氟化物对限制性内切酶酶切活性改变的研究

目的 :探讨氟化物对限制性内切酶酶切作用改变的影响。方法 :常规方法提取纯化PBR32 2质粒 ;将NaF与PBR32 2质粒 37℃共同作用 1h ,再用限制性内切酶BamH1 对PBR32 2质粒进行酶切 3h ,同时将NaF作用的PBR32 2用层析柱纯化后再进行酶切反应 ;将酶切产物进行电泳 ,观察结果并拍照。结果 :随着NaF浓度的增加 ,BamH1 对PBR32 2的酶切作用减弱 ,当加入 5mmol LNaF时 ,BamH1 几乎无酶切活性 ,而对加入 5mmol LNaF的PBR32 2用层析柱进行纯化 ,以除去NaF ,再对其进行酶切 ,可完全切开。而且氟离子可导致酶切片段在电泳中显示拖尾现象。结论