miR-133b在甲基苯丙胺诱导PC12细胞凋亡中的调控作用

【目的】探讨小分子非编码RNA 133b在甲基苯丙胺(MA)导致神经元毒性损伤中的表达变化及其对神经细胞凋亡的调控作用。【方法】培养PC12细胞,分为对照组和MA处理组。应用800μmol/L MA处理PC12细胞建立神经元损伤细胞模型,显微镜下观察PC12细胞突起变化,采用Hoechst33342/PI双染色检测细胞凋亡变化;采用实时荧光定量PCR(Real time-PCR)技术检测miR-133b的表达水平变化;并进一步对miR-133b进行功能分析,分别转染miR-133b模拟物和抑制物以增强或抑制其功能,观察干扰miR-133b功能后MA对PC12细胞凋亡的影响。【结果】800μmol/L MA可明显诱导PC12细胞损伤,导致神经突起短缩,神经元凋亡数目增多;荧光定量PCR结果显示MA毁损PC12细胞后,miR-133b表达明显降低;转染miR-133b模拟物后PC12细胞凋亡率下降,而转染miR-133b抑制物后PC12细胞凋亡率增加。【结论】高浓度MA可诱导神经细胞损伤、诱发神经元凋亡并下调miR-133b表达,上调miR-133b表达能降低神经细胞凋亡。miR-133b在MA介导的神经毒性损伤中起至关重要的作用。本研究为阐明MA的神经毒性损伤机制提供了理论依据,并且通过干扰miR-133b的功能可能成为对抗MA导致神经损伤的新策略。

miR-133b在甲基苯丙胺依赖大鼠脑内表达及对神经元毒性损伤的调控作用

目的探讨miR-133b在甲基苯丙胺（methamphetamine，MA）依赖大鼠脑内表达情况及其对神经元毒性损伤的调控作用。方法通过腹腔内连续注射MA（10mg／kg），建立条件性位置偏爱（conditionedplacepreference，CPP）大鼠模型，应用实时荧光定量PCR（Real—timePCR，RT—PCR）技术检测模型鼠脑皮层miR-133b的表达变化。体外培养PCI2细胞并给予800μmol／LMA处理，RT—PCR检测miR-133b在培养神经细胞中的表达，并分别转染miR。133b模拟物和抑制物，观察miR-133b干扰后MA对培养神经细胞线粒体膜电位（mitochondfialmembranepotential，MMP）的影响。结果连续14d腹腔内注射MA后，大鼠在伴药箱停留时间[（620．20±44．80）s]明显长于对照组[（341．80±25．12）s，P〈0．01]，表明成功建立了MA依赖鼠模型。RT—PCR检测发现MA模型鼠脑皮层miR-133b表达（0．36±0．05）较对照组（0．99±0．08）明显降低（P〈0．01）。在体外神经元模型中，PCI2细胞经MA处理后，可见大部分神经细胞胞体变圆，神经突起退缩，RT—PCR结果显示miR．133b表达（0．74±0．05）较对照组（1．00±0．02）降低（P〈0．05）。JC-1检测显示MA组[（109．85±7．03）个]MMP较对照组[（36．49±3．89）个]明显下降（P〈0．01），miR-133b模拟物组[（58．97±6．56）个]MMP较模拟物对照组[（135．46±15．04）个]明显增加（P〈0．01），miR-133b抑制物组[（162．84±14．15）个]MMP较抑制物对照组[（139．81±12．26）个]下降（P〈0．05）。结论miR-133b在MA依赖大鼠脑皮层组织和MA损伤体外神经元模型中表达均明显下调，通过调控miR-133b的表达，能够改变MA处理培养神经细胞的MMP损伤，表明miR-133b不仅参与了MA导致的神经损伤，还有望成为-个干预的分子靶点。