MAPK信号通路在酒精性肝病发病中作用研究进展

酒精性肝病（alcoholic liver disease,ALD）是长期大量饮酒导致的一种渐进性肝病,包括酒精性脂肪肝（alcoholic fatty liver,AFL）、酒精性肝炎（alcoholic hepatitis,AH）、酒精性肝纤维化和酒精性肝硬化等。由于特殊的酒文化以及近年来经济水平的提高,我国酒精性肝病的发病率日渐增加,已成为继乙型肝炎之后的第二大肝病,如何预防、

1-溴丙烷对大鼠大脑线粒体损伤及依达拉奉保护作用的观察

目的观察1-溴丙烷(1-BP)对大脑线粒体损伤和依达拉奉(EDA)的保护作用。方法将成年雄性Wistar大鼠随机分为对照组、1-BP(800 mg/kg·bw)组、1-BP+1 mg/kg·bw EDA组、1-BP+3 mg/kg·bw EDA组、1-BP+5 mg/kg·bw EDA组、5 mg/kg·bw EDA对照组,每组12只。分别经灌胃和腹腔注射给予1-BP和EDA,1次/d,连续12 d。动物处死后,迅速剥离大脑,采用差速离心法提取大脑前额叶皮层线粒体,检测细胞线粒体复合体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ活性;测定还原型谷胱甘肽(GSH)和氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量,并计算GSH/GSSG比值;采用抗Neu N抗体进行免疫组化染色,计数神经元。结果 1-BP明显降低大脑前额叶皮层细胞线粒体复合体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ活性(P<0.05,P<0.01);1-BP组动物大脑皮层GSH含量也较对照组降低(P<0.01),GSSG含量升高(P<0.01),GSH/GSSG比值明显降低(P<0.01);给予1-BP染毒后,大脑前额叶皮层神经元明显减少(P<0.01)。1-BP染毒同时给予不同剂量的EDA,大鼠大脑前额叶皮层线粒体复合体活性均有不同程度的升高;GSH含量降低也被明显逆转,GSH/GSSG比值相应升高(P<0.05,P<0.01);神经元丢失明显改善(P<0.05,P<0.01);EDA对1-BP诱导大脑损伤的保护作用呈现剂量-效应关系(P<0.05)。结论 1-BP导致大脑皮层线粒体损伤,脑内氧化应激及神经元丢失,EDA可有效减轻1-BP神经毒性。

农药在阿尔兹海默病发病机制中的作用研究进展

阿尔兹海默病(Alzheimer’s disease,AD)是一种常见的神经退行性疾病。农药作为环境污染物在其发生发展中起重要作用,研究农药与AD发病机制的关系对于预防、治疗该病有重大意义和应用价值。该文从脑内β淀粉样蛋白沉积、Tau蛋白过度磷酸化等AD病理改变入手,综述了农药在其发病机制中的作用,并对未来研究趋势进行展望。

DAS、DADS、DATS和大蒜油对大鼠降血脂功能的研究

目的比较二烯丙基硫化物(Diallyl sulfide,DAS)、二烯丙基二硫(Diallyl disulfide,DADS)、二烯丙基三硫(Diallyl trisulfide,DATS)和大蒜油对于饲喂高脂饲料雄性Wistar大鼠的降血脂效果。方法 70只健康雄性Wistar大鼠(200±20) g,适应性喂养7 d后,随机分为溶剂对照组10只和实验组60只。实验组采用高脂饲料饲喂。7 d后实验组根据大鼠血清总胆固醇(TC)水平,随机分为高脂模型组、高脂+DAS组(160 mg/kg·bw)、高脂+DADS组(60 mg/kg·bw)、高脂+DATS组(40 mg/kg·bw)、高脂+大蒜油组(100 mg/kg·bw)和高脂+辛伐他汀对照组(4 mg/kg·bw),经口灌胃,1次/d,连续28 d。处死动物后检测血清中甘油三酯(TG)、TC、高密度脂蛋白(HDL-C)和低密度脂蛋白(LDL-C);肝组织匀浆检测TG和TC量;油红O染色观察脂肪在肝组织的沉积情况。结果与高脂模型组相比,DADS和DATS干预组TC、TG和LDL-C浓度下降(P<0.01或0.05),HDL-C浓度上升(P<0.01);大蒜油干预组TC和TG浓度下降(P<0.01或0.05),HDL-C浓度上升(P<0.01),差异均有统计学意义。与高脂模型组相比,DAS、DADS、DATS与大蒜油干预组肝匀浆的TG和TC浓度均下降(P<0.01或0.05),差异均有统计学意义。油红O染色光学显微镜下观察,与高脂模型组相比,DAS、DADS、DATS和大蒜油干预组脂滴数目明显减少,脂滴面积分别减少56.10%、96.29%、90.04%和81.18%(P<0.01或0.05),差异均有统计学意义。结论 DADS、DATS和大蒜油均有降低血脂的作用,其中以DADS效果最佳。

二烯丙基三硫90d经口染毒对Wistar大鼠的亚慢性毒性作用

目的研究二烯丙基三硫(Diallyl Trisulfide,DATS)对Wistar大鼠的亚慢性毒性作用。方法 SPF级Wistar大鼠80只,按体重随机分为玉米油对照组、DATS低(30 mg/kg)、中(60 mg/kg)、高(90 mg/kg)剂量组每组20只,雌雄各半。连续灌胃染毒90 d,实验结束后,处死大鼠,检测血常规、血清生化和脏器系数等,并观察病理改变。结果雄性DATS低、中、高剂量组白细胞数均高于对照组(P<0.05),高剂量组血小板高于对照组(P<0.05);雌性低、高剂量组白细胞高于对照组(P<0.05);雄性DATS中、高剂量组肝脏系数高于对照组(P<0.05),高剂量组脾脏系数高于对照组(P<0.05),中剂量组肾脏系数高于对照组(P<0.05),雌性DATS染毒组肝脏系数、肾脏系数高于对照组(P<0.01,P<0.05),肉眼观察雌雄大鼠均出现组肝、脾、肾增大,颜色变深,病理切片雌雄中、高剂量组肾脏、脾脏出现明显病理学改变。结论 DATS经口染毒可引起大鼠白细胞升高和肝、脾肿大,高剂量DATS对大鼠肝、脾可能有一定毒性。

NF-κB和Nrf2在DHA拮抗1-溴丙烷中枢神经毒性中的作用

目的观察核因子-κB(NF-κB)与NF-E2相关因子2(Nrf2)在DHA拮抗1-溴丙烷(1-BP)中枢神经毒性中的作用。方法 48只Wistar大鼠随机分为对照组、1-BP组、250 mg/kg DHA+1-BP组(LDHA组)和500 mg/kgDHA+1-BP组(HDHA组)。各组动物均经口给予1-BP和DHA,连续12 d。Western blotting和免疫荧光检测大脑前额叶皮层胞浆组分中NF-κB、Nrf2的激活、下游Ⅱ相酶的蛋白表达、大脑星形胶质细胞的激活及4-HNE氧化修饰蛋白质的变化。结果与对照组比较,1-BP组大脑胞浆和胞核中NF-κB、Nrf2的表达以及下游Ⅱ相酶的蛋白表达升高(P<0.05),与1-BP组相比,LDHA组和HDHA组NF-κB及Ⅱ相酶的蛋白表达降低(P<0.05),而Nrf2表达增加(P<0.05);与对照组比较,1-BP组星形胶质细胞激活数目增加,与1-BP组相比,LDHA组和HDHA组细胞激活数目减少;1-BP组4-HNE修饰蛋白含量与对照组相比显著增加(P<0.05),与1-BP组比较,LDHA组和HDHA组4-HNE蛋白含量降低(P<0.05)。结论 DHA通过抑制NF-κB并且激活Nrf2,呈现对1-BP中枢神经毒性的拮抗作用。

邻苯二甲酸二乙基已酯对小鼠脂肪和葡萄糖代谢的影响

目的探讨不同剂量的邻苯二甲酸二乙基已酯(DEHP)暴露对脂肪和葡萄糖代谢的影响。方法选用C57雄性小鼠40只,随机分为对照组和3个实验组,每组10只。3个实验组分别经灌胃给予0.05、5和500 mg/kg·bw的DEHP,连续4周。期间定期记录体重和饲料消耗情况,实验结束前进行葡萄糖耐量试验。实验结束,摘眼球取血,检测血糖及血脂;分离肝、棕色脂肪、腹壁脂肪和附睾脂肪,计算脏体比;肝油红O染色检测脂肪蓄积情况。结果实验期间,各组小鼠体重均呈增长趋势,其中500 mg/kg·bw DEHP组小鼠增重明显高于对照组(P<0.05);小鼠肝重量增加,肝脏系数明显高于对照组及其他2个剂量组(P<0.05)。3个DEHP染毒组小鼠腹壁脂肪重量增加,脏体比分别比对照组增加50.8%、36.3%和31.5%,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。其中0.05 mg/kg·bw组小鼠腹壁脂肪增加最为明显,但3个剂量组之间差异无统计学意义(P>0.05);各组小鼠附睾脂肪及棕色脂肪的脏体比差异无统计学意义(P>0.05)。葡萄糖耐量试验显示,500 mg/kg·bw组小鼠葡萄糖耐量受损,血糖曲线下面积明显高于对照组(P<0.05)。3个DEHP染毒组小鼠血脂水平均表现为升高趋势,5和500 mg/kg·bw DEHP组小鼠血清甘油三酯(TG)明显高于对照组(P<0.05);3个DEHP染毒组小鼠血清胆固醇(CHOL)、低密度脂蛋白(LDL)均明显高于对照组(P<0.01),0.05和5 mg/kg·bw DEHP组小鼠血清高密度脂蛋白(HDL-C)与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01)。肝病理组织切片的油红O染色结果显示DEHP染毒组肝脂肪蓄积,以500 mg/kg·bw组最为明显。结论一定剂量DEHP能够导致小鼠脂肪和葡萄糖代谢紊乱,增加肝和皮下脂肪蓄积。

枯否细胞在酒精性肝病发病中作用的研究进展

酒精是一种常见的肝脏毒物,过度饮酒会导致肝脏发生脂肪变性、坏死和再生,引起酒精性肝病（alcoholic liver disease,ALD）。ALD早期表现为可逆性的酒精性脂肪肝（alcoholic fatty liver,AFL）,并可逐渐进展为酒精性肝炎、肝纤维化、肝硬化、甚至肝癌。

肿瘤坏死因子α致小鼠肝甘油三酯蓄积的作用

目的探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)对小鼠肝甘油三酯(TG)含量的影响及机制。方法SPF级雄性ICR小鼠,随机分为对照组和TNF-α干预组。TNF-α干预组小鼠腹腔注射0.166mg/kg·bwTNF-α,对照组小鼠给予等体积的生理盐水。在给药后3和6h,各组分别处死6只小鼠,收集血清、肝和附睾脂肪,计算肝脏系数和附睾脂肪系数;油红O染色观察肝冰冻切片中脂肪蓄积;检测肝TG含量、血清中游离脂肪酸(FFA)和TG含量及转氨酶的活性;Westernblot检测肝脂肪代谢相关蛋白和附睾脂肪激素敏感性脂肪酶(HSL)的蛋白含量。结果与对照组小鼠相比,TNF-α干预组小鼠肝脏系数在3和6h均明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);TNF-α干预组小鼠附睾脂肪系数呈减小趋势。在6h时间点,TNF-α干预组小鼠肝TG含量明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。在3h时间点,TNF-α干预组小鼠血清FFA水平明显增加(P<0.05);TNF-α干预组小鼠附睾脂肪中p-HSL(Ser563)蛋白含量较对照组小鼠明显增加(P<0.05)。在3和6h两个时间点,肝内过氧化物酶体增殖物活化受体α(PPAR-α)、乙酰辅酶A氧化酶(ACOX1)、甾醇调节元件结合蛋白1c(SREBP-1c)及脂肪酸合成酶(FAS)的蛋白含量在两组小鼠之间差异均无统计学意义(P >0.05)。结论TNF-α可导致小鼠肝TG含量增加,其机制可能与磷酸化激活HSL进而促进外周脂肪动员有关。

化学性肝损伤中枯否细胞极化作用的研究进展

化学性肝损伤主要是由化学毒物或某些药物引起的肝损伤,发病急,可迅速导致肝衰竭。枯否细胞作为肝脏内的常驻巨噬细胞,可释放促炎或抗炎性细胞因子。枯否细胞具有不同的极化形态:经典促炎的M1型与替代激活的M2型,其极化形态影响着肝损伤的进程。笔者综述了乙醇、对乙酰氨基酚以及四氯化碳诱导的枯否细胞极化在肝损伤中的作用机制及其最新进展,为化学性肝损伤的预防和新药研发提供新思路。

急性和慢性酒精性脂肪肝小鼠肝组织中过氧化物酶体增殖物活化受体α和甾醇调节元件结合蛋白1c及其调控关键靶分子的蛋白表达情况

为比较急、慢性酒精性脂肪肝(AFL)小鼠肝脏中调控脂肪酸代谢的过氧化物酶体增殖物活化受体α(PPAR-α)和甾醇调节元件结合蛋白1c(SREBP-1c)等蛋白表达差异,将40只健康SPF级雄性昆明小鼠随机分为4组,分别为急性对照(麦芽糖糊精溶液)组、急性AFL模型(5 g/kg乙醇)组、慢性对照(不含乙醇液体饲料)组和慢性AFL模型(含5%乙醇液体饲料)组,每组10只。采用经口灌胃方式进行染毒,染毒容量为20 ml/kg,每12 h一次,连续3次,诱导急性AFL;慢性AFL模型组采用饲喂液体饲料方式进行染毒,连续4周,根据慢性AFL模型组小鼠每日液体饲料摄入量调整慢性对照组小鼠液体饲料给予量,以保证两组小鼠每日液体饲料摄入量一致。测定肝组织中甘油三酯(TG)的含量以及PPAR-α和SREBP-1c及相关因子的蛋白表达。结果显示,与相应对照组相比,急、慢性AFL组小鼠肝脏中TG的含量均升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与急性对照组相比,急性AFL组小鼠肝组织PPAR-α、乙酰辅酶A氧化酶(ACOX)和肝脏脂肪酸结合蛋白(LFABP)蛋白表达水平均增加,差异有统计学意义(P<0.05);而SREBP-1c、脂肪酸合成酶(FAS)和乙酰辅酶A羧化酶(ACC)的蛋白表达水平未见明显改变。与慢性对照组相比,慢性AFL组小鼠肝组织PPAR-α、ACOX和LFABP的蛋白表达水平均降低,差异有统计学意义(P<0.05);而SREBP-1c调控的FAS和ACC蛋白是表达水平亦较低,差异有统计学意义(P<0.05)。提示慢性AFL发病可能与PPAR-α调控的脂肪酸氧化分解通路的抑制密切相关,而急性AFL发病与PPAR-α和SREBP-1c关系不明显。

对乙酰氨基酚诱导小鼠急性肝损伤中p62-keap1-Nrf2信号通路变化

目的检测对乙酰氨基酚(acetaminophen,APAP)诱导小鼠急性肝损伤中p62-keap1-Nrf2抗氧化信号通路变化。方法 40只C57/BL6小鼠建立急性肝损伤剂量-反应模型,随机分为4组:对照组、APAP低剂量组(180 mg/kg)、APAP中剂量组(300 mg/kg)和APAP高剂量组(500 mg/kg),每组10只。禁食12 h后,腹腔注射0.9%氯化钠溶液或APAP溶液,24 h后摘眼球取血。另取60只小鼠建立时间-反应模型,对照组给0.9%氯化钠溶液,染毒组腹腔注射300 mg/kg APAP后,分别于3、6、12、24和48 h各取10只小鼠摘眼球取血测生化指标。以上小鼠均剪取肝同一部位做病理切片,HE染色检测病理损伤。并匀浆肝组织提取蛋白,利用Western blot检测p62-keap1-Nrf2信号通路相关蛋白的表达水平,荧光定量PCR技术检测抗氧化基因的相对表达。结果剂量-反应模型中,APAP处理组与对照组相比,肝脏系数明显增大(P<0.05);ALT、AST水平显著升高(P<0.05);肝病理切片显示APAP处理组出现不同程度肝细胞坏死;p62-keap1-Nrf2通路相关蛋白p62、p-p62、Keap1、Nrf2胞浆及胞核蛋白表达增加;而抗氧化基因HO-1、GCLC相对表达量下降。时间-反应模型中,APAP处理组小鼠ALT、AST水平明显高于对照组,呈时间反应趋势,24 h达到峰值;抗氧化基因HO-1、GCLC在3和6 h表达明显增加(P<0.05),12、24和48 h急剧下降至较低水平。结论对乙酰氨基酚诱导的小鼠急性肝损伤中,p62-keap1-Nrf2信号通路激活,Nrf2可能在APAP肝损伤早期通过激活抗氧化相关基因表达发挥作用。

蛋白酶体活性升高在1-BP致大鼠周围神经损伤中的作用

目的探讨泛素蛋白酶体系统(UPS)在1-溴丙烷(1-BP)致大鼠周围神经病中的作用。方法 30只雄性Wistar大鼠随机分至对照组、400 mg/kg·bw组(低剂量组)和800 mg/kg·bw组(高剂量组),分别经口给予等体积的玉米油和1-BP(溶于玉米油),每日1次,每周5 d,连续16周。荧光检测法检测类胰蛋白酶、类糜蛋白酶和肽-谷氨酰肽水解酶(PGPH)在大鼠不同神经组织中的活性;蛋白电泳检测大鼠不同神经组织中的4-羟基壬烯醛(4-HNE)和丙二醛(MDA)蛋白质加合物水平,以及1-BP体外对4-HNE氧化修饰神经组织蛋白的促进作用。结果与对照组相比,低、高剂量组坐骨神经中类胰蛋白酶活性升高(P<0.01),高剂量组大脑中类糜蛋白酶活性升高(P<0.01),大脑和坐骨神经中PGPH活性升高(P<0.05);与对照组相比,低剂量组坐骨神经组织中4-HNE和MDA蛋白质加合物表达水平升高(P<0.01),高剂量组大脑和坐骨神经中4-HNE和MDA蛋白质加合物表达水平升高(P<0.01);1-BP促进了4-HNE对大脑、脊髓和坐骨神经组织剂量依赖性的氧化修饰(P<0.05)。结论1-BP暴露导致神经组织蛋白质氧化损伤,诱导UPS异常激活,可能是1-BP中毒性周围神经病发生的机制之一。