胶质瘤多药耐药细胞系C_6/adr的建立及其生物学特性的研究

目的 为研究脑胶质瘤的耐药、机理及逆转 ,建立了C6耐阿霉素细胞株 (C6/adr)MDR细胞系。方法 采用逐渐增加药物浓度联合反复短期暴露法建立了C6/adr细胞系 ,并对其形态学、超微结构及生长特点进行了研究 ,流式细胞术对细胞周期分布及DNA与RNA含量的变化进行了分析 ,观察了其克隆形成率 ,并对染色体进行了分析 ,用RT PCR法、免疫组织化学及流式细胞免疫学方法研究了多药耐药基因mdr 1及其表达的P gp定性、定量研究 ,用RT PCR法对端粒酶的活性进行了研究 ,建立了该耐药株的动物模型 ,并对其耐药性进行了分析 ,采用MTT法分析了耐药谱。结果 HE染色C6/adr与C6相似 ,透射电镜畸形核多见 ,胞浆内有较多的线粒体、核糖体及滑面内质网 ;群体倍增时间 5 5 2h ;传代 2、 3天 ,C6/adrDNA指数及RNA指数无变化 ;细胞周期分布以G0 +G1期为主 ,克隆形成率可达 5 5 % ;染色体众数多集中于 40～ 42条 ,以亚二倍体居多 ;mdr 1基因表达阳性 ,P gp含量为42 5 1%± 7 82 % ,P gp强阳性 ,主要位于细胞膜上 ,端粒酶呈强阳性 ;动物模型其形态学及P gp含量均无变化 ;该细胞株对ADM ,VM 2 6 ,VCR ,5 Fu ,VP 16 ,CDDP耐药 ,对MTX ,CCNU无耐药性。结论 该耐药细胞系C6/adr耐药表型主要为MDR 1,为研究脑胶质瘤的耐药。

气相色谱法测定油脂中棕榈酸单甘油酯与油酸单甘油酯含量

建立了一种利用气相色谱法测定油脂中棕榈酸单甘油酯与油酸单甘油酯含量的方法。样品中加入六甲基二硅氨烷，于９５℃水浴中完成硅烷化反应。样品的平均加标回收率分别为９６．３０％与９７．８２％，ＲＳＤ分别为１．８％与２．１％。最低检出限分别为０．０１μｇ／ｇ与０．１μｇ／ｇ。

钙调蛋白及其基因表达与先天性心脏病右心室舒张性心力衰竭发病关系的研究

目的：探讨先天性心脏病右心室舒张性心力衰竭（ＤＨＦ）患者心肌细胞内Ｃａ２＋超负荷、钙调蛋白及其基因表达的变化。 方法：采用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ技术测定１０例先天性心脏病右心室ＤＨＦ患者（ＤＨＦ组）和６例正常对照（对照组）钙调蛋白及其基因的表达。 结果：ＤＨＦ组患者心肌细胞内Ｃａ２＋含量较对照组高３倍以上，有非常显著性差异（Ｐ＜０．０１）；肌浆网钙－三磷酸腺苷酶（ＳＲ Ｃａ２＋ＡＴＰａｓｅ）和细胞膜Ｌ型Ｃａ２＋通道的信使核糖核酸（ｍＲＮＡ）水平较对照组减低，有显著性差异（Ｐ均＜０．０５），而肌浆网磷酸受纳蛋白、兰尼碱受体和肌集钙蛋白的ｍＲＮＡ表达较对照组无显著性差异；ＳＲ Ｃａ２＋ＡＴＰａｓｅ蛋白的相对含量较对照组减低，有显著性差异（Ｐ＜０．０５＝；磷酸受纳蛋白的相对含量无显著性差异。 结论：细胞膜Ｌ型Ｃａ２＋通道和ＳＲ Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ基因表达减低是导致先天性心脏病心肌细胞内Ｃａ２＋超负荷和右心室ＤＨＦ发生的主导因素。

贮存介质对牙周韧带细胞乳酸脱氢酶活性的影响

通过测量乳酸脱氢酶的活性，对两种细胞培养液对牙周韧带细胞活性的保存作用进行了实验研究．结果表明，随着时间的延长，介质中乳酸脱氢酶含量逐渐增加，生理盐水对照组在不同时间乳酸脱氢酶含量均明显高于１６４０培养液组和ＤＭＥＭ培养液组（ｐ＜０．０５）；１６４０培养液组与ＤＭＥＭ培养液组乳酸脱氢酶含量之间无显著性差异（ｐ＞０．０５），提示１６４０培养液和ＤＭＥＭ培养液能够保存牙周韧带细胞的活性，是贮存脱位牙齿的良好介质．

前列腺癌的早期信号——IGF-I

前列腺癌是男性易发的疾病，在欧美发病率极高，在高龄男性中仅次于肺癌。我国前列腺癌发病率在逐渐增加。人前列腺特异性抗原（ＰＳＡ）是前列腺上皮分泌的一种糖蛋白。前列腺癌发生时会释放大量ＰＳＡ进入血液，因此测定血清ＰＳＡ在前列腺癌的诊断和治疗后追踪方面有重...

雄激素对人前列腺细胞中鸟氨酸脱羧酶基因表达的调节作用

为探讨雄激素对人前列腺中鸟氨酸脱羧酶（ Ｏ Ｄ Ｃ）基因表达的调节作用，以研究雄激素诱导前列腺良性增生的分子机理，分离培养了人胎儿前列腺间质细胞，以 Ｍ Ｔ Ｔ 法测定不同浓度 Ｄ Ｈ Ｔ对细胞的促增殖作用；以最适浓度的 Ｄ Ｈ Ｔ（１ ０００ μｇ／ Ｌ）刺激该细胞，分别于 ０，３，６，１２，２４，３０ ｈ 提取总 Ｒ Ｎ Ａ，用斑点杂交及 Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ 法分析测定各组细胞中 Ｏ Ｄ Ｃ ｍ Ｒ Ｎ Ａ 的丰度，并对杂交膜进行薄层扫描定量．结果显示：（１） Ｄ Ｈ Ｔ 对前列腺间质细胞的增殖呈双相调节作用，即在低浓度时随着 Ｄ Ｈ Ｔ 浓度的增加，对该细胞的促增殖作用增强，１ ０００ μｇ／ Ｌ时刺激活性最强，高浓度 Ｄ Ｈ Ｔ 对该细胞的刺激作用降低．（２）斑点杂交显示，在 １ ０００ μｇ／ Ｌ Ｄ Ｈ Ｔ 刺激细胞后 ６ ｈ 时， Ｏ Ｄ Ｃ ｍ Ｒ Ｎ Ａ开始明显升高，２４ ｈ 达高峰（约为 ０ ｈ 的 ４８ 倍），至 ３０ ｈ 有所降低．（３） Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ 结果显示，人胎儿前列腺间质细胞中有两种 Ｏ Ｄ Ｃ ｍ Ｒ Ｎ Ａ，分别为 ２０ ｋｂ 和 ２６ ｋｂ，经扫描定量结果显示：１ ０００μｇ／ Ｌ Ｄ Ｈ Ｔ 对两种 Ｏ Ｄ Ｃ ｍ Ｒ Ｎ

舒张性心力衰竭兔Ca^(2+)调控蛋白mRNA和蛋白质的表达

目的 :探讨心肌细胞内Ca2 +超负荷以及Ca2 +调控蛋白在舒张性心力衰竭 (DHF)发生中的作用。方法 :采用RT -PCR和Westernblot技术测定实验兔Ca2 +调控蛋白mRNA和蛋白质表达的变化。结果 :⑴DHF兔心肌细胞内Ca2 +含量显著高于假手术组 (P <0 0 1) ;⑵DHF兔SRCa2 +-ATPase活性明显低于假手术组 (P <0 0 1) ;⑶DHF兔SRCa2 +-ATPase和细胞膜L型Ca2 +通道的mRNA水平明显低于假手术组 (P <0 0 5 ) ,而磷酸受纳蛋白、兰尼碱受体和肌集钙蛋白的mRNA转录无明显差异 (P >0 0 5 ) ;⑷DHF兔SRCa2 +-ATPase的蛋白质表达明显低于假手术组 (P <0 0 5 ) ;磷酸受纳蛋白的相对含量与假手术组无明显差异 (P >0 0 5 )。结论 :SRCa2 +-ATPase的mRNA和蛋白质表达减低以及细胞膜L型Ca2 +通道mRNA转录减低是导致心肌细胞内Ca2

HPV16 L1-E7重组腺病毒rAd5 HPV16 L1-E7的构建及克隆表达

目的 :研制人乳头瘤病毒 16型 (HPV16)L1 E7重组腺病毒 ,以期获得防治宫颈癌的重组腺病毒减毒活疫苗和嵌合病毒样颗粒疫苗。方法 :以HPV16型野毒株HPV16 114/K为模板 ,利用PCR克隆技术构建可表达HPV16主要衣壳蛋白L1( 1 30 1aa)和转化蛋白E7( 1 60aa)融合基因的重组质粒 pUC19L1 E7,HPV16L1 E7DNA片段经质粒 pBSL1 E7转入腺病毒Ad5穿梭质粒 pCA14L1 E7,与腺病毒质粒pBHG10 共转染 2 93细胞 ,制备重组腺病毒rAd5HPV16L1 E7,密度梯度超速离心纯化HPV16嵌合L1 E7VLP。结果 :成功构建了HPV16L1 E7重组质粒 pUC19L1 E7,制备HPV16L1 E7重组腺病毒rAd5HPV 16L1 E7,HPV16L1 E7融合蛋白可在 2 93细胞中高效表达 ,可达细胞总蛋白的 10 %以上 ,并装配成嵌合病毒样颗粒 (cVLP)。结论 :成功制备了可高效表达HPV16L1 E7嵌合L1 E7VLP的重组腺病毒rAd5HPV 16L1 E7载体疫苗 ,为HPV重组腺病毒疫苗用于宫颈癌的防治打下了基础。构建的 pUC19L1载体可以比较方便的插入外源基因 ,用来构建多价疫苗 。

大鼠血清中二十碳五烯酸与二十二碳六烯酸的气相色谱测定法研究

目的 :用气相色谱测定法观察改变大鼠饲料成分后 ,其血清中二十碳五烯酸 (EPA)与二十二碳六烯酸 (DHA)组分含量的变化。方法 :选用丁二酸二乙二醇酯 (DEGS)色谱柱。样品经提取后用三氟化硼 -乙醚 /甲醇 ,甲酯化处理。结果 :两者酯化率均为 97.1%～ 10 0 .8% ,回收率前者为 92 .8% ,后者为 91.2 %。线性关系前者为 10～ 160mg/L ,后者为 2 0～ 2 0 0mg/L。 结论 :用气相色谱法测定大鼠血清中的EPA与DHA快速、准确且灵敏度高。

气相色谱法测定血清中布洛芬浓度

用气相色谱法测定人体血清中布洛芬浓度。采用OV— 1 7柱 ,布洛芬经甲酯化处理。正十八烷为内标 ,保留时间分别为 4 92min与 6 2 6min。方法快速、简便。回收率 94 66% ,RSD =1 4 6% ,线性范围 1～ 4 0 μg/ml。r =0 .9996,最低检出浓度为 0 .2 μg/ml。经临床应用 。

人体内毒物1605气相色谱法的测定

人体内毒物１６０５气相色谱法的测定刘传华，宋承木，孙梅新，唐卫华（１山东医科大学分子生物学实验室，２山东医科大学第二附属医院，３山东省农药研究所，４山东医科大学附属医院病理科）１６０５（甲基对硫磷Ｍｅｔｈｙｌｐａｒａｔｈｉｏｎ）为农业、林业等常用的杀...

冠心病患者血清中 CMV 抗体水平的研究

冠心病患者血清中ＣＭＶ抗体水平的研究赵丽１邵丽华２杨燕平３姜维林４黄涛５（１山东医科大学分子生物学实验室２山东医科大学卫生化学教研室３山东医科大学诊断学教研室４山东医科大学分析化学教研室５山东省卫生防疫站病毒室）我们用固相酶联免疫吸附测定（ＥＬＩＳＡ...

高效液相色谱法测定牙髓组织中儿茶酚胺的含量

应用高效液相色谱法对牙髓组织中儿茶酚胺进行定量研究。１０颗牙齿的牙髓取自正畸原因而拔除的健康恒前磨牙。结果表明正常牙髓组织中去甲肾上腺素含量为２３．４７±０．５２μｇ／ｇ，多巴胺含量为１９．１７±１．０３μｇ／ｇ。

雄激素相关酶活性与BPH关系的研究

测定良性前列腺增生症(BPH)和正常人前列腺组织及不同细胞中5α-还原酶、鸟氨酸脱羧酶(ODC)及γ-谷氨酰转肽酶(r-GT)活性。结果显示:(1)5α-还原酶主要存在于前列腺间质细胞核中,BPH前列腺间质细胞中5α-还原酶活性约为正常前列腺的2倍;(2)BPH前列腺全匀浆和间质细胞中ODC活性分别为正常组织相应组分的2.4和2.6倍;(3)BPH前列腺全匀浆、上皮和间质细胞中r-GT活性分别为正常前列腺相应组分的4.5倍、3.2倍和4.1倍。提示5α-还原酶、ODC及r-GT活性升高与BPH的发生可能有密切关系。

GC色谱法同时测定肝素钠粗品中残留甲醇、乙醇与丙酮的含量

肝素钠(heparium natricum)为猪、羊或牛的肠粘膜中提取的硫酸氨基葡聚糖的钠盐,属粘多糖类物质,具有延长血凝时间的作用。临床常用于肺心病、肾病、肝炎、冠心病及肺动脉栓塞、周围静脉血栓等症。在肝素钠粗加工中,往往带有残余的甲醇、乙醇与丙酮,为控制产品质量,反复摸索与试验,得到本文GC法同时能测定肝素钠中残余的甲醇、乙醇与丙酮的含量。此方法操作简便,灵敏度高,分离效果好,数据可靠,可作为控制质量检测法应用。

牙本质龋中有机酸含量的比较研究

目的 :通过对牙本质龋中有机酸含量的测定 ,探讨牙本质龋形成原因。 方法 :32名病人 ( 1 7～ 72岁 )的 40颗牙本质龋患牙标本以 2 .5%偏磷酸溶解 ,低温离心 ,上清液作气相色谱分析。 结果 :所有牙本质龋患牙中均检测到乳酸、甲酸、乙酸、丙酸和丁酸 ,各有机酸含量由高到低依次为乳酸 ( 32 .78± 2 .72 ) g/L,甲酸 ( 2 3.65± 1 .53) g/L,乙酸 ( 5.37± 1 .2 6) g/L,丙酸 ( 3.0 5± 0 .79) g/L,丁酸 ( 0 .71± 0 .66) g/L。 结论 :牙本质龋中的有机酸以乳酸含量最高 ,乳酸、甲酸、乙酸和丙酸占所有有机酸的 98%以上。

HSP70基因转染对人心肌细胞的保护作用

目的 :探讨利用热休克蛋白 70 (HSP70 )基因转染技术保护人心肌细胞的可行性。方法 :用脂质体介导的基因转移技术 ,研究了外源性HSP70基因高表达对人心肌细胞的保护作用。结果 :转染的心肌细胞在正常温度 ( 37℃ )下 ,可高水平表达HSP70 ,模拟缺血实验后 ,心肌肌酸激酶 (CK MB)释放量为( 159.5± 2 4 .1)IU/L ,细胞生存率为 ( 33.78± 5.4 ) % ,其抗模拟缺血能力明显高于对照组 ,而与热休克预处理后 2 4小时组无显著差异。结论

舒张性心力衰竭患者Ca^(2+)调控蛋白基因转录和蛋白质表达的研究

目的 探讨心肌细胞内Ca2 + 超负荷及Ca2 + 调控蛋白在舒张性心力衰竭 (DHF)患者发生中的作用。方法 采用RT PCR和Westernblot技术测定DHF患者和正常对照组Ca2 + 调控蛋白mRNA转录和蛋白质表达的变化。结果 与正常组相比 ,DHF患者心肌细胞内Ca2 + 含量提高 3倍以上 (116 3.88± 5 6 8.6 7vs 2 47.75± 146 .86 ,P <0 .0 1) ;肌浆网 (SR)Ca2 + ATPasemRNA水平减低 33.6 4%(0 .71± 0 .19vs 1.0 7± 0 .11,P <0 .0 5 ) ,细胞膜L型Ca2 + 通道mRNA水平减低 30 .19% (0 .74± 0 .2 0vs1.0 6± 0 .13,P <0 .0 5 ) ,SR磷酸受纳蛋白和兰尼碱受体、肌集钙蛋白的mRNA转录无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ;Ca2 + ATPase蛋白的相对含量明显低于对照组 (0 .76± 0 .11vs 1.0 1± 0 .0 3,P <0 .0 5 ) ;磷酸受纳蛋白的相对含量无显著性差异 (0 .98± 0 .0 4vs 1.0 0± 0 .0 2 ,P >0 .0 5 )。结论 SRCa2 + ATPase基因转录和蛋白质表达减低以及细胞膜L型Ca2 + 通道基因转录减低是导致心肌细胞内Ca2 +