增强型绿色荧光蛋白的色谱分离和纯化

增强型绿色荧光蛋白(EGFP)是生物领域常用的标记物。在前期成功克隆表达EGFP的基础上,本实验建立了两步分离纯化EGFP的色谱方法,并验证其分离纯化效果,检验EGFP的活性。首先用金属螯合亲和色谱柱His-Trap HP对EGFP的重组菌体破碎上清液进行初步分离,再用葡聚糖凝胶排阻色谱柱Sephadex G-10 HR对其进行脱盐纯化。采用丙烯葡聚糖凝胶排阻色谱柱Sephacryl S-300 HR和十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测分离纯化后的EGFP纯度。最后通过荧光分光检测器和非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native-PAGE)验证分离纯化后的EGFP是否具有荧光活性。结果表明该方法可以简便快速地分离纯化EGFP,纯度超过98%,同时保持了EGFP的荧光活性。

MMPs在动脉粥样硬化中的作用及其抑制剂的研究进展

基质金属蛋白酶(MMPs)是一类肽链内切酶,因其降解细胞外基质(ECM)和具有金属依赖性而得名。MMPs能调节单核细胞、巨噬细胞及血管平滑肌细胞(VSMCs)的黏附、迁移、增殖等,广泛参与动脉粥样硬化(AS)发展的各个阶段。正常生理情况下,MMPs与组织金属蛋白酶抑制物(TIMPs)保持平衡;而在AS病理情况下,因MMPs/TIMPs升高而失衡。因此,通过使用特异性抑制剂来抑制某些MMPs可能为治疗AS提供新思路。现就MMPs在AS中的作用及其抑制剂研究做一综述。