盘状结构域受体2在大鼠酒精性肝纤维化模型中的表达

目的观察盘状结构域受体2（DDR2）在大鼠酒精性肝纤维化不同病理阶段的表达情况，揭示DDR2在酒精性肝纤维化发生、发展中的作用。方法橄榄油拌平衡饲料喂养大鼠的基础上给予60％（V/V）白酒胃内灌注，制备酒精性肝纤维化模型，分别于12、16、20周末观察肝脏病理学改变，并检测血清学指标和肝纤维化指标，荧光定量-PCR和Western blot检测肝组织DDR2基因和蛋白表达并与各项酒精性肝纤维化评价指标进行相关性分析。结果（1）白酒灌胃后DDR2mRNA和蛋白表达量随造模时间延长而增加，对照组DDR2m RNA和蛋白表达分别为1．023±0．132、0．321±0．027，模型1组为3．644±1．686、0．476±0．046，模型2组为8．337±2．387、0．738±0．057，模型3组为15．730±4．569、0．997±0．049，四组之间DDR2mRNA水平（F=21．74，P〈0．01）及蛋白质表达（F=10.38，P〈0．01）差异有统计学意义。（2）相关性分析显示酒精性肝纤维化形成过程中，DDR2与I、Ⅲ、Ⅳ型胶原面积及血清透明质酸、层黏连蛋白、Ⅲ型前胶原、Ⅳ型胶原蛋白水平等均呈显著正相关，其中与Ⅲ型胶原、透明质酸、Ⅳ型胶原蛋白关系最为密切。结论随酒精性肝纤维化进展，DDR2表达呈时间依赖性，提示其在酒精性肝纤维化的发生和进展中发挥重要作用。

钙池操纵的钙通道在乙醇诱导HepG2细胞钙超载中的作用

目的研究乙醇诱导肝细胞钙超载的机制及钙池操纵的钙离子通道（SOes）在其中的作用。方法使用浓度梯度的乙醇处理HepG2细胞，并观察细胞外钙离子螯合剂乙二醇二乙醚二胺四乙酸（EGTA）及SOCs抑制剂2-APB对200umol／L乙醇刺激的干预效应。实验分为：（1）正常对照组：磷酸盐缓冲液刺激；（2）乙醇慢性刺激组：分别给予25、50、100、200、400、800μmol／L乙醇，刺激24h或200μmol／L乙醇，刺激24、48、72h；（3）EGTA处理组：200μmol／L乙醇＋0．5μmol／LEGTA，刺激24h；（4）2-APB处理组：200μmol／L乙醇＋50μmol／L2-APB，刺激24h。细胞计数CCK8试剂盒检测细胞存活率；全自动生物化学分析仪检测HepG32细胞培养上清液ALT、AST漏出量；流式细胞仪检测HepG2细胞胞浆Ca2＋浓度。荧光定量聚合酶链反应及蛋白质印迹法检测HepG2细胞中SOCs通道蛋白分子间质相互作用因子1及钙释放激活钙通道蛋白1的基因及蛋白表达。各组间均数的比较采用单因素方差分析或独立样本t检验。结果50、100、200、400、800μmol／L乙醇刺激24h使HepG2细胞的存活率分别降低为97．3％±2．9％、83．4%±3．3％、67．8％±4．4％、37．5％±3．o％、14．1％±4．9％，组间比较，F=99．945，P〈0．01，细胞存活率呈浓度依浓度依赖性；细胞培养基上清液ALT漏出量分别增加为（14．2±2．8）、（17．7±3．2）、（20．0±2．6）、（21．6±1．3）、（24．9±1．7）U／L，组间比较，F=15．286，P〈0．01；AST漏出量分别增加为（72．0±4．7）、（91．6±7．4）、（107．3±11．4）、（116．5±13．4）、（128．9±7．1）u／L，组间比较，F=39．674，P〈0．01;使HepG2细胞的[Ca2＋]i水平分别增高为正常对照组的（1．3±0．4）、（1．3±0．2）、（1．4±0．2）、（2．3±0．3）、（2．6±0．2）倍，F=56．978，P〈0．01。EGTA、2-APB干预使200μmol／L乙醇刺激后的HEN32细胞[Ca2＋]i水平分别降至正常对照组的（1．8±0．2）倍和（1．9±0．1）倍，t值分别为7．201和8．183，P值均〈0．01;同时将乙醇刺激后的细胞存活率分别增高至82．2％±3．9%和78．6%±1．5％，t值分别为6．692和6．124，P值均〈0．01）；使细胞培养基上清液ALT漏出量分别降低至（16．4±2．0）U／L和（17．2±1．9）U／L，t值分别为7．145和6．352，P值均〈0．01;AST漏出量分别降低至（86．4±8．8）U／L和（88．3±6．3）U／L，t值分别为9．337和8．704，P值均〈0．01。200μmol／L乙醇刺激明显增加HepG32细胞STIM1及Orail的基因及蛋白表达量，且其表达增加持续至少72h。结论乙醇增高SOCs通道蛋白分子表达，增加SOCs介导的Ca2＋内流，提示此可能是乙醇导致肝细胞[Ca2＋]增高及相关肝细胞损伤的重要分子机制。