HPV16L1 ORF的基因克隆及在大肠杆菌中的表达

目的 :获得足够量的人乳头瘤病毒 16型 (HPV16)L1融合蛋白及含HPV 16L1ORF序列的基因重组体。方法 :通过PCR扩增获得HPV16L1基因片段 ,将此片段插入原核细胞表达载体pGEMEX 1,构建相应的重组表达质粒 pGEMEX L1,将此质粒转化大肠杆菌JM 10 9(DE3) ,得到的转化子经IPTG诱导表达后进行菌体蛋白的Westernblotting免疫印迹分析。结果 :HPV16L1基因重组体构建成功 ,克隆的目的基因片段在大肠杆菌中产生的融合表达产物在Westernblotting检测中具有和抗HPV16L1阳性血清反应的抗原性。结论 :HPV16L1基因片段可在大肠杆菌中得到有效表达 。

HPV16E6羧基端编码基因的克隆及真核细胞表达

目的 :探讨用人乳头瘤病毒 16型 (HPV16)早期基因E6羧基端基因片段 (E6C)研制DNA疫苗的可行性。方法 :采用PCR方法从质粒 pHPV16中获得E6C端基因片段 ,将其克隆入含巨细胞病毒(CMV)启动子的真核表达载体 ,脂质体介导基因转染LA795小鼠肺腺癌细胞并检测E6C的表达。结果 :成功构建了真核表达质粒 pLNCE6C ,免疫组化结果显示真核表达质粒pLNCE6C在LA795细胞中获得有效表达。结论 :选择去除转化功能区的E6C端基因构建真核表达质粒是一有益的尝试 。

宫颈癌组织中HPV16E6的基因克隆及其在大肠杆菌中的表达

目的 :进行人乳头瘤病毒 16型相关肿瘤的E6血清学研究。方法 :采用聚合酶链反应 (PCR)从宫颈癌组织DNA中扩增出HPV16E6基因片段 ,克隆至测序质粒 pGEM T中 ,并用限制性内切酶将HPV16E6基因切下 ,克隆至表达质粒pGEMEX 1中 ,经IPTG诱导表达为融合蛋白 ,分子量约 4 5KD。结果 :融合蛋白占菌体总蛋白的 2 5% ,免疫印迹检测表明HPV16E6融合蛋白能被抗HPV16E6抗体识别。结论

人CD137单抗诱导不同状态T细胞增殖和凋亡的研究

为了研究一种新的T细胞共刺激分子—CD137对不同状态T细胞增殖和凋亡的双重调节作用。采用3 H TdR掺入法测定T细胞增殖 ,用流式细胞仪测定细胞凋亡。结果显示 :(1)CD137单抗可与T细胞表面的CD137抗原结合 ,明显增强PHA刺激T细胞增殖 ,使T细胞增殖指数较PHA单独作用高 2～ 3倍 ,但CD137单抗单独不能刺激T细胞增殖 ;(2 )对于慢性活化的T细胞 ,CD137单抗可协同PHA诱导T细胞凋亡 ,使T细胞凋亡率从PHA单独作用的 19 2 0 %增加到 36 31% ,CD137单抗单独并不能诱导慢性活化T细胞凋亡。CD137单抗一方面可协同PHA刺激静止状态T细胞的增殖 ,另一方面可协同PHA诱导慢性活化T细胞凋亡 ,对T细胞起双重调节作用。