山东临沂部分县区花生收获前后黄曲霉毒素B_1污染情况研究

目的了解花生从收获前到收获、储存期间黄曲霉毒素B1(AFB1)污染的环节,为预防花生AFB1的污染提供科学依据。方法 2014年,在山东临沂市选择花生种植范围较广的5个县,分别于收获前1~2周、收获时、收获晾干后1个月和储存3个月采集花生样本共260份,酶联免疫法(ELISA)检测花生AFB1的污染情况,并对结果进行分析。结果 260份花生样品中,收获前、收获时样品中AFB1均小于2μg/kg,收获晾干后1个月和储存3个月各有1份样品AFB1含量严重超标,分别是81.07μg/kg和为254.27μg/kg,阳性率均为1.27%;总阳性率为0.77%。结论 2014年临沂部分地区花生中AFB1阳性率较低,污染主要发生在收获后的晾晒和储存期,提示科学晾晒和储存是预防花生AFB1污染的重要措施之一。

艾滋病痴呆综合征患者HIV-1 Vpr基因多态性及氨基酸序列分析

目的 研究艾滋病痴呆综合征（AIDS dementia complex,ADC）患者体内不同部位来源的HIV-1 Vpr基因突变及其氨基酸序列的改变,为HIV-1神经致病机制的研究提供依据.方法 取1例ADC患者外周（淋巴结、脾脏、肝脏）和中枢神经系统（脑膜、额叶灰质、额叶白质、颞叶皮质、基底核）共8个部位的尸检标本基因组DNA,巢式PCR扩增并克隆HIV-1 Vpr基因,与克隆载体pMD19-T连接,转化大肠杆菌DH5α后,分别挑取5个阳性菌落进行Vpv基因测序,测序结果通过MEGA6生成系统进化树并计算基因距离,SNAP进行同义/非同义替换值（ds/dn）的计算并分析氨基酸位点的改变.结果 该病例感染的病毒是HIV-1 B亚型,分离自ADC患者不同组织的HIV-1 Vpr基因序列存在差异,其中枢神经系统和外周HIV-1 Vpr基因序列在系统进化树中相互交织在一起,中枢和外周与HXB2 Vpr基因距离差异无统计学意义,所有HIV-1 Vpr基因序列的ds/dn=3.3749.与标准序列相比,该病例的HIV-1 Vpr基因编码的氨基酸序列有22个位点发生了变异,并且中枢各部位部分氨基酸位点的变异与外周不同.结论 ADC患者体内HIV-1 Vpr序列存在变异,且在外周和中枢不同部位中的变异不同,这些变异导致Vpr氨基酸位点的改变对Vpr蛋白生物学活性的影响及在ADC发病机制中的作用,还有待进一步研究.

HIV-1 Vpr蛋白对小鼠神经瘤母细胞N2a活性及细胞周期的影响

目的探讨HIV-1 Vpr蛋白对小鼠神经细胞的毒性作用。方法巢式PCR扩增了1例HIV相关痴呆(HIV associated dementia,HAD)和1例非HAD的艾滋病患者脾(spleen,SPL)、脑膜(meninges,MG)共4个部位的HIV-1 vpr基因测序,对基因序列和氨基酸位点进行分析。构建pEGFP-N1-vpr真核表达载体,脂质体法转染N2a细胞,Western blot检测Vpr蛋白在N2a细胞中的表达,流式细胞术研究了不同来源的Vpr蛋白对N2a细胞活性和细胞周期的影响。结果PCR扩增出HIV-1 vpr基因,序列分析显示vpr基因序列属于HIV-1B亚型,HAD和非HAD患者中枢来源的Vpr蛋白在C末端84、86和87位存在氨基酸位点的突变;Vpr蛋白可抑制神经细胞活性,导致G2周期阻滞,不同来源的Vpr作用存在差异,HAD患者MG来源的Vpr蛋白,表现出更强的抑制细胞活性和G2周期阻滞能力。结论Vpr蛋白关键氨基酸位点的变异可致其生物学功能的明显改变,其在HAD发病机制中的意义仍待进一步研究。