缺氧/复氧诱导心肌细胞分泌高表达miR-208b的外泌体而调控心肌成纤维细胞活化、迁移和铁死亡

目的探讨缺氧/复氧诱导心肌细胞所分泌的外泌体能否通过miR-208b调控心肌成纤维细胞的生物学功能。方法心肌细胞进行缺氧/复氧处理后,收集所分泌外泌体与心肌成纤维细胞进行共培养,然后用荧光定量PCR、Western blot或酶联免疫吸附试验(ELISA)检测miR-208b、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、CollagenⅠ、CollagenⅢ和谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)的表达,细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测细胞存活力,Transwell检测细胞迁移,商用试剂盒检测活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)和Fe2+的累积。采用单因素方差分析(ANOVA)。结果缺氧/复氧诱导心肌细胞和其分泌的外泌体高表达miR-208b,将此类外泌体加入到心肌成纤维细胞进行共培养时发现,心肌成纤维细胞可以摄入外泌体,从而上调自身miR-208b的表达,进而促进心肌成纤维细胞的存活力和迁移,增强α-SMA、CollagenⅠ和CollagenⅢ的表达,不过miR-208b的抑制物能显著减弱上述外泌体对心肌成纤维细胞生物学功能的调控作用。同时,缺氧/复氧心肌细胞源性外泌体能进一步增强铁死亡主要指标ROS、MDA和Fe2+的累积,抑制铁死亡关键调控因子GPX4的表达,不过miR-208b的抑制物能明显减弱Erastin和缺氧/复氧心肌细胞源性外泌体对铁死亡的影响作用。结论缺氧/复氧心肌细胞源性外泌体能通过高表达的miR-208b而调控心肌成纤维细胞的生物学功能,表明miR-208b是介导心肌细胞和心肌成纤维细胞间通讯的关键分子。

circ_LAS1L调控SFRP5抑制心肌细胞铁死亡

目的探讨心肌缺血-再灌注损伤进展中circ_LAS1L调控分泌型卷曲相关蛋白5(SFRP5)表达的潜在机制和circ_LAS1L/SFRP5通路在大鼠心肌细胞铁死亡中的作用。方法传代培养大鼠胚胎心肌细胞株H9c2细胞,H9c2心肌细胞分别转染或共转染circ_LAS1L过表达载体、circ_LAS1L siRNA、miR-125b mimic、miR-125b siRNA和SFRP5 siRNA,然后进行缺氧/复氧处理。RT-qPCR检测circ_LAS1L和miR-125b的表达,RT-qPCR和Western blot检测SFRP5和GPX4的表达,电镜观察线粒体结构变化,CCK-8法检测细胞存活力,同时检测乳酸脱氢酶(LDH)、活性氧(ROS)、Fe^(2+)和丙二醛(MDA)含量。结果circ_LAS1L-O可增加SFRP5的mRNA和蛋白表达,而抑制circ_LAS1L表达可降低SFRP5的mRNA和蛋白表达(P均<0.05)。miR-125b mimic抑制而miR-125b siRNA促进SFRP5的RNA和蛋白表达,circ_LAS1L-O能减弱miR-125b mimic调控SFRP5表达的作用(P均<0.05);circ_LAS1L siRNA也能逆转miR-125b siRNA对SFRP5的表达调控(P均<0.05)。circ_LAS1L和SFRP5在缺氧/复氧处理的心肌细胞中表达升高,而GPX4表达降低(P均<0.05);SFRP5 siRNA可抵消circ_LAS1L过表达对GPX4表达的调控作用(P均<0.05)。缺氧/复氧导致线粒体明显皱缩和线粒体嵴减少,降低细胞存活力和增强LDH释放,并且促进ROS、Fe^(2+)和MDA的累积,而circ_LAS1L-O明显减弱缺氧/复氧导致的上述变化,si-SFRP5则拮抗circ_LAS1L过表达的作用。结论circ_LAS1L促进SFRP5的表达而抑制铁死亡关键调控因子GPX4的表达,进而参与心肌细胞铁死亡过程;miR-125b能抑制SFRP5的表达,且减弱circ_LAS1L调控SFRP5表达的作用。