气道上皮IL-25促进哮喘气道重塑

目的:通过检测白细胞介素-25(IL-25)在嗜酸细胞性哮喘(EA)及非嗜酸细胞性哮喘(NEA)患者的血清、诱导痰及气道上皮中的表达,探讨其在支气管哮喘气道重塑中的作用。方法:选取初诊的哮喘患者55例,健康对照组27例,所有受试者均进行肺通气功能检查,然后采集空腹静脉血及诱导痰。据诱导痰中嗜酸性粒细胞(EOS)的比例将哮喘患者分为EA组和NEA组。采用ELISA检测血清及诱导痰中IL-25的水平,同时对其中的10例EA组患者、10例NEA组患者及10例健康对照者行电子支气管镜气道黏膜活检,免疫组织化学技术分析IL-25在气道上皮的表达,HE染色测量气道重塑的重要指标-基底膜厚度,并行血清及诱导痰中IL-25的水平与基底膜平均厚度的相关性分析。结果:与正常对照组相比,EA和NEA组哮喘患者的肺功能轻度受损。ELISA结果显示哮喘患者血清及诱导痰中IL-25的水平明显高于对照组(P<0.05),而EA和NEA组哮喘患者间差异无统计学意义(P>0.05)。免疫组织化学结果显示哮喘患者气道上皮IL-25的表达明显高于对照组,HE染色显示气道黏膜下的基底膜厚度明显增加(P<0.05)。相关性分析显示哮喘患者血清及诱导痰中IL-25水平与气道黏膜下基底膜平均厚度成正相关。结论:IL-25可能有促进哮喘气道重塑的作用,嗜酸性粒细胞与基底膜厚度无明显相关性,其在哮喘气道重塑中的作用可能是有限的。

HDM通过肺泡巨噬细胞TLR4诱导哮喘小鼠气道炎症的机制研究

目的:研究HDM通过肺泡巨噬细胞(AM)Toll样受体4(TLR4)的高表达及诱导AM的活化,探讨其对哮喘小鼠气道炎症的影响。方法:BALB/c小鼠随机分为哮喘模型组(OVA)A,HDM处理组(HDM+OVA)B,对照组(生理盐水)C。用卵白蛋白(OVA)致敏与激发建立小鼠哮喘模型;HE染色观察小鼠气道及肺组织病理变化;光学显微镜下观察小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞分类及计数;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠BALF上清中IL-4、IL-5、IL-13和IFN-γ的含量,实时定量PCR法测定AM的TLR4的表达,流式细胞技术(FCM)检测AM的CD80、CD86的表达。结果:与A组相比,B组BALF上清中IL-4、IL-5和IL-13的水平显著增高(P<0.05),而IFN-γ差异无统计学意义(P>0.05),与A组相比,AM的TLR4mRNA表达明显增高(P<0.05),CD80的表达差异无统计学意义,CD86的表达水平显著增高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:HDM通过AM的TLR4的高表达诱导AM的活化,加重哮喘的气道炎症。

尿大分子碱性磷酸酶变化与新生儿缺氧缺血性脑病肾功能衰竭的关系

【目的】研究新生儿缺氧缺血性脑病(hypoxic-ischemic encephalopathy,HIE)尿大分子碱性磷酸酶(highmolecular alkaline phosphatase,HMAP)水平的变化,探讨HMAP与新生儿HIE急性肾功能衰竭(acute renal failure,ARF)的关系。【方法】利用抗HMAP的单克隆抗体,免疫催化方法检测30例正常对照组新生儿、44例HIE肾衰组新生儿及48例HIE非肾衰组新生儿不同时期尿HMAP的水平,并同时留尿测定各组β2-微球蛋白(β2-MG)的水平。【结果】发病初期,肾衰组、非肾衰组尿HMAP、β2-MG水平高于恢复期和对照组(P均<0.001),且肾衰组尿HMAP高于非肾衰组(P<0.05);发病初期,肾衰组、非肾衰组HIE新生儿尿HMAP与β2-MG均呈显著正相关(P<0.001)。尿HMAP判断HIE新生儿ARF的敏感性、特异性分别为98.7%、80.0%。【结论】在HIE新生儿ARF病程中尿HMAP呈先上升后下降变化趋势,与肾脏的损害及修复过程密切相关,它能比尿β2-MG更灵敏地早期判断HIE肾损伤及严重程度。

辛伐他汀对脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞炎性反应抑制作用

目的:运用脂多糖(LPS)诱导体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的炎性反应,观察辛伐他汀对HUVECs炎性反应的抑制作用。方法:体外培养HUVECs,细胞至第3代,随机分为空白对照组、LPS(100 ng/mL)组、辛伐他汀(5 mg/mL)组、辛伐他汀(5 mg/mL)和LPS(100 ng/mL)共作用组,运用实时荧光定量PCR和ELISA的方法,测定各组细胞单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、白介素-1(IL-1)、白介素-6(IL-6)和尿激酶型纤溶酶原激活物及其受体(uPA/uPAR)的mRNA和蛋白表达的变化。结果:与对照组相比,LPS组细胞的MCP-1I、L-1I、L-6及uPA/uPAR的mRNA表达和上清液中各因子蛋白的表达均明显增加(P均<0.01);与LPS组相比,辛伐他汀和LPS共作用组的细胞MCP-1I、L-1、IL-6及uPA/uPAR的mRNA表达和上清液中各因子蛋白的表达均明显降低(P均<0.05)。结论:辛伐他汀可抑制HUVECs合成及分泌细胞因子MCP-1I、L-1I、L-6及uPA/uPAR,延缓动脉粥样硬化的进程。

毛细管区带电泳法快速测定复方氯唑沙宗片中两组分含量

目的：建立毛细管区带电泳快速测定复方氯唑沙宗片中2组分含量的方法。方法：采用熔融石英毛细管柱，以0．05mol·L^-1Tris(1mol·L^-1磷酸调pH7．3）为运行缓冲液，分离电压为24．0kV，检测波长220nm，柱温40℃，真空进样1s。以苯巴比妥为内标，在5min内完成复方氯唑沙宗片中氯唑沙宗和对乙酰氨基酚含量测定。结果：2组分线性范围分别为0．1－0．6mg·mL^-1(r=0.9989)和0．12－0．72mg·mL^-1(r=0.9993)，平均回收率分别为98．5％和101．5％，RSD为1．0％和1．7％。结论：该方法可用于控制复方氯唑沙宗片的质量，具有快速、准确、简便等优点。

尿刷状缘酶检测在糖尿病早期肾损害诊断中的价值

目的:探讨尿刷状缘酶对糖尿病患者早期肾损伤的诊断价值。方法:根据病程将84例糖尿病(dabetes mellitus,DM)患者分为三组:A组病程3年以内,B组病程3～10年之间,C组病程10年以上。检测他们及30例正常对照组的尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(N-acetyl-beta-D-glucosaminidase,NAG)和尿刷状缘酶,后者包括碱性磷酸酶(alkaline、phosphatase,ALP)和亮氨酸氨基肽酶(leucineaminopeptidase,LAP)。结果:DM各组与对照组尿NAG差异有显著性(P<0.05),各组间尿刷状缘酶的差异亦有显著性(P<0.05)。结论:尿刷状缘酶检查可用于早期DM肾损伤的检测。

哮喘小鼠气道上皮TSLP表达及激活DCs加重气道炎症的研究

目的研究支气管哮喘小鼠气道上皮中胸腺问质淋巴细胞生成素（TSLP）表达，探讨其对哮喘小鼠肺部炎症的影响。方法BALB／c小鼠分为生理盐水对照组、哮喘模型组和TSLP中和抗体干预组。通过气道反应性和肺组织病理学评价哮喘模型；酶联免疫吸附试验（ELISA）检测支气管肺泡灌洗液（BALF）上清中IL-4、IL-5和IL-13的含量；实时荧光定量PCR（qRT—PCR）测定肺组织中TSLP mRNA的表达；免疫组化及Western blot法测定肺组织中TSLP蛋白的表达；流式细胞术检测BALF中树突状细胞（DCs）表面CD40、CD80、CD86的表达水平。结果小鼠气道反应性增高和肺组织病理学检查结果均符合哮喘的典型表现证实造模成功；哮喘组BALF中IL-4、IL-5和IL—13的水平显著高于正常组（P〈0．05），且TSLP与其成正相关；与正常对照组相比，哮喘组气道上皮TSLP mRNA和蛋白高表达，两组间差异有统计学意义（P〈0．05）；哮喘组BALF中DCs表面CD40、CD80、CD86表达明显高于正常组（P〈0．05）。TSLP中和抗体干预后，BALF中DCs表面CD40、CD80、CD86表达明显减低，并进一步减少IL-4、IL-5和IL-13的表达。结论哮喘气道上皮中TSLP表达增高，TSLP通过上调DCs表面CD40、CD80、CD86的表达，激活DCs诱导CD4^＋ T细胞向Th2分化发育，与加重哮喘的气道炎症有关；TSLP抗体干预可阻断DCs的活化，减少Th2细胞因子的分泌，这些因素可能与减轻哮喘炎症反应有关，为哮喘治疗途径提供新的思路。

脂多糖诱导小鼠肺损伤模型巨噬细胞活化及共刺激分子CD40上调研究

目的观察肺泡巨噬细胞(AM)活化过程和共刺激分子CD40表达变化,探讨其在脂多糖(LPS)诱导的小鼠急性肺损伤(ALI)模型中所发挥的作用。方法BALB/c小鼠分为正常对照组和LPS处理组。光镜观察24、48h肺组织病理变化;RT-PCR测定活化巨噬细胞(activated macrophage,AMφ)中TLR4表达;电泳迁移率变动分析(EMSA)检测AM_φ核提取物中NF-κB的活性;Northern blot检测CD40 mRNA表达,流式细胞术检测CD40蛋白表达;ELISA测定肺泡灌洗液(BALF)中TNF-α、MIP-2及IL-1β的含量。结果小鼠吸入LPS后,肺泡隔断裂、肺间质充血及肺泡腔中性粒细胞浸润,并检测到AMφ表面TLR4的表达、核转录因子NF-κB活性增强、共刺激分子CD40 mRNA和蛋白显著表达,并随着时间延长出现增加趋势,BALF中炎症因子释放增加,正常对照组无明显变化(P<0.05)。结论LPS诱导的ALI中,AM活化和共刺激分子CD40上调,导致瀑链式炎症反应,造成肺急性炎症损伤。

中性内肽酶高表达对β-淀粉样肽诱导的PC12细胞凋亡的保护作用

目的确定中性内肽酶(NEP)高表达对β-淀粉样肽(Aβ)诱导的PC12细胞凋亡保护作用的分子机制。方法利用脂质体转染法建立可稳定表达NEP和失活NEP的PC12细胞系,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法和免疫印迹法(Western blot法)检测基因在细胞中的表达。利用Aβ_(25-35)诱导PC12细胞,CellTiter96^(?)AQueous单溶液检测系统(MTS)检测细胞存活率;分光光度法检测乳酸脱氢酶(LDH)含量、活性氧(ROS)生成量水平变化;化学发光法检测细胞三磷酸腺苷(ATP)生成量和Caspase- 3表达量的变化。结果在Aβ_(25-35)诱导PC12细胞凋亡中,NEP高表达可明显提高细胞存活率,降低培养基中LDH含量和ROS生成量;提高细胞ATP释放量;抑制Caspase-3在细胞凋亡中的激活,与正常PC12细胞相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。稳定表达失活NEP的PC12细胞则对细胞凋亡没有影响。结论NEP通过降低氧化应激反应对细胞线粒体的损伤,抑制凋亡关键蛋白Caspase-3的激活,从而提高Aβ_(25-35)诱导的神经细胞的存活率。

缺氧缺血性脑病新生儿尿大分子碱性磷酸酶的研究

目的研究缺氧缺血性脑病(HIE)新生儿尿大分子碱性磷酸酶(HMAP)水平的变化及其早期诊断肾功能损害的价值。方法HIE组包括轻度脑病52例和中重度脑病40例。利用抗HMAP的单克隆抗体,用免疫催化方法检测92例HIE患儿治疗前后及30例正常新生儿(对照组)尿HMAP水平,并测定两组尿β2-微球蛋白(β2-MG)水平。结果HIE组治疗前尿HMAP、β2-MG水平高于治疗后(t=28.15、t=16.12,P<0.01)和对照组(t=11.89、t=12.34,P<0.01),且中重度HIE组尿HMAP高于轻度组(t=2.35,P<0.05);HIE组尿HMAP的异常发生率(85.9%)显著高于β2-MG(65.2%)(χ2=10.62,P<0.01);HIE组尿HMAP与β2-MG呈直线正相关(r=0.56,P<0.01)。结论HIE新生儿大多存在肾功能损害,尿HMAP比β2-MG更灵敏地反映HIE时肾损害的程度,可早期发现HIE新生儿肾损害。

正念减压训练疗法对胃癌患者焦虑、抑郁情绪及免疫功能的影响

目的探讨正念减压训练疗法对胃癌患者焦虑、抑郁情绪及免疫功能的影响。方法选择2011年3月—2015年2月进行治疗的118例胃癌患者为研究对象，随机分为观察组和对照组，每组各59例，两组患者均给予常规心理健康教育，观察组在常规治疗的基础上给予正念减压训练干预，每周进行1次，共6次。干预前后采用焦虑自评量表（SAS）和抑郁自评量表（SDS）对患者的焦虑及抑郁状态进行评价，并采用磷酸酶桥联酶标法检测T细胞亚群的情况评价治疗前后免疫功能情况。结果正念减压训练干预前，观察组和对照组SAS和SDS评分差异无统计学意义（P〉0．05）；经过正念减压训练干预后，观察组SAS和SDS评分低于干预前（P〈0．05）；而对照组经过常规心理健康教育干预后SAS和SDS评分基本无变化，差异无统计学意义（P〉0．05）；观察组干预后SAS和SDS评分低于对照组（P〈0．05）。经过正念减压训练干预后观察组CD3^＋、CD4^＋和C04^＋／CD8^＋均升高，CD8^＋降低，与干预前相比差异有统计学意义（P〈0．05）；对照组免疫功能指标CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋和CD4^＋／CD8^＋干预前后相比差异无统计学意义（P〉0．05）；观察组和对照组干预前CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋和CD4^＋／CD8^＋相比差异无统计学意义（P〉0．05）；观察组干预后CD3^＋、CD4^＋和CD4^＋／CD8^＋明显高于对照组干预后，CD8^＋明显低于对照组干预后（P〈0．05）。结论正念减压训练疗法能够抑制胃癌患者的焦虑及抑郁等负面情绪，提高患者的免疫力，值得临床推广应用。

胞外体与病毒感染的研究进展

胞外体(exosome,EXO)起源于多种真核细胞多泡体(multivesicular body,MVBs)的内部小囊泡,MVBs与细胞膜融合后即释放出EXO,其功能决定于来源的细胞。作为细胞间信息传递的新方式,EXO逐渐成为各领域的研究热点。本文就EXO的功能及作用做一综述,着重在病毒感染方面。在病毒感染的过程中,EXO不仅可以作为病毒感染和传播的重要方式,在介导病毒的免疫逃逸和免疫耐受中也扮演了重要角色。