医学微生物学实验教学改革的体会

为了适应新世纪对高素质人才的要求,在医学微生物学的实验教学中就如何激发学生的学习兴趣、培养学生的创新能力等进行了一些改革和探索.文章从实验室建设、实验内容以及教学方法方面进行了阐述.

七年制医学微生物学实验教学改革的初探

医学微生物学是一门实验科学,实验技术是其不可缺少组成部分.它不仅是学生了解和掌握微生物学实验基本方法和操作技术的一个学习过程,也为学生进一步深入学习其他生命科学特别是分子生物学实验技术奠定基础.本课程在细菌学、病毒学及特微等方面培养学生基本实验方法及技能,包括:显微镜的适当使用,怎样制片染色,无菌技术转移和接种细菌,选择各种各样培养基接种分离并鉴定细菌、细胞培养、病毒分离鉴定等.通过学习能加深学生对微生物学基本理论知识的理解与认识,提高观察、思考、分析和解决问题的能力.我们从七年制微生物学实验教学改革入手,着重提高实验教学质量,加强学生能力及综合素质培养.

留学生医学微生物学教学方法探讨

阐述了留学生医学微生物学的教学过程中的特点及在克服语言障碍、采用多种教学方式及正确认识文化差异三个方面所采用的对策.

医学微生物学实验教学理念与改革思路

探讨医学微生物学实验教学理论创新,指导教学改革。选取2007学年来医、卫、口、护、药、留学生班学员,采用系列融合实验新编教材,讲授一套完整的实验技术路线,替代原有分散零星的知识点,PBL式教学讨论。大学生自主创新的热情被激发,实验报告及论文水平提高,实践操作技能考试通过率及优秀率升高。通过实践系列性创新融合实验,互动教学,可以明显激发大学生的热情和自身潜力,系统掌握医学微生物学实验,为医学生今后学习临床课程、医疗实践、基础研究打下了坚实的基础,收到了良好的教学效果。

加强实验教学改革,提高医学微生物学教学质量

为提高医学微生物学实验教学质量，激发学生学习兴趣、培养科学思维、掌握实验操作技能，进行了一些改革和探索。文章从整合实验教学内容，开发综合性试验；引入设计性实验教学法，发挥学生主观能动性；加强实验室建设，重视生物安全方面以及改进实验教学手段，增添实验内容等方面进行了阐述。

多媒体网络应用于医学微生物学教学中的体会

充分利用多媒体技术和网络丰富的信息资源,真正实现资源共享,将对医学教学大有裨益.本文主要探讨利用多媒体技术和网络资源改进医学微生物学教学的体会.

医学微生物学实验教学存在问题与改革方案探讨

为提高目前我国医学微生物学本科生的教学质量,结合本专业实验教学的实际情况,对其中存在的问题以及可能的解决方案进行初步探讨,文章分别从教师学生的比例、实验教学模式和实验室生物安全多个方面着手,分析实验教学的现状,并提出制作示教录像片、应用虚拟仿真实验教学模式、增加综合性实验与融合性实验的比重等可行性方案。

幽门螺杆菌细胞微生物学模型的研究

目的 建立幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori,Hp)细胞微生物学研究模型。方法 选择 6至 8月龄胎儿胃粘膜组织进行原代细胞培养 ,运用扫描和透射电镜研究了螺杆状和圆球形Hp与人胃粘膜上皮细胞相互作用关系。结果 螺杆状Hp很快与人胃粘膜上皮细胞微绒毛粘附 ,Hp粘附细胞处形成一个致密纤维样肌动蛋白垫 ,上皮细胞膜杯状内陷包绕Hp ,紧密粘附于宿主细胞 ,Hp粘附下方细胞内微丝、微管和肌动蛋白呈局灶性聚集。圆球形Hp可出现类似生物学效应 ,提示两种形态的Hp皆可作用于人胃粘膜上皮细胞。此外 ,螺杆状Hp还可与宿主细胞膜融合 ,被细胞内在化 ,细胞内出现空泡效应。上述病理性改变与Hp感染的胃粘膜活性组织标本的检查结果基本一致。结论 原代胃粘膜上皮细胞与Hp相互作用近似于Hp体内致病的微环境 ,是Hp细胞微生物学研究的良好模型。

两种生物状态肠道益生菌的粘附和粘附拮抗效应的对比研究

目的 :研究活菌和灭活菌两种生物状态的肠道主要益生菌———德氏乳杆菌、双歧杆菌和肠球菌对肠黏膜上皮细胞粘附性及其对肠道几种常见病原菌的粘附拮抗效应。方法 :用光镜和电镜技术分析了两种生物状态的三种益生菌对肠黏膜上皮细胞的粘附指数 ,通过排除实验、竞争实验和替代实验研究了两种生物状态益生菌对侵袭性大肠埃希菌、产毒性大肠埃希菌和痢疾志贺菌的粘附拮抗效应 ,应用平板扩散法观察了三种益生菌的代谢乏液对上述肠道病原菌的抑制能力。结果 :德氏乳杆菌和肠球菌的灭活状态较活菌状态对肠黏膜上皮细胞的粘附性显著增高 ,双歧杆菌经灭活后对细胞的粘附性与活菌相比差异无显著性 ,两种生物状态的三种益生菌对肠道致病菌均具有粘附拮抗作用。滤过后的德氏乳杆菌、双歧杆菌和肠球菌的代谢乏液对侵袭性大肠埃希菌、产毒性大肠埃希菌和痢疾志贺菌均具有较明显的抑制作用 ,经4 2℃、6 5℃和 10 0℃加热不影响德氏乳杆菌和双歧杆菌代谢乏液的抑菌作用。结论 :灭活状态的德氏乳杆菌、双歧杆菌和肠球菌是具有潜在开发价值的微生态制剂。

山东地区汉坦病毒重要基因序列进化关系的研究

目的 :研究山东地区汉坦病毒的基因型分布。方法 :应用RT -PCR法和直接核酸测序法 ,对来源于山东省 11个肾综合征出血热流行地区的患者中获得的 31份汉坦病毒部分M基因片段进行了扩增和测序。结果 :核苷酸序列的同源性及系统发生树分析表明 ,山东地区SEO型汉坦病毒至少存在 4个不同亚型 ,HTN型汉坦病毒至少发现有 4个分支 ,不同HTN型汉坦病毒亚型间的核苷酸序列的差异达 13.0 %～2 2 .7% ,而不同SEO型汉坦病毒分支间相对保守 ,差异仅 5 .0 %～ 7.7%。结论 :山东地区存在汉坦病毒的不同的基因亚型 ,这一发现将促进汉坦病毒流行规律。

幽门螺杆菌丝状体的形成和回复性的研究

目的:探讨幽门螺杆菌在不利环境因素作用下是否可以球形体以外的其他单细胞形式生存。方法:运用幽门螺杆菌于自然界或体内可能遭遇到的胁迫条件,如抗生素、酸性环境和水体为诱导因素作用于幽门螺杆菌,观察其形态学转变和菌体蛋白的表达状况。结果:在亚致死剂量胺曲南和氨苄青霉素作用下,幽门螺杆菌可形成丝状体,当去除抗生素后,幽门螺杆菌丝状体可逐步回复成螺旋状的繁殖体,丝状体经免疫组化法和DNA酶切图谱法进行特异性鉴定呈阳性,幽门螺杆菌丝状体也可见于水体中,与螺旋状幽门螺杆菌相比,丝状体在双向电泳上的菌体蛋白表达谱有改变。结论:丝状体的形成作为幽门螺杆菌生命周期的一个时相,可能是该菌抗逆生存的适应性调节机制,对幽门螺杆菌传播和感染复发的机制尚需进一步研究。

济南地区献血者中人疱疹病毒8型(HHV-8)IgG抗体的检测及相关危险因素分析

目的:了解人疱疹病毒8型(HHV-8)在济南地区不同献血者中的感染情况,并对其与年龄、性别、HBV、HCV、梅毒螺旋体的相关性进行统计学分析。方法:以HHV-8 ORF K8.1合成多肽为抗原,采用ELISA方法检测献血者血清中相应IgG水平。结果:520份血清中抗HHV-8 ORFK8.1抗体的总体检出率为5.962%(31/520),有随年龄增加而增高的趋势,但与性别、HBV、HCV、梅毒螺旋体的相关性无统计学意义。结论:济南地区献血者中有一定比率的HHV-8感染。采取措施,防止HHV-8经输血传播具有一定的现实意义。

性病患者金黄色葡萄球菌感染耐药性研究

目的 研究男性性病后泌尿生殖系金黄色葡萄球菌感染及其对各类抗生素的耐药性 ,旨在协助指导临床合理用药。方法 采用美国 NCCL S药敏试验纸片扩散法 ,检测从男性尿道及前列腺液标本中分离的金黄色葡萄球菌的耐药性。结果 金黄色葡萄球菌对常用 33种抗生素的耐药率以头孢哌酮、阿米卡星 (丁胺卡那 )、头孢呋辛、头孢唑林、新霉素、头孢曲松 (头孢三嗪 )、头孢噻肟、头孢他啶耐药率较低 ,分别为 2 5 .8%、2 6 .5 %、2 7.6 %、2 9.9%、30 .8%、36 .1%、41%、43.9% ;青霉素类、氟喹诺酮类、其他氨基糖苷类、红霉素、氯林可霉素、多西环素(强力霉素 )、壮观霉素等耐药率很高均在 70 %～ 10 0 % ;有 2 0株对 2 0余种抗生素耐药 ;仅对 2株做万古霉素敏感试验 ,2株均耐药。结论 金黄色葡萄球菌在男性性病泌尿生殖系感染占首位 ;这些菌株对各类抗生素有较高的耐药性 ,而且呈多重耐药 ;

E型沙眼衣原体MOMP基因重组腺病毒的构建及免疫原性研究

目的:构建E型沙眼衣原体(Ct)主要外膜蛋白(MOMP)基因重组腺病毒,为沙眼衣原体腺病毒疫苗的研究奠定基础。方法:根据Genebank中E型Ct MOMP基因序列设计引物,用高保真PCR方法从E型Ct基因组DNA中扩增得到MOMP基因片段,克隆至pcDNAII载体,测序后连接入腺病毒穿梭载体pDC316。穿梭载体pDC316-MOMP与含腺病毒基因组的辅助质粒PBHGlox△E1,3Cre共转染至HEK293细胞,在Cre-loxP重组酶作用下进行重组,包装成重组腺病毒颗粒,用PCR和RT-PCR方法进行鉴定。并用动物免疫试验检测重组腺病毒的免疫原性。结果:从E型Ct基因组DNA中扩增出约1.1 kb的特异MOMP基因片段,酶切鉴定及DNA序列测定证实穿梭载体pDC316-MOMP构建正确。穿梭载体pDC316-MOMP与含腺病毒基因组的辅助质粒PBHGlox△E1,3Cre共转染至293细胞,出现明显细胞病变效应。收集重组腺病毒,PCR法证实重组腺病毒含有MOMP基因,RT-PCR证实重组腺病毒在293细胞能表达MOMP基因。重组腺病毒免疫小鼠可诱导特异性抗体产生,证明重组腺病毒具有良好免疫原性。结论:成功构建了E型沙眼衣原体MOMP基因重组腺病毒,该重组腺病毒可诱导小鼠产生特异性抗体。

高三尖杉酯碱对HL6 0细胞凋亡的影响及机制的研究

目的 :研究高三尖杉酯碱对HL6 0细胞凋亡的影响及其机制。方法 :运用高三尖杉酯碱作用HL6 0细胞后撤药实验筛选其诱导HL6 0细胞凋亡启动时相 ,流式细胞和免疫组化技术检测高三尖杉酯碱诱导HL6 0细胞凋亡启动时相凋亡信号分子Bcl - 2、Bax、Fas/FasL、caspase - 3、ERK2和p38的表达状况。结果 :在高三尖杉酯碱诱导HL6 0细胞凋亡启动时相 ,Bcl- 2表达降低 ,Bax表达增高 ,Bcl - 2 /Bax比值降低 ,ERK2表达减低 ,p38表达增加 ,cas pase- 3表达增加 ,Fas/FasL分子的表达无显著变化。结论 :Bcl- 2、Bax、MAPK途径和caspase - 3参与高三尖杉酯碱启动HL6

幽门螺杆菌蛋白质组双向电泳图谱的构建及其相关技术体系的建立

目的:建立针对幽门螺杆菌蛋白质组学研究的双向电泳及其相关技术体系。方法:分别采用冻融兼Urea-CHAPS-DDT-SB3-10裂解提取法和超声兼Urea-CHAPS-DDT-SB3-10裂解提取法提取Hp菌体蛋白,取100μg菌体蛋白利用固相pH梯度等电聚焦双向电泳,对硝酸银染色后获得的双向电泳图谱进行图像分析。结果:冻融兼Urea-CHAPS-DTT-SB3-10裂解液一步提取法获得573±29个蛋白斑点,超声兼Urea-CHAPS-DTT-SB3-10裂解液一步提取法获得921±23个蛋白斑点。结论:超声兼Urea-CHAPS-DDT-SB3-10菌体蛋白提取法提高了双向电泳的分辨率,进而可增强生物质谱鉴定蛋白质的准确度。

侵袭性牙周炎与慢性牙周炎病变位点中人巨细胞病毒的定量检测

目的应用实时荧光定量PCR方法检测侵袭性牙周炎(AgP)及慢性牙周炎(CP)患者龈下样本中人巨细胞病毒(HCMV)的DNA载量,探讨HCMV感染与牙周炎之间的关系。方法选择18例AgP患者、24例CP患者及15例牙周健康对照者,收集龈下样本114例。构建含有HCMV高保守片段的重组质粒,制备标准品DNA模板,建立并应用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法,检测样本中HCMV的DNA载量。结果 AgP病变位点、CP病变位点以及牙周健康位点中HCMV的阳性检出率分别为58.3%、41.7%和6.7%。AgP和CP病变位点中HCMV的阳性检出率显著高于牙周健康位点(P<0.01)。在AgP病变位点中,病毒载量在104以上的位点占33.3%,明显高于CP病变位点的10.4%,两组之间的差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 HCMV感染与牙周炎的发生发展密切相关,其活动性感染可能与AgP组织破坏的迅速进展有关。

白血病细胞蛋白质组学研究技术体系的建立

目的:建立白血病细胞HL60蛋白质组学研究的技术体系。方法:提取白血病细胞HL60的蛋白质,建立固相pH梯度双向电泳图谱,应用图像扫描仪及图像分析软件获得蛋白质斑点的数字化和匹配性信息,对需鉴定的HL60细胞的蛋白斑点A,经胶内酶切后,行基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析,将检测出的肽质量数输入质谱数据库获得需鉴定的蛋白质信息。结果:成功构建出HL60细胞的双向电泳图谱,并用MALDI-TOF-MS成功鉴定出HL60细胞的一个蛋白质点。结论:HL60细胞蛋白质组学研究体系的建立,为进一步研究白血病的蛋白质组学奠定了基础。