路。

猪瘟病毒同源重组的试验研究

以23株来自全世界的CSFV的编码序列为试验研究对象,首先利用临界偶联法(neighbor-joining)做出23条序列的系统发生树,然后通过SimPlot程序分析找到疑似重组病毒的基因序列以及2条疑似亲本链,结果表明:CSFV39(AF07339)可能是强毒株Shimen和GXWZ02之间发生同源重组后的基因产物。

高职生物化学教学中学生自主学习能力培养的路径研究

医学生必须具备一定的自主学习能力,养成终身学习的习惯,才能跟上日新月异的医学技术发展。本文在生物化学教学中从本校学生的实际情况出发,构建了线上线下教学的融合模式,以及案例式教学法和思维导图的应用策略,达到了预期培养目标。