应用巢式RT-PCR结合RFLP、SSCP对山东肾综合征出血热病人血清中HV基因检测和分型研究

目的探讨山东肾综合征出血热重疫区病人血清中HV分子生物学特征,同时寻找准确、简便、迅速的HV检测与分型方法,从而为制定防治决策提供科学根据。方法从山东肾综合征出血热重疫区临沂市费县收集病人早期血清,应用巢式RT-PCR对病人血清中的HV进行基因扩增,采用RFLP、SSCP分型,并进行序列测定与分析。结果48份临床和ELISA检测确诊的HFRS病人血清经巢式RT-PCR扩增后,41份阳性,阳性率85.42%。41份阳性标本巢式RT-PCR产物经HindIII、HinfI酶切后,呈现2种不同的RFLP图谱:33份显示与R22株相似的酶切图谱,应属SEOV型;另外8份显示出与HTN76-118株相似的图谱,属HTNV型,这8份HTNV型标本均为10-12月间收集的病人血清。41份阳性标本巢式RT-PCR产物经SSCP分析,亦呈现2种不同的图谱:33份具有与R22株相似的SSCP图谱,应属SEOV型;而另8份则与HTN76-118株具有相似的SSCP图谱,属HTNV型。对部分扩增产物序列采用系统进化树分析也得出类似的结果:sdp1、sdp2、sdp3与HTN型76-118株亲缘关系相近,属同一簇,而sdp22、sdp37与SEOV型Z37、R22株亲缘关系相近,属另外一簇,这与RFLP和SSCP获得的结果相一致。结论山东肾综合征出血热重疫区病人基因型以SEOV型为主,但在秋冬季节也存在HTNV型。巢式RT-PCR结合RFLP、SSCP法可对HV准确分型,而且简便、迅速,适合于大规模流行病学调查。

山东地区秋冬型恙虫病传播媒介的调查研究

目的 :探讨山东地区恙虫病传播媒介。方法 :1 995年 5月～ 2 0 0 2年 4月在山东恙虫病疫区捕鼠。观察鼠体外恙螨季节消长 ,分离恙虫病东方体 (Ot)。结果 :室内外共捕捉到的 5 2 7只活鼠 (黑线姬鼠 335只 ,大仓鼠 1 1 9只 ,黑线仓鼠 6只 ,小麝鼠句 2只 ,褐家鼠 6 3只 ,小家鼠 2只 ) ,从活鼠体外共检获 1 5 4 6 7只恙螨 ,其中太平洋无前恙螨最多 5 72 0只 ,其它螨数量依次为小盾纤恙螨 4 1 75只 ,临淮岗纤恙螨 30 90只 ,须纤恙螨 1 6 87只 ,泰山纤恙螨 4 6 6只 ,脆弱无前恙螨 32 9只。恙螨季节变化 :小盾纤恙螨主要出现在 9～ 1 2月 ,高峰在 1 1月 ,是秋季鼠体外绝对优势种 ;须纤恙螨出现在 1 0～翌年 4月 ,高峰在 1 2月 ,为冬季优势螨种 ,临淮岗纤恙螨 5月出现 ,1 1月消失 ,高峰在 8月 ,为夏季优势种 ;泰山纤恙螨主要出现在6～ 1 0月 ,数量较少 ,且起伏较大 ;太平洋无前恙螨、脆弱无前恙螨全部采自仓鼠 ,主要出现在 4～ 1 2月 ,高峰期在 7月。Ot分离 :小盾纤恙螨共接种 1 1批 ,分离到 5株 Ot;须纤恙螨、临淮岗纤恙螨和太平洋无前恙螨分别接种 4批 ,分离到 4株、 2株和 2株 Ot。小盾纤恙螨是恙虫病发病季节疫区鼠体外优势螨种 ,季节消长与当地人群恙虫病季节分布基本一致 ;能自然感染。

“911”抗HBV作用的实验研究

目的 :评价药物“911”在 2 2 15细胞培养中对 HBs Ag和 HBe Ag表达的抑制作用。方法 :在 HBV转染的人肝癌 2 2 15细胞加入待检药物培养 ,收取细胞培养液 ,检测上清液中 HBs Ag和 HBe Ag浓度 ,细胞提取物作 HBV- DNA斑点分子杂交。结果 :“911”对 2 2 15细胞的毒性较小 ,TC50 为 4 4 .8m g/ml;对 2 2 15细胞的 HBe Ag有一定的抑制作用 ,且呈剂量反应关系 ,其抑制抗原半数有效浓度为 17.3m g/kg;治疗指数为 3.37。结论 :“911”对 2 2 15细胞内 HBV- DNA有一定的抑制作用 ,呈剂量反应关系 ,对 2 2 15细胞的 HBs Ag有较小抑制作用。

山东地区秋冬型恙虫病宿主动物流行病学调查

1.材料与方法: ①调查点选择恙虫病流行区的费县、济南东郊、莒南、邹平等地区,其中以费县和济南东郊为重点;对调查点临床确诊的恙虫病现患者进行个案调查,填写流行病学调查表,并通过调查点各乡镇医院的防保站及乡村医生统计调查点当年发病人数及总人数,计算当地的人群发病率.②宿主动物调查:从费县调查点农田逐月定点捕鼠,在发病季节捕获部分室内鼠(其他调查点仅发病季节在室内外定点捕鼠),鉴定鼠种,计算鼠种群密度及季节消长;收集鼠血清,-20℃保存备用;从活鼠体外收集恙螨,鉴定种类,统计恙螨种类组成、不同螨种季节消长.③恙虫病东方体(Ot)的分离与血清学鉴定参照军事医学科学院陈香蕊等的方法.

应用PCR/RFLP对山东地区恙虫病东方体的基因型分析

目的 鉴定山东地区恙虫病东方体的基因型。方法 采用聚合酶链反应 /限制性片段长度多态性分析 (PCR/RFLP)技术对恙虫病东方体山东分离株、小盾纤恙螨匀浆及恙虫病病人全血中提取的DNASta5 6基因进行分析研究 ,并与NestedPCR基因分型的结果进行比较。结果 山东地区 35份标本 ( 2 3株恙虫病东方体山东分离株、2份采自黑线姬鼠体外的小盾纤恙螨匀浆及 10份恙虫病人全血 )提取的DNA群引物扩增产物经HinfⅠ、HhaⅠ、SnaBⅠ酶切后呈现 2种不同的RFLP图谱 ,经与已知序列的Ot内切酶图谱相比 :33份Ot内切酶图谱与文献报告的日本地方株—Kawasaki株具有相似的酶切图谱 ,但缺乏HhaⅠ的酶切位点 ;另 2份与Karp参考株具有相同的酶切图谱。该结果与NestedPCR基因分型的结果相一致。结论 山东地区恙虫病东方体流行株主要基因型与日本地方株Kawasaki型类似 ,但与日本地方株存在遗传差异 ;同时还有Karp型Ot存在。采用PCR/RFLP方法可以准确对Ot-Sta5 6基因分型。

秋冬型恙虫病病人、恙螨、鼠东方体基因型研究

目的 了解秋冬型恙虫病流行季节黑线姬鼠、小盾纤恙螨、病人体内恙虫病东方体 (Orientiatsutsuga mushi,Ot)基因型的一致性。方法 采用NestedPCR结合限制性内切酶片段长度多态分析 (RFLP)技术对山东地区恙虫病流行季节病人、野外优势鼠种黑线姬鼠、鼠体外优势螨种小盾纤恙螨标本中Ot-Sta5 6基因型进行分析。结果 应用PCR/RFLP分析了 12株分离自山东秋冬型恙虫病流行季节病人、黑线姬鼠、小盾纤恙螨体内的Ot,2份采自黑线姬鼠体外的小盾纤恙螨匀浆及 10份恙虫病人全血中的Ot-sta5 6目的基因 ,2 4份标本酶切图谱经与已知序列的Ot内切酶图谱相比 ,与日本地方株 -Kawasaki株具有相似的酶切图谱 ,但缺乏HhaI的酶切位点 ;2 4份标本提取的Ot-DNA扩增产物分别经型引物扩增 ,均出现相应分子量的扩增片段 ,皆属日本地方株Kawasaki型。结论 秋冬型恙虫病流行季节病人、野外优势鼠种黑线姬鼠、鼠体外优势螨种小盾纤恙螨体内所分离的恙虫病东方体Sta5 6基因型是一致的 ,并在病人、黑线姬鼠、小盾纤恙螨间构成相互传播关系 ,这对当地恙虫病疫源地的维持有重要作用。

WHO-BREF量表用于系统性红斑狼疮患者生活质量的评价及影响因素分析

目的:评价我国系统性红斑狼疮患者的生活质量并探讨其影响因素。方法:用系统性红斑狼疮疾病活动指数计分(SLEDAI)和系统性红斑狼疮国际合作临床的系统性红斑狼疮损伤指数计分(SLICCACRDI)分别测定153例系统性红斑狼疮患者的活动指数和损伤指数,用世界卫生组织生活质量简表(WHOQOL鄄BREF)中文版对患者的生活质量进行自评。将患者按照临床诊断类型和临床分期进行分组,对不同分型和分期患者各个领域的生活质量得分进行方差分析,并对各领域得分与可能的影响因素进行相关分析和多元逐步回归分析。结果:SLE患者生活质量得分普遍较低,各领域得分从46.49±20.05到64.52±15.33不等。影响生活质量的主要因素有疾病的临床分期、活动指数、损伤指数、年龄、文化程度、家庭关系等。其中受疾病本身影响较明显的生活质量领域有生理、心理、总体健康感觉和量表总得分。结论:SLE患者生活质量较差,临床分期、活动度、损伤程度影响患者的生理功能和总体健康感觉;生理、心理、社会关系、环境领域的生活质量还受年龄、文化程度、家庭关系的影响。

山东地区恙虫病东方体Sta56基因片段扩增与分型研究

目的 鉴定山东地区恙虫病东方体(Ot)基因型别。方法 采用巢式聚合酶链反应技术对23株恙虫病东方体山东株、2份采自黑线姬鼠体外的小盾纤恙螨匀浆及10份恙虫病患者全血中提取的Ot目的基因进行分析研究,并与Gilliam、Karp、Kato国际参考株进行比较。将群引物扩增产物用双向测序法进行序列测定。结果 35份标本中33份属于Kawasaki型,2份(FXS4 and LHGM2株)属于Karp型。从这33份中选出B-16、FXS2株进行碱基序列测定,结果B-16、FXS2株Sta56基因片段序列与Kawasaki型同源性最高,分别为94.22％、95.21％,而与其他6株Ot同源性均<75.87％.应属于Kawasaki型;FXS4和HGM2株Sta56基因片段序列与Karp型同源性最高,分别为83.03％、96.45％,应属于Karp型。结论 山东地区恙虫病东方体流行株以Kawasaki型为主,但同时存在Karp型。

PCR/SSCP在恙虫病东方体基因分型中的应用

目的 采用优化聚合酶链反应 /单链构象多态性分析 (PCR/SSCP)方法分析恙虫病东方体 (Orientiatsut sugamushi,Ot)基因型的各项条件。 方法 对恙虫病东方体山东分离株、小盾纤恙螨匀浆及恙虫病人全血中提取的Ot-Sta5 6基因进行分析。采用PCR/SSCP检测 ,并与NestedPCR基因分型的结果进行比较。结果 山东地区 35份标本提取的Ot -DNA群引物扩增产物呈现出 2种不同的单链构象图谱 ,其中 33份与国际参考株Gilliam ,Karp ,Kato均不相同 ,应属这 3型以外的一种基因型 ,经NestedPCR分型证实为Kawasaki型 ;2份与Karp株相同。表明山东地区恙虫病东方体至少存在 2种型别。检测结果与Nested -PCR基因分型结果相符。条件优化以 8%的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 ,常温下 ,2 0 0V电泳 3h获得的电泳结果较为理想 ,并易于操作。结论 PCR/SSCP条件优化后可用于快速分析恙虫病东方体基因型 ,且操作简便 ,结果准确。

阴式子宫全切术80例分析

目的:探讨阴式子宫切除术的可行性、临床效果和安全性。方法:回顾性分析2006-01/2007-10我院行阴式子宫切除术患者80例的临床资料,观察其手术效果和术后情况。结果:阴式子宫全切术手术方法、术前准备、麻醉方法同其他阴式手术。患者住院时间短,腹腔干扰少,术后肠管功能恢复快,减少患者住院费用,是一种理想的微创手术。结论:无明显盆腔粘连和排除恶变的子宫全切除术可选择阴式途径,子宫大小并非选择术式的决定因素。

筋膜内子宫全切除术与传统子宫全切除术式对比分析

目的:探讨筋膜内子宫全切除术的可行性、临床效果和安全性.方法:回顾性分析2005年1月至2007年10月,我院行筋膜内子宫全切重建阴道顶改良手术50例(改良组)及同期行传统的子宫全切术(对照组)的临床资料,比较手术效果和术后恢复情况.结果:平均手术时间、术中平均出血量,改良组(77±41)min、(142±26)ml和对照组(107±49)min、(230±38)ml,两组比较差异有统计学意义(P<0.05).患者术后排气时间、术后发病率、平均住院时间,改良组(46±4)h、10%、(7.8±0.6)d,对照组(48±6)h、10.8%、(7.4±0.2)d两组比较,差异无统计学意义.结论:筋膜内子宫全切除术比传统子宫全切除术的手术效果好,创伤小,术后并发症少,是一种值得推广、应用的术式.

超声诊断子宫肌瘤500例分析

目的:分析、总结如何提高超声诊断子宫肌瘤的准确率.方法:对500例病人术前超声诊断、妇科检查、术中所见与术后临床病理诊断进行对照分析.结果:500例术前超声诊断为子宫肌瘤者与术后病理诊断总符合率为96%,误诊20例,占4%.结论:只有依据典型的超声图象与临床相结合,综合分析,才能提高超声诊断子宫肌瘤的准确率.

维生素B12在神经管缺陷一级预防中的作用研究进展

维生素B12（VitB12）又称钴胺素（cobalamins），是一组有钴结合咕啉环的红色类咕啉化合物的总称，是一种维持人体正常代谢和机能不可缺少的、机体不能合成的微量营养素。

α-受体阻滞剂和生物类黄酮治疗慢性非细菌性前列腺炎的随机对照临床试验

目的 比较盐酸酚苄明和盐酸黄酮哌酯改善慢性前列腺炎患者临床症状的效果。方法 采用随机对照临床试验方法,将60例慢性非细菌性前列腺炎(NIH-Ⅲa型)患者随机分为三组,分别给予安慰剂、竹林胺(盐酸酚苄明)和盐酸黄酮哌酯,连服1个月。在试验起始及结束时分别采用NIH慢性前列腺炎症状指数量表对每一例患者进行测定。结果 试验前三组中年龄、患病时间及NIH-CPSI评分均衡无差异。研究结束时,NIH-CPSI平均值安慰剂组从21.85降到19.55(差异无统计学意义);竹林胺组从21.95降到13.75(P<0.01);盐酸黄酮哌酯组从21.75降到16.95(P<0.05)。NIH-CPSI的降低均伴随有症状的显著改善。结论 在一定时间内竹林胺能被慢性非细菌性前列腺炎患者接受且能显著降低患者的主观症状,盐酸黄酮哌酯虽能改善主观症状,但效果较竹林胺差。

母亲甲硫氨酸合成酶A2756G及其还原酶A66G基因多态性与子代神经管缺陷易感性关系的Meta分析

目的应用Meta分析方法定量评价母亲甲硫氨酸合成酶(MTR)基因A2756G和甲硫氨酸合成酶还原酶(MTRR)基因A66G多态性与子代神经管畸形(NTDs)易感性的相关性。方法制定检索策略和文献纳入排除标准,系统检索中国生物医学文献数据库、中文科技期刊数据库、中国期刊全文数据库、万方数据库和PubMed、Webof Science外文数据库中自1990年1月到2011年10月的有关MTR A2756G和MTRR A66G位点多态性与子代NTDs易感性的病例对照研究、学位论文及其引文。采用RevMan5.0软件对各文献进行异质性检验和Meta分析,得到合并后的OR值及其95%CI。结果共有18篇文献纳入Meta分析,MTR A2756G(907例病例和1 978例对照)和MTRR A66G(1 123例病例和1 700例对照)基因多态性的文献各11篇。Meta分析结果显示,母亲MTR基因A2756G位点各遗传模型与子代NTDs易感性之间关联性无统计学意义,而MTRR基因A66G位点GG/AG vsAA、GG vs AA、AG vs AA、GG vs AG/AA和G vs A各遗传模型与子代NTDs易感性之间关联性均有统计学意义,OR值及95%CI分别为1.89(1.28～2.78)、1.68(1.31～2.16)、1.77(1.18～2.66)、1.28(1.06～1.55)和1.35(1.12～1.63)。结论母亲MTRR基因A66G位点多态性是子代NTDs发病的重要危险因素之一。

围植入期暴露二硫化碳对小鼠子宫组织白血病抑制因子表达的影响

目的观察二硫化碳(CS2)对孕鼠子宫组织白血病抑制因子(LIF)表达水平的影响,探讨CS2致胚胎毒性的作用机制。方法健康昆明种孕鼠随机分为D3(孕第3天)、D4、D5、D6染毒组和对照组,每组又根据各自的染毒时点分别设相应的观察终点(记为D4、D5、D6、D7、D9)。染毒组腹腔注射631.4mg/kg剂量的CS21次,对照组给予橄榄油。在相应观察终点结束实验,观察CS2对孕鼠和胚胎植入的影响,并应用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白免疫印迹法(Western blotting)测定子宫组织中LIF表达水平。结果胚胎围植入期不同时点暴露CS2均可导致孕鼠D9胚胎植入数目减少,D3、D4、D5、D6染毒组胚胎植入数目分别比对照组减少了81.1%、92.7%、91.5%和66.9%,差异具有统计学意义(P<0.05);围植入期不同时点暴露CS2可导致孕鼠子宫组织中LIF在各染毒组相应的第一个观察终点低表达,分别较对照组降低了43.8%、54.3%、38.7%和22.6%,差异具有统计学意义(P<0.01);胚胎植入数目与子宫组织LIF表达水平呈正相关。结论胚胎围植入期暴露CS2可导致孕鼠子宫组织中LIF表达水平降低,这可能是CS2致胚胎毒性的分子机制之一。

静脉吸毒者艾滋病自愿咨询检测的影响因素及对培训核心同伴推广检测的态度

目的探讨静脉吸毒者接受艾滋病自愿咨询检测服务的影响因素;了解静脉吸毒者和关键知情人对利用培训核心同伴传播相关信息推广检测的态度,为最大限度地早期发现感染者、有效防治艾滋病提供依据。方法采用定性研究方法,对四川省达州市大竹县和通川区静脉吸毒者及关键知情人进行了定性访谈。结果目前静脉吸毒者的艾滋病自愿咨询检测仍面临许多障碍,诸如怕暴露吸毒行为、担心出现阳性结果、害怕社会歧视、害怕被公安部门制裁、担心结果被泄露和认为不可能感染艾滋等。检测动因是关注自身健康、怕传播给家人、受家人同伴影响和希望得到误工费等。所有被调查者均一致认为培训核心同伴传播相关信息是提高检测的有效办法。结论静脉吸毒者接受艾滋病自愿咨询检测存在一定的障碍及动因,应尽可能消除障碍,并利用动因来创建艾滋病自愿咨询检测的友好环境;静脉吸毒者和关键知情人对通过培训核心同伴宣传相关信息提高检测率均持积极态度。