解脲支原体对兔输卵管黏膜上皮细胞致病性研究

目的 :探讨解脲支原体 (U U)对兔输卵管黏膜上皮细胞的粘附及其致病性。方法 :采用雌性大白兔作为实验对象 ,用 UU感染兔输卵管黏膜上皮细胞 ,经光学和电子显微镜观察 UU对其粘附性和致病性。结果 :UU感染后 ,兔输卵管管腔有较多渗出物 ,呈淡红染匀质状 ,黏膜层的上皮细胞轻度肿胀 ,黏膜下层有炎症细胞 (以淋巴细胞为主 )呈灶性浸润 ;在电镜下 ,UU粘附于输卵管黏膜上皮细胞上 ,同时上皮细胞游离面的纤毛互相粘连、倒状 ,纤毛细胞核膜欠完整 ,胞核染色质呈凝块状 ,胞浆内可见大量大小不等的空泡 ,无纤毛细胞顶面参差不齐 ,可见伪足样突出 ,微绒毛减少 ,胞浆内近细胞顶部有少量分泌颗粒和空泡变性 ,细胞间可见相嵌连接。结论

实时荧光定量PCR反应检测宫颈脱落细胞人乳头瘤病毒16/18型和巨细胞病毒的协同感染

目的探讨宫颈脱落细胞人乳头瘤病毒16/18型和巨细胞病毒协同感染的关系。方法采用实时荧光定量PCR反应(FQ-PCR)同时检测两种病毒的感染率。结果38例宫颈癌中检出HPV16/18型35例(阳性率92.11%),CMV11例(阳性率28.95%)。32例宫颈癌前病变(CIN)中检出HPV16/18型20例(阳性率62.50%),CMV7例(阳性率21.87%)。30例正常宫颈脱落细胞中检出HPV16/18型5例(阳性率16.67%),未检出CMV。结论宫颈脱落细胞HPV16/18型感染率随宫颈病变程度的加重而升高,且差异有显著性(P<0.05),CMV感染率随宫颈病变程度的加重而升高但差异无显著性(P>0.05),CMV仅是协同HPV16/18型感染导致宫颈癌的发生。

轮状病毒非结构蛋白NSP4研究进展

轮状病毒 (rotavirus,RV)是病毒性腹泻的主要病因。NSP4 (nonstructural protein4 )作为轮状病毒的一种非结构蛋白 ,在病毒形态发生和致病性中发挥重要作用 ,近年来日益受到重视。本文就 NSP4的研究进展作一综述。

基因佐剂在DNA疫苗中的应用

基因佐剂可将编码某些具有佐剂作用成分的基因与DNA疫苗共免疫,在体内表达相应的蛋白,增强T、B细胞对疫苗成份的体液及细胞免疫应答。目前研究较多的基因佐剂有细胞因子基因佐剂如IL12、IL2、IFNγ、GMCSF等;共刺激分子基因佐剂如B72、CD40L等;免疫刺激DNA序列基因佐剂如CpG、ODN等。基因佐剂在体内与疫苗基因共表达,改善抗原的周边微环境,提高疫苗的免疫效果。因此,基因佐剂是目前DNA疫苗研究中的热点问题之一。

优化密码提高病毒蛋白表达的研究进展

通过优化基因密码以提高蛋白表达 ,是近年来某些疫苗研制过程中的新的策略和方法。本文在阐述优化基因密码机制的基础上 ,介绍了优化病毒基因密码的研究现状 ,探讨了优化密码的设计方法、特点。

人巨细胞病毒和糖基化终产物共同作用对血管内皮细胞的影响

目的:观察人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)和糖基化终产物(advanced glycation endproducts,AGEs)共同作用对血管内皮细胞(vein endothelial cells,ECV)氧化应激的影响及对糖基化终产物受体(the receptor for advanced glycation end products,RAGE)表达的影响,明确HCMV和AGEs在致内皮细胞损伤作用中是否具有协同效应,探讨HCMV和AGEs致动脉粥样硬化(AS)发生和发展的可能机制。方法:用HCMV和AGEs分别及共同作用于ECV,将实验对象分为:对照组、HCMV组、牛血清白蛋白(BSA)组、AGEs组、AGEs+HCMV组5组;用激光共聚焦显微镜检测细胞内活性氧(ROS)的改变;采用RT-PCR方法检测血管内皮细胞RAGEmRNA的表达。结果:HCMV感染ECV后,对照组荧光强度和BSA组荧光强度均较弱,两组间比较差异无统计学意义(P>0.05);AGEs组和HCMV组荧光强度强于对照组(P<0.01);AGEs+HCMV组荧光强度高于AGEs组和HCMV组(P<0.05),两者联合作用存在协同效应。对照组和BSA组ECV细胞RAGEmRNA均有低水平表达,两组之间比较无差异(P>0.05);AGEs组和HCMV感染组RAGEmRNA表达量高于对照组(P<0.01);AGEs+HCMV组表达量高于AGEs组和HCMV组(P<0.01)。在相同病毒滴度感染的情况下,随AGEs浓度增加RAGEmRNA的表达增高,呈浓度依赖性;在相同AGEs浓度作用时,随HCMV感染滴度增加RAGEmRNA的表达水平升高,呈滴度依赖性。各组之间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:HCMV和AGEs均能够增强血管内皮细胞氧化应激,促进RAGEmRNA的表达,两者共同作用时呈协同效应。HCMV和AGEs有可能通过协同增强氧化应激、进一步上调RAGEmRNA的表达,介导血管内皮细胞的炎症反应,促进动脉粥样硬化的发生、发展。

先天性巨结肠层粘连蛋白的表达及与RET基因相关性的研究

目的通过对层粘连蛋白(LN)、层粘连蛋白基因、RET基因在先天性巨结肠(HD)病儿狭窄段、移行段、正常段的表达研究,探讨HD的病因。方法用二步法对27例HD患儿狭窄段、移行段、正常段肠壁组织进行免疫组织化学染色,RSImage成像系统照相,JD801形态学图像分析软件判定阳性染色面积;用RT-PCR技术对LN基因及RET基因在三段肠壁的表达定性研究,美国al-pha9900凝胶图像分析系统进行强度表达;用实时荧光定量PCR技术对LN基因及RET基因在三段肠壁的表达定量分析,采用7000型SDS应用软件相对定量2-??Ct法比较各基因的表达差异;相应数据用SPSS11.5软件统计分析,推断LN的表达与HD的关系,并分析两基因表达的相关性及与HD发生的关系。结果层粘连蛋白及其基因在狭窄段表达明显增高,从狭窄段到正常段逐渐减低;而RET基因在狭窄段表达明显减低,从狭窄段到正常段逐渐增高,两者呈负相关。结论层粘连蛋白在无神经节细胞段表达增高是内在的,它引起肠壁神经嵴细胞的过早成熟定居导致HD的发生。层粘连蛋白基因与RET基因的表达呈负相关关系,对HD的形成两者可能存有某种内在的联系。

两种分泌抗PrP单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及其初步鉴定

目的 制备具有广谱种属反应性的PrP单克隆抗体 (McAb) ,用于可传播性海绵样脑病(TSE)的诊断及致病机制研究。方法 分别将对应于牛PrP2 9～ 4 8(BoP1 )、PrP89～ 10 8(BoP2 )的两种多肽与匙孔血蓝蛋白 (KLH)偶联 ,免疫BALB c小鼠 ,经细胞融合后获得分泌针对上述两种多肽的杂交瘤细胞株 ,用Western blot方法检测这些细胞株分泌的McAb与牛 (Bo)、人 (Hu)和仓鼠 (Ha)PrP蛋白的反应性。结果 通过细胞融合和 2～ 3轮克隆化 ,用ELISA筛选出分泌抗BoP1 和BoP2 抗体的杂交瘤细胞株D1 1 和D8。Westernblot显示 ,获得的McAb均能分别与重组BoPrP(2 5～ 2 4 2 )、重组HuPrP(2 3～ 2 31)和HaPrP(2 3～ 2 31)反应。结论 获得了可与牛、人和仓鼠PrP反应的两种McAb ,可用于哺乳类PrP检测及TSE致病机制研究。

先天性巨结肠层粘连蛋白基因与RET基因表达的关系

我们通过实时荧光定量PCR技术对先天性巨结肠（Hirschsprung’s disease，HD）病儿层粘连蛋白基因与RET基因的表达以及它们的相关性进行了研究，现将结果报告如下。

淋巴细胞HLA-A mRNA方法学建立及在乙型肝炎病毒感染患者中的应用

目的建立外周血淋巴细胞HLA-A mRNA的检测方法,探讨其在慢性乙型肝炎、肝炎后肝硬化、肝癌患者中的应用价值。方法改良法提取人外周血淋巴细胞RNA,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)一步法扩增HLA-A mRNA,琼脂糖凝胶电泳结果采用Bandscan软件分析相对灰度值,半定量HLA-A的基因表达。结果半定量HLA-A所得平均相对灰度值在慢性乙型肝炎组、肝硬化组、肝癌组、正常对照组分别为0．54±0．21、0．34±0．27、0．22±0．16、0．95±0．19。慢性乙型肝炎组、肝硬化组、肝癌组均明显低于正常对照组(P<0．05),慢性乙型肝炎组与肝癌组,肝硬化组与肝癌组相比差异有统计学意义(P<0．05),慢性乙型肝炎组与肝硬化组有下降趋势。结论成功建立检测HLA-A基因的RT-PCR一步法,从基因转录水平上证实慢性乙型肝炎、肝炎后肝硬化、肝癌患者外周血淋巴细胞HLA-A下调,且与相应患者细胞免疫功能减弱密切相关。

RUNX3基因甲基化在结直肠癌发生中的作用及与预后的关系

目的探讨RUNX3基因甲基化在结直肠癌发生中作用及与预后的关系。方法分别用免疫组化和甲基化特异性PCR（MSP）技术检测结直肠正常黏膜、腺瘤和癌组织中RUNX3蛋白表达和甲基化状态，分析甲基化状态与5年生存率的关系。统计分析采用秩和检验Kruskal—Wallis法、x2或Fisher’s确切概率法检验、Log—rank检验及多因素COX回归分析。结果28例腺瘤和65例癌组织中RUNX3蛋白表达率分别为86％（24／28）、52％（34／65），明显低于正常组织94％（61／65）（x2=4．328，P=0．037；x2=16．675，P=0．000），腺瘤与癌组织问差异无统计学意义（x2=3．266，P=0．071）。正常组织RUNX3基因无甲基化，腺瘤和癌组织中RUNX3甲基化率分别为21％（6／28）、35％（23／65），明显高于正常组织（P=0．000），腺瘤与癌组织间差异无统计学意义（x2=1．766，P=0．183）；腺瘤组织RUNX3基因甲基化者蛋白表达率为67％（4／6），非甲基化者为91％（20／22），差异无统计学意义（P=0．191）；癌组织RUNX3基因甲基化者蛋白表达率为26％（6／23），非甲基化者为88％（28／32），RUNX3基因甲基化与蛋白失表达有关（x2=9．810，P=0．002）。甲基化者5年生存率明显低于未甲基化者（x2=5．87，P=0．016）。多因素分析显示，RUNX3基因甲基化是影响结直肠癌患者预后的独立因素（P=0．033）。结论RUNX3基因甲基化是结直肠癌发生中的重要基因事件和影响结直肠癌患者预后的独立因素，可能与蛋白失表达有关。