2009年山东大学第二医院细菌耐药性监测及分析

目的 调查山东大学第二医院2009年临床分离菌株发生率及耐药情况,为临床合理选择抗菌药物提供依据.方法 对2009年山东大学第二医院各类送检标本种类、分布和耐药性进行分析,共计非重复分离株3259株,使用VITEK鉴定系统进行细菌鉴定,纸片扩散法（K-B法）进行药敏试验,微生物检验中文系统ATBPLUS Ver3.3进行数据统计分析.结果 分离菌株主要为革兰氏阴性菌（占56.61%）.大肠埃希菌对青霉素类如哌拉西林、氨苄西林耐药率分别为81.82%、91.92%.对碳青霉烯类抗生素敏感.肺炎克雷伯菌对青霉素类和头孢菌素类、氨基糖苷类等抗生素普遍耐药,未发现对亚胺培南耐药的菌株.铜绿假单胞菌对亚胺培南和美罗培南的耐药率分别达到37.50%和40.69%,鲍氏不动杆菌普遍耐药,只有多肽类抗生素多粘菌素耐药率为1.35%.金黄色葡萄球菌对青霉素类、头孢菌素类、大环内酯类、林可霉素类等多种抗生素耐药率均在80%以上,没有发现耐万古霉素的菌株.结论 我院细菌耐药情况较为严重,应加强合理选择抗菌药物,严格无菌消毒制度,严格控制机会感染和院内感染.

CIP2A相关分子生物学机制的研究进展

蛋白磷酸酶2A的癌性抑制因子(CIP2A)近来被鉴定与多种恶性肿瘤的发生和发展密切相关。研究表明CIP2A可以通过稳定c-Myc、促进细胞增殖和锚定独立生长、阻滞衰老和分化来促进体内恶性肿瘤的发生和发展。另外CIP2A被发现与肿瘤患者生存率和侵袭力密切相关。近年来,CIP2A转录调节和信号转导通路调节等方面的新发现极大地丰富了CIP2A的作用和调节机制。

基础医学大学生开放创新实验室的建立及管理

根据山东大学医学院细胞与分子医学平台的特点,创建大学生开放创新实验室,主要为大学生、研究生提供实验改革、实验研究、实验咨询、实验技术等多元化服务。在基础医学实验教学管理体制、课程体系和教学内容、创新实验课程教材的编写和教学方法、学生创新科技成果等方面取得了显著的成效,起到了良好的辐射和示范作用。大学生开放创新实验室的建立及运行,符合时代发展的潮流,有助于医学院校实验教学、科研和管理的进步,具有广阔的推广应用前景。

山东省人巨细胞病毒感染的流行病学调查及其相关因素研究

目的:了解山东省人巨细胞病毒(humancytomegalovirus,HCMV)感染情况及其相关影响因素。方法:在山东省随机选取1870例研究对象,利用ELISA方法进行HCMVIgM、IgG检测,并进行血型、SDF1和CCR2受体基因的多态性检测。对HCMVIgM和IgG阳性率进行分析,研究其与地区、性别、职业、年龄、血型以及SDF1和CCR2受体基因多态性的关系。结果:山东省HCMVIgM阳性率为40.21%,IgG阳性率为48.07%;各地区IgM和IgG有显著差异(P<0.05);女性IgM和IgG显著高于男性;农民和医生IgG显著高于其他职业人群;随年龄增加,IgG阳性率增加;HCMV感染与血型、SDF1和CCR2受体多态性无显著性关联。结论:山东省HCMV现行感染率较高,与地区、性别、职业、年龄等因素相关,与血型、SDF1和CCR2受体多态性无关。

骨形态发生蛋白的研究进展

骨形态发生蛋白(bone morphogenetic pro-teins,BMPs)是一族独特的糖蛋白,是目前发现的唯一具有诱导IOPC(inducible osteogenic precursor cells)类细胞向成骨细胞方向转化的蛋白质.

不同牛PrP合成肽段的抗原性研究

目的研究PrP多肽的抗原性以及不同偶联方法对多肽免疫原性的影响。方法选择4段牛PrP多肽(BoP1、BoP2、BoP3、BoP4)为半抗原,KLH为载体,MBS、戊二醛两种偶联方法进行偶联,免疫BALB/c小鼠,间接ELISA方法检测小鼠血清中抗体效价,并对两种偶联方法进行比较。结果两组动物均出现死亡,戊二醛偶联多肽免疫小鼠出现不同程度的腹水,MBS偶联多肽免疫小鼠未见其它异常反应;戊二醛偶联的4种多肽产生的抗体效价无显著性差异(P>0.05),MBS偶联的KLH-BoP1、KLH-BoP2、KLH-BoP4产生抗体效价无显著性差异(P>0.05),MBS偶联的KLH-BoP3抗体效价低于其它3种多肽(P<0.05);对同一种多肽而言,不同偶联方法KLH-BoP1、KLH-BoP2、KLH-BoP4所产生抗体效价无显著性差异(P>0.05),戊二醛偶联KLH-BoP3产生的抗体效价明显高于MBS偶联KLH-BoP3产生的抗体效价(P<0.05)。结论PrP多肽可作为半抗原刺激小鼠强烈的免疫反应,不同偶联方法,不同肽段抗原性不同,为抗PrP多克隆及单克隆抗体的制备奠定了基础。

弓形虫P30与佐剂CTA_2/B复合基因酵母表达载体的构建与生物信息学分析

目的构建含有弓形虫主要表面抗原P30与免疫佐剂CTA2/B复合基因的克隆载体及酵母表达载体,为进一步真核表达重组P30CTX蛋白奠定基础。方法PCR扩增P30CTX复合基因,产物回收后与pMD18T载体连接,转化大肠埃希菌DH5α,经氨苄抗性筛选及测序,建立克隆载体pMD18T P30CTX;克隆载体与表达载体双酶切后,回收1313bp的P30CTX基因,亚克隆入酵母表达载体,转化大肠埃希菌DH5α,筛选、测序后建立酵母表达载体PGAPZαA P30CTX。重组质粒分别以PCR、酶切及测序鉴定。使用生物信息软件分析P30CTX复合基因,预测编码蛋白结构。结果重组质粒经PCR可得1313bp的特异条带,EcoRⅠ、XbaⅠ双酶切获得1313bp和3085bp的条带,与预期大小一致,测序结果证实为pGAP P30CTX基因,序列分析同源性为99.82%,P30CTX蛋白结构折叠无明显改变。结论成功构建了含有弓形虫主要表面抗原P30与免疫佐剂CTA2/B复合基因的克隆载体及酵母表达载体,预测毕赤酵母表达系统对P30CTX的抗原性不会产生影响。

医学本科生科研训练体系的建立与管理

积累多年来实验教学的改革成果和大学生开放创新实验室的运行经验,建立健全了面向医学本科生循序渐进式的科研体系。早期科研训练模式践行教育理念的转变,顺应现代素质教育的要求,有利于医学本科生科研思维、创新和实践能力的培养。应加大面向本科科研基金的经费投入,扩大参与学生数量,使更多的医学本科生可以通过科研创新实验获得科研基本训练;同时进一步优化创新实验的设计方案,完善本科科研素质教育体系,巩固实验教学的改革成果。

SARS病毒刺突蛋白与TAP标签在Vero细胞内的融合表达研究

目的:探讨SARS冠状病毒(SARS-CoV)刺突蛋白(Spikeprotein,S蛋白)与钙调蛋白结合肽(calmodulinbindingpeptide,CBP)-蛋白A串连亲和纯化(tandemaffinitypurification,TAP)标签在Vero细胞内的融合表达及亚细胞定位,为其细胞结合蛋白的筛选奠定基础。方法:从质粒pGEM-4Z-S中扩增S片段,在5'端加入Kozak序列,并与TAP标签基因共同插入pcDNA3.1(-)中,构建出真核表达载体pcDNA3.1-S-TAP(C)。将构建好的质粒瞬时转染Vero细胞,并共感染重组痘苗病毒vTF7-3,用间接免疫荧光及Western-blotting技术检测融合蛋白的表达及亚细胞定位。结果:成功构建出真核表达载体pcD-NA3.1-S-TAP(C),瞬时转染Vero细胞后S-CBP-蛋白A融合蛋白[S-TAP(C)]得到表达,重组痘苗病毒vTF7-3可有效增强该融合蛋白的表达水平,且检测到S-TAP(C)融合蛋白表达于细胞膜上。结论:S蛋白与TAP标签融合蛋白表达于细胞膜上,且vTF7-3的感染有助于靶蛋白表达水平的提高。

胎儿巩膜碱性成纤维细胞生长因子和转化生长因子β表达的研究

目的观察不同胎龄胎儿眼球巩膜碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）和转化生长因子β（TGF-β）的表达情况,了解bFGF和TGF-β在正常眼球发育过程中的作用及变化规律。方法收集12-20周米非司酮配伍米索前列醇或利凡诺羊膜腔注射引产的胎儿20例,其40只眼,立即摘除眼球,取4-5mm范围巩膜,用实时定量PCR方法检测巩膜bFGF和TGF-β的表达情况。结果各胎龄阶段巩膜bFGF均有表达,胎龄12-14周时表达最高,以后逐渐下降并保持稳定水平,各胎龄阶段巩膜均有TGF-β表达,胎龄12周时表达较低,以后逐渐升高并保持稳定水平。结论各胎龄阶段胎儿巩膜均有bFGF和TGF-β的表达,bFGF和TGF-β的表达水平随着胎龄的变化而变化。

RNAi作用机制与抗病毒研究

RNA干扰是指导入针对特异靶基因产物的同源双链RNA可导致细胞特定基因缺失或减退的显型,是体内抵御外源感染的一种重要保护机制。目前,RNA干扰作为一种简单、有效的代替基因敲除的遗传工具,正在被用于功能基因组学、基因治疗、基因表达调控等多个研究领域。本文主要综述了RNA干扰发生的机制,并兼述其在抗病毒方面的应用。

光电化学竞争法检测生物素

建立了光电化学系统竞争性检测生物素(Biotin)小分子浓度的方法。采用联吡啶钌[Tris(2,2'-bipyridine)ruthenium,Ru-bpy)]作为标记物,以氧化锡纳米颗粒为电极,草酸盐为电子供体还原标记物。在470 nm光激发下,联吡啶钌的外层电子吸收能量后由基态变为激发态,注入半导体氧化锡纳米颗粒电极的导带,形成光电流信号;草酸盐还原失去电子的联吡啶钌使其恢复初始状态,从而可以再次作为电子供体受激发产生光电流信号。在竞争性检测生物素(Biotin)浓度时,亲和素(Avidin)吸附到氧化锡纳米颗粒电极表面作为识别元件,在浓度大于0.5 g/L时能够达到最大的电极表面覆盖率。1μmol/L Ru-bpy-biotin与不同浓度Biotin组成的混合溶液与电极表面的Avidin发生亲和反应,光激发后检测光电流大小;当溶液中Biotin的浓度增加时,致使与电极表面Avidin结合的Ru-bpy-biotin量减少,在光照射下光电流信号降低。这一竞争性光电检测方法检测Biotin时,检出限为8μg/L。本方法可进一步扩展,应用于有机化合物的竞争性免疫检测。

比较蛋白质组学研究进展

蛋白质组学作为后基因时代研究的一个重要内容,已广泛深入到生命科学和医药学的各个领域,尤其是比较蛋白质组学在疾病研究、治疗和制药中得到了更为广泛的应用。本文简要介绍了比较蛋白质组学的基本概念、研究技术和相关的研究现状。

重组质粒PcDNA3.1-P30-P22-CTXA_2/B在Hela细胞中表达的研究

目的观察重组质粒 pcDNA3.1-P30-P22-CTXA_2/B 在 Hela 细胞中的表达情况,并检测其表达的融合蛋白 P30-P22-CTXA_2/B 免疫学活性。方法脂质体介导重组真核表达质粒 pcDNA3.1-P30-P22-CTXA_2/B 转染 Hela 细胞,G418筛选稳定转染的细胞株,收集蛋白行 SDS-PAGE 和 Westem-Blot 分析,检测融合蛋白的免疫学活性。结果经重组质粒 pcDNA3.1-P30-P22-CTXA_2/B 稳定转染的 Hela 细胞表达了分子量约64KD 的融合蛋白,经 Western-Blot 检测证实该融合蛋白具有 P30免疫原性。结论在HeLa 细胞中成功表达了具有 P30免疫原性的融合蛋白 P30-P22-CTXA_2/B,为下一步动物实验奠定了基础。

用细胞因子流式细胞计数术体外检测重组人IL-12的生物学活性

对重组IL-12生物学活性的鉴定目前国内外多采用淋巴细胞增生试验（MTT）、NK细胞杀伤试验（LDH）、IFN-γ产生等方法.细胞因子流式细胞（cytokine follow cytometry,CFC）是近年来体外细胞免疫功能研究中出现的新方法,不仅简单、快速,而且可以同时获得针对某种抗原特异性T细胞亚群数量及其功能的二维指标.本研究构建了人IL-12单链双亚基共表达载体,在HEK293细胞中表达重组IL-12.分别应用CFC、MTT、LDH等方法对其生物学活性进行鉴定.

成年患者食管异物临床特点分析256例

目的:总结分析食管异物患者临床特点.方法:对2004-01/2012-01消化内镜中心诊治的食管异物成年患者进行回顾性分析,并对其临床资料特点进行统计分析.结果:共纳入256例患者,食管异物以食源性异物为主(95.7%),常见临床症状为异物梗阻感、吞咽困难、吞咽疼痛.老年患者(≥65岁)伴有食管基础疾病的比例明显高于18-65岁患者(27.6%、14.8%,P<0.05).有食管基础疾病的患者,异物以食糜为主(65.3%).而无食管基础疾病的患者异物以鱼骨、鸡骨等骨头为主(68.5%),对比有统计学差异(P<0.05).252例患者(98.4%)经内镜下治疗成功.结论:食管异物为临床常见疾病之一,治疗过程中需注意老年患者和/或有食管基础疾病的患者.内镜下治疗食管异物安全有效.

小鼠口服弓形虫DNA混合疫苗的免疫保护反应

目的观察携带弓形虫表面抗原复合基因重组沙门氏菌经口免疫BALB/c小鼠所诱导的免疫反应。方法构建弓形虫主要表面抗原SAG1、SAG2复合基因真核表达质粒,将其转入减毒鼠伤寒沙门氏菌BRD509(BRD509/pSAG1/SAG2),经口服免疫BALB/c小鼠,以携带空载体质粒的减毒沙门氏菌BRD509及生理盐水(NS)组为对照,分别于每次免疫前和免疫后断尾取血,并于末次免疫后第4周取小鼠脾脏测定T淋巴细胞增殖活性、天然杀伤细胞(NK细胞)活性和T细胞亚群;ELISA法测定IgG抗体及血清中的细胞因子干扰素(IFN-γ),白介素-4(IL-4)。与末次免疫后4周,每只小鼠腹腔注射0.1ml(105)弓形虫RH株速殖子攻击,观察小鼠存活时间。结果免疫组小鼠的IgG抗体水平明显提高,滴度为1∶100;NK细胞杀伤活性和T细胞增殖活性也明显增强,其中NK细胞杀伤活性为85%±7%,T细胞增殖指数为2.83,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。免疫鼠攻击感染后平均存活时间比对照组长5d。结论弓形虫口服DNA混合疫苗可诱导小鼠产生保护性免疫。

弓形虫抗原与霍乱毒素A2/B亚基复合基因在小鼠体内诱导的免疫反应

目的 观察弓形虫主要表面抗原SAG1、SAG2 与霍乱毒素A2 /B亚基复合基因真核质粒经肌肉免疫小鼠所诱导的免疫反应。方法 将SAG1基因、SAG2 基因及CTXA2 /B基因定向连接插入真核表达质粒pcDNA3.1,经酶切及测序,获得pcDNA3.1 SAG1 SAG2 及pcDNA3.1 SAG1 SAG2 CTXA2 /B的重组子;碱裂解法大量制备经肌肉注射免疫BALB/c鼠,每只鼠经后腿肌肉注射质粒10 0 μg ,每2周免疫1次,共3次,以PcDNA3.1空质粒注射组及PBS组为对照,分别于每次免疫前断尾取血和免疫后4周取小鼠脾脏测定T淋巴细胞增殖活性及NK细胞活性,ELISA法测定IgG抗体。结果 免疫组小鼠的IgG抗体水平明显提高,NK细胞杀伤活性和T细胞增殖活性也明显增强。免疫鼠抗攻击感染的时间延长。结论 含有霍乱毒素的复合基因免疫小鼠后体液免疫和细胞免疫水平均有提高。

抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的中药筛选

目的以50种常用中药筛选抗耐甲氧西林金葡菌(MRSA)的中药。方法采用K-B纸片扩散法从50种中药初步筛选;通过琼脂平板抑菌法观察所筛选的5种抗MRSA作用最强的中药的MIC;采用微量液体平板棋盘法研究5种中药两两联合应用的抗菌作用。结果抗菌筛选实验中50种中药有35种产生抑菌圈,其中以黄连、黄柏、大黄、银柴胡和石榴皮的抑菌圈直径最大,黄连和黄柏联合应用时抗菌指数(FIC)<0.5。结论所选中药多数具有抗MRSA作用,其中以黄连、黄柏、大黄、银柴胡和石榴皮的作用最强,黄连和黄柏联合应用因协同作用抗菌作用最强,为中药抗MRSA的较好选择。

弓形虫多价DNA疫苗免疫途径与效果评价

目的观察弓形虫多价DNA疫苗经不同免疫途径对小鼠的免疫效果。方法通过基因重组技术构建弓形虫多价抗原与霍乱毒素融合基因的真核表达质粒pSAG1-2-CTA2/B;碱裂解法大量制备重组质粒经肌注、滴鼻途径免疫小鼠,每2周免疫1次,共3次,于免疫前和免疫后4周断尾取血测定IgG抗体和血清中的细胞因子干扰素(IFN-γ)、白介素(IL-4);取免疫小鼠脾脏测定T淋巴细胞增殖活性、自然杀伤细胞(NK细胞)活性及T细胞亚群。结果经肌注免疫的小鼠IgG抗体生成明显(P<0.05),经滴鼻免疫的小鼠细胞免疫水平明显增强(P<0.01)。同时经2种途径免疫的小鼠体液免疫和细胞免疫水平均明显增强(P<0.01),且免疫鼠生存率大大提高(P<0.05)。结论多种免疫途径结合可有效增强弓形虫多价DNA疫苗的免疫原性。