山东省正常人群风疹病毒IgG的检测

目的了解山东省正常人群风疹病毒自然感染状况,为保护易感人群及制定合理的预防接种方案提供科学依据。方法采用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测山东省部分地区正常人群血清中风疹病毒特异性抗体IgG。结果该人群RV-IgG阳性率为80.20%,其中,≤20岁组人群抗体的阳性率为66.87%,>20岁组人群抗体阳性率为82.86%,差异有统计学意义(P<0.05);男性人群抗体阳性率为77.37%,女性人群的抗体阳性率为83.37%,差异有显著性意义(P<0.05);不同职业及不同地区人群抗体阳性率的差异亦均有统计学意义(P<0.05,P<0.05)。结论低龄儿童和青少年风疹免疫水平较低,是风疹免疫的主要对象。育龄妇女也是风疹免疫的重点对象。不同的工作环境和生活习惯对风疹病毒的感染率有一定的影响。

副粘病毒血凝素-神经氨酸酶蛋白结构与功能的研究进展

副粘病毒的血凝素-神经氨酸酶和融合蛋白具有重要的生物学活性,其中前者具有受体识别活性、神经氨酸酶活性和促进融合蛋白的细胞融合作用.本文对近年来血凝素-神经氨酸酶结构和功能方面的研究进展进行了综述.

风疹病毒E1包膜糖蛋白的结构与功能研究进展

风疹病毒 (RV)是致人类先天性畸形的重要病原体之一。其 E1包膜糖蛋白在病毒感染及诱导机体免疫反应中起重要作用。对其氨基酸和核苷酸序列结构与蛋白功能的深入研究有助于我们理解 RV产生免疫的机理 ,以研制亚单位疫苗、多肽疫苗等新型疫苗。本文对 RVE1糖蛋白结构与功能关系的研究进展进行了综述。

风疹病毒分子生物学与基因工程疫苗研究进展

风疹病毒是最常见的致畸病原体之一。由于现行疫苗存在不可避免的缺陷,所以研制新型疫苗势在必行。本文就近年来风疹病毒分子生物学研究及基因工程疫苗研制方面的进展进行综述。

山东省肠道病毒71型分离株SDLY11全基因组序列分析

目的了解2009年山东省临沂市分离的肠道病毒71型(EV71)分离株SDLY11的基因组序列特征,探讨病毒的神经毒力候选位点。方法自手足口病患者的粪便标本中分离EV71,采用一步法RT-PCR对病毒株基因组进行全序列扩增,运用DNAstar和MEGA 4软件进行序列分析。结果 SDLY 11基因组全长为7 405nt,其中5′非编码区(UTR)742nt,3′UTR 84nt,中间为6 579nt的开放阅读框架(ORF),编码2 193个氨基酸的多聚蛋白。VP1区及全基因组序列系统进化分析表明SDLY 11位于EV71病毒C4亚型的分支,同源性分析显示SDLY 11与安徽阜阳株同源性最高。序列比对结果发现,CNS累及HFMD患者病毒株在5′UTR区出现了两处核苷酸位点的突变(T40C、C575T),在VP2区第144位出现了氨基酸的突变(T144S)。结论 SDLY 11分离株属EV71病毒C4亚型。5′UTR区的两处突变(T40C、C575T)及VP2区的一处突变(T144S)可能与病毒的致神经毒力作用有关。

风疹病毒复制及致畸性的研究进展

风疹病毒是披膜病毒科风疹病毒属的惟一成员,因其致畸性而受到关注。本文从风疹病毒的基因组结构及功能、复制、与宿主细胞的相互作用和致畸机制等方面对风疹病毒的研究进展进行了综述。

单纯疱疹病毒包膜糖蛋白的结构与功能研究进展

单纯疱疹病毒共有11种包膜糖蛋白,它们以不同形式在病毒进入宿主后发挥不同功能。本文对已发现的11种包膜糖蛋白结构与功能的研究进展进行了概述。

分子生物学技术在风疹病毒包膜糖蛋白研究中的应用

风疹病毒(RV)是最重要的人类致畸病毒。对RV包膜糖蛋白的研究,有助于构建与表达RVRNA病毒样颗粒,用于核酸检测质控品的研究与开发;并且有助于理解RV产生免疫的机理,以研制基因工程疫苗、亚单位疫苗、多肽疫苗等新型疫苗。本文对分子生物学技术在RV包膜糖蛋白研究中的应用进展进行了综述,包括风疹病毒RNA病毒样颗粒的构建与表达、建立风疹病毒免疫学诊断方法以及制备基因工程疫苗和亚单位疫苗的研究等。

肠道病毒71型3D蛋白研究进展

目的 EV71感染可引起婴幼儿手足口病,甚至导致死亡。近年来由EV71引发的手足口病一直呈上升的流行趋势。目前中国对于手足口病的疫苗研究已进入临床试验阶段,但EV71引起的重症手足口病的发病机制仍不明确。3D蛋白主要负责病毒的复制过程,是抗病毒药物的靶点之一。本文就EV71的3D蛋白的结构功能及针对其作为靶点的抗病毒药物作一综述。

新城疫病毒F蛋白细胞融合活性位点中保守氨基酸基因突变分析

为了确定新城疫病毒融合蛋白(F)分子上活性位点中保守氨基酸在F蛋白的细胞融合作用,弄清F细胞融合的分子机理,采用基因定点突变法,创造一个酶切位点,用酶切反应初步筛选突变株,然后用DNA序列分析进一步确定,并于真核细胞内进行表达,Giemsa染色定性和指示基因法定量检测细胞融合功能,荧光强度分析(FACS)检测表达效率情况。结果表明,NDV F第117位苯丙氨酸(F)突变成亮氨酸(L)时对细胞融合作用没有显著影响。R112和K115同为保守序列,分别突变为G时,细胞融合活性只有原来的44%,下降了56%。细胞表面表达效率没有明显的改变。N147突变为K时,细胞融合活性明显下降,只有原来的15%,而细胞表面表达效率没有明显的改变。L154为保守序列,突变为K时,细胞融合活性消失,说明L154是一个非常关键的氨基酸,对维持F蛋白的细胞融合活性非常重要。细胞表面表达效率也有所下降(为原来的94%)。D462属于高度保守氨基酸,当突变为N时,细胞融合活性消失,但经细胞表面表达效率分析证明,此突变蛋白未表达于细胞表面,证明在细胞浆转运至细胞表面的过程中发生了问题。当突变为R和E时,细胞融合活性未发生改变,但细胞表面表达效率有所下降,分别为野毒株的63%和44%。说明NDV F分子上与HN相互作用的特异性区域中的某些保守氨基酸在细胞融合中发挥着重要作用,对F蛋白的折叠、加工、转运等,发挥着不同作用,从而影响F蛋白的细胞融合作用和/或在细胞表面的表达量。

单纯疱疹病毒I型糖蛋白D酵母表达载体的构建

目的:构建含有单纯疱疹病毒I型包膜糖蛋白D全基因片段的克隆载体及酵母表达载体,为进一步真核表达重组gD蛋白奠定基础。方法:应用PCR方法从HSV-I基因组中扩增糖蛋白D的全长基因,产物回收后与pMD-18T载体连接,并转化,经氨苄筛选及测序,建立克隆载体pMD18T-gD;克隆载体与表达载体双酶切后,产物连接、转化大肠杆菌JM109,筛选、测序后确定构建了酵母表达载体pGAPZαA-gD。结果:重组质粒pMD18T-gD和pGAPZαA-gD经PCR和酶切均出现相应长度的片段,测序结果证实为gD基因,序列分析同源性为99.66%。结论:成功构建了含有单纯疱疹病毒I型糖蛋白D全基因的克隆载体及酵母表达质粒。

注射用银黄体外抗呼吸道合胞病毒

目的:研究注射用银黄对呼吸道合胞病毒的体外抑制作用。方法:采用细胞培养技术,通过银黄直接抗病毒,病毒感染细胞同时使用银黄,先使用银黄再感染病毒3种给药方法,利用生物显微镜观察人喉癌细胞(Hep-2)和人宫颈癌细胞(Hela)发生病变的情况及观察实验组与病毒对照组病毒感染的滴度。结果:注射用银黄在Hep-2和Hela细胞上对呼吸道合胞病毒均有明显的抗病毒作用,注射用银黄对病毒的最小有效浓度(M IC)为0.016 g.L-1,而且毒性低,最大无毒浓度(TDO)为1.6 g.L-1,治疗指数(TI)为100。结论:体外实验注射用银黄对呼吸道合胞病毒具有抑制和直接杀灭的特异性。

酵母表达的风疹病毒E1在ELISA检测中应用

目的将毕赤酵母表达系统中表达的E1糖蛋白作为包被抗原,建立一种优于病毒作为包被抗原的风疹病毒(rubellavirus,RV)抗体ELISA检测方法。方法将重组包膜糖蛋白(E1)抗原和风疹病毒分别作为包被抗原,用间接ELISA法检测90份临床血清标本,同时用晶美(JINGMEI)进口分装试剂盒和德国RECI公司试剂盒进行检测;将RECI试剂盒作为金标准,计算另外三者检测结果的特异性、灵敏性和符合率;比较他们之间的差异有无统计学意义,特别是重组抗原与病毒抗原作为包被抗原检出RV抗体阳性率的差异有无统计学意义。结果重组蛋白重复性实验结果经统计学处理,P>0·05,差异无统计学意义;RECI试剂盒与重组抗原、病毒抗原的检测结果差异有统计学意义(P<0·05);重组抗原与病毒抗原的检测结果差异有统计学意义(P<0·05),作为包被抗原,重组抗原优于病毒抗原。结论用毕赤酵母表达的RVE1重组蛋白作为包被抗原进行ELISA检测优于病毒作为包被抗原,具有广阔的应用前景。

肾综合征出血热病毒基因型和流行特点分析

目的 探讨山东省汉坦病毒 (HV)主要流行株的基因型和流行特点。方法 采集山东地区有代表性的鼠肺标本 ,应用逆转录聚合酶链反应 (RT -PCR)扩增技术及核苷酸序列测定方法对免疫荧光抗原阳性的标本进行HVG2基因扩增并测序 ,与原有山东毒株一起进行同源性分析、系统发生树分析。结果 山东省新分离 18株HV均为汉城 (SEO)型 ,与以往山东SEO型HV有较高同源性 ,在 95 . 7%以上 ,属于同一亚型。山东省汉滩 (HTN)型HV同源性较低 ,在 77. 9%以上 ,属于不同亚型。结论 山东省HV是以SEO型为主的SEO和HTN混合型疫区。SEO型基因变异率低 ,有较高的稳定性。而HTN型HV变异率高 ,稳定性差。