济南市汉族育龄妇女PCOS患病状况的初步调查

目的:探讨济南市汉族育龄妇女多囊卵巢综合征(PCOS)患病状况及其临床特点。方法:以2003年ESHRE/ASRM建议诊断标准,按流行病学整群抽样方法调查济南市1027例育龄妇女中PCOS的患病状况。结果:(1)以ESHRE/ASRM 3条指标符合2条的原则检出PCOS 85例,群体患病率为6.46%;(2)检出的PCOS中稀发排卵、多囊样卵巢(PCO)、高睾酮(T)血症、临床高雄(F-G≥6多毛和痤疮)分别占89.4%、72.94%、57.65%、38.8%(1.18%和38.8%);每两项指标组合:稀发排卵+PCO、稀发排卵+高T、PCO+高T分别占60%、45.9%、38.8%;符合3条指标而临床、生化高雄仅有其一者占48.2%,两者均有占11.8%;不孕占7.06%、肥胖占8.23%。按汉族妇女F-G≥2分标准,群体PCOS中多毛率为37.65%。结论:(1)PCOS占济南市汉族育龄妇女的6.46%。(2)ESHRE/ASRM标准总体上是适合济南汉族育龄妇女PCOS检出的标准,多项指标可提高检出的特异度;(3)多毛作为临床高雄指标F-G≥2分更适于汉族人群。

表皮生长因子和促性腺激素对人类卵母细胞体外成熟的影响

目的 :研究表皮生长因子 (EGF)和不同浓度促性腺激素 (Gn)对未成熟卵母细胞体外成熟的影响。 方法 :将EGF添加至卵母细胞培养液中 ,观察EGF Gn联合应用与单独使用Gn对卵母细胞体外成熟的影响 ;分别改变绒毛膜促性腺激素 (hCG)和卵泡刺激素 (FSH)的浓度 ,观察不同浓度的hCG、FSH对卵母细胞体外成熟的影响。结果 :添加EGF可显著提高卵母细胞的体外成熟率 (P <0 .0 5 ) ;提高hCG和FSH的浓度对卵母细胞的培养、受精及卵裂无影响。 结论 :EGF可促进卵母细胞体外成熟 ,明显提高卵母细胞体外成熟率 ;提高Gn浓度对卵母细胞的培养无进一步的促进作用。

人卵母细胞体外成熟前后线粒体分布的变化

目的研究人未成熟和成熟卵母细胞中线粒体的分布,进一步阐明卵母细胞成熟和线粒体分布的关系。方法未成熟卵母细胞和成熟卵母细胞均用Mito Tracker Green FM染色,经多聚甲醛固定后在激光扫描共焦显微镜下观察线粒体的分布。结果线粒体在细胞质中的分布方式可分为:周边分布、半周边分布和均匀分布。在64.10%(50/78)的GV期卵母细胞中,线粒体呈周边分布。45.16%(28/62)的MI期卵母细胞中,线粒体仍维持周边分布;呈均匀分布的卵母细胞的比例为38.71%(24/62)。体外培养成熟以后,线粒体在75.47%(80/106)的卵母细胞中呈现均匀分布。与体外培养成熟的卵母细胞相比,体内成熟的卵母细胞中线粒体分布最明显的特点是胞质中央区域线粒体的浓集,荧光强度高于周边区域。结论人卵母细胞成熟前后,线粒体出现明显的分布变化,由未成熟卵母细胞中以周边分布为主变为成熟卵母细胞中以均匀分布为主。

用荧光探针JC-1检测氧化应激对精子线粒体膜电位的影响

目的:利用荧光探针JC-1观察氧化应激对精子线粒体膜电位的变化。方法:用FeSO4/H2O2体系诱导精子氧化损伤模型,利用新型荧光探针JC-1标记精子线粒体,在FACS Calibur流式细胞仪上检测JC-1荧光强度的变化。结果:正常精子线粒体维持较高的膜电位,JC-1在线粒体内形成聚合物,红色荧光占主导地位。FeSO4/H2O2体系导致线粒体膜电位下降,JC-1聚合物分解成单体,红色荧光强度减弱。结论:氧化应激导致精子线粒体膜电位下降;JC-1结合流式细胞仪是一种理想的检测线粒体膜电位的手段。

不同成熟期人卵母细胞慢速冷冻的初步研究

目的：研究不同成熟期人卵母细胞冻融后超微结构的改变和冷冻保护剂浓度对卵母细胞发育潜能的影响。方法：收集多囊卵巢综合征患者辅助生殖周期获得的卵母细胞进行慢速冷冻。根据冷冻保护剂中蔗糖浓度的不同(0.1，0.2或0.3 mol/L)对不同成熟期的卵母细胞分组，进行发育潜能的实验研究，同时收集部分未冷冻的和冻融后的卵母细胞进行超微结构观察。并将部分冷冻卵母细胞获得的胚胎用于临床患者。结果：0.2mol/L 的蔗糖浓度较0.1mol/L 更有利于各成熟期卵母细胞的冷冻，成熟卵母细胞用0.3mol/L 的蔗糖冷冻效果较好，经体外受精得到的胚胎移植后，获得2例临床妊娠。电镜结果显示，未成熟卵母细胞卵浆内的线粒体和泡状物较成熟卵母细胞少，且分布没有规律；冷冻对成熟卵母细胞超微结构的影响较未成熟卵母细胞大。结论：适当提高冷冻保护剂中蔗糖浓度，有利于各成熟期卵母细胞的冷冻保存，0.3mol/L 浓度的蔗糖冷冻保护剂是成熟卵母细胞冷冻的最佳浓度。慢速冷冻可以引起卵母细胞超微结构的改变。

体外受精周期中来源于单原核受精卵胚胎性染色体分析

目的:分析常规体外受精和单精子显微注射周期中来源于单原核受精卵胚胎性染色体的异常率。方法:应用FITCT、exas red标记的X/Y染色体着丝粒部位α卫星重复序列探针,对常规体外受精和单精子显微注射周期中来源于单原核受精卵的胚胎进行荧光原位杂交(fluorescent in situ hybridization,FISH),分析其性染色体的异常率和性染色体类型。结果:共分析来自常规体外受精和单精子显微注射周期中来源于单原核受精卵的胚胎111个。总胚胎固定率为92.80%,胚胎杂交率为95.15%。有杂交信号的常规体外受精后单原核受精卵发育来的胚胎中,胚胎性染色体二体率为54.35%,单体率为23.91%,嵌合体率为21.74%。有杂交信号的单精子显微注射后单原核受精卵发育来的胚胎中,胚胎性染色体二体率为34.62%,单体率为34.62%,嵌合体率为30.77%。结论:常规体外受精和单精子显微注射周期中来源于单原核受精卵的胚胎有高于正常的性染色体异常率,不利于进行胚胎移植;前者性染色体二体率显著高于后者。

不同冷冻保护剂对人类精子冷冻复苏后活动能力的影响

目的:比较添加葡萄糖或蔗糖的冷冻保护剂对人类精子冷冻复苏后活动力的影响。方法:将50例志愿者的精液标本分别采用添加葡萄糖或蔗糖的保护剂冷冻,比较精子复苏后的活动力。结果:冷冻前,前向活动精子百分率为(58.4±5.7)%,活动率为(63.4±6.1)%,采用添加葡萄糖的冷冻保护剂冷冻复苏后的前向活动精子百分率为(43.8±7.6)%,活动率为(48.4±7.6)%;采用添加蔗糖的冷冻保护剂冷冻复苏后的前向活动精子百分率为(42.6±8.9)%,活动率为(48.0±8.5)%。冷冻前后精子的前向活动百分率和总活动率差异有统计学意义(P<0.01),采用2种不同的冷冻保护剂冷冻复苏后的精子前向活动百分率和总活动率没有统计学差异(P>0.05)。结论:冷冻对精子活动力损伤明显,添加蔗糖作为精子冷冻的保护剂是可行的。

未成熟卵母细胞评分系统对人类未成熟卵体外成熟及发育潜能的评价

目的:建立未成熟卵母细胞评分系统,并评价其对人类未成熟卵体外成熟及发育潜能的预测作用。方法:将未成熟卵母细胞取出体外,根据卵母细胞形态及其周围颗粒细胞形态、分布进行评分,然后分别进行成熟培养和体外受精,再将卵母细胞评分与其成熟率、受精率、优质胚胎率,以及相应卵母细胞的颗粒细胞凋亡情况进行比较。结果:随着卵母细胞评分的降低,卵子的成熟率、受精率、卵裂率及优质胚胎率均下降,而颗粒细胞的凋亡率升高。结论:本研究所设计的未成熟卵母细胞评分系统能够较准确地反映卵母细胞的发育潜能,具有一定的应用价值。

人类胚胎冷冻复苏影响因素分析

目的:观察患者年龄、促排卵方案、受精方式、胚龄及冻胚移植周期方案对于冷冻胚胎复苏和移植后临床妊娠的影响。方法:慢速冷冻体外受精周期中剩余的质量良好的胚胎,随后于不同周期用快速融解法复苏后进行移植。根据上述因素将患者分组,对复苏后胚胎质量和临床妊娠率进行比较。结果:126例患者中,融解胚胎总数445个,复苏后成活368个(82.7%)。获得临床妊娠48例(38.1%)。年龄对冷冻胚胎复苏率和移植后临床妊娠率的影响比较明显。随着年龄增加,冻胚移植的妊娠率下降,尤其是在35岁以后,下降更为明显。促排卵方案、受精方式、冷冻时胚胎的培养天数和移植周期方案均对冷冻胚胎复苏率和移植后临床妊娠率没有明显影响。结论:在诸多因素中,只有患者年龄会影响冻胚移植的结果。

体外受精后多原核受精卵的移植价值

目的:对体外受精周期中产生多原核受精卵运用荧光原位杂交技术(FISH)进行非整倍体率检测,分析其移植价值。方法:应用FITC、Texas red标记的X/Y双色染色体着丝粒部位探针对体外受精(IVF)和单精子显微注射(ICSI)周期中的三原核受精卵(3PN)进行荧光原位杂交和分析。结果:分析有杂交信号的3PN卵子68个,IVF后3PN的三倍体率为92.31%,二倍体率为3.85%,单倍体率为3.85%;共存在3种三倍体核型:XXX、XXY、XYY。ICSI后3PN 的三倍体率为70.83%,二倍体率为25%,单倍体率为4.17%;共存在2种三倍体核型:XXX、XXY。结论:IVF后3PN卵子中多余的原核多为精子来源,没有移植价值;ICSI后3PN中多余的原核非精子来源,ICSI后3PN中二倍体率与IVF相比显著增高,在患者ICSI后无2PN卵子时可考虑行植入前遗传学诊断。

冷冻保存对人始基卵泡中颗粒细胞的影响

目的:探讨冷冻保存对人始基卵泡中颗粒细胞的形态及存活率的影响。方法:程序冷冻法保存人卵巢组织,采用常规组织学检测冷冻前后卵泡中颗粒细胞形态,并采用胶原酶消化联合镜下机械分离卵巢组织中的始基卵泡,采用双荧光标记,检测冷冻前后人卵巢组织分离始基卵泡中颗粒细胞的存活比例。结果:形态学检测发现,冷冻前卵巢组织中颗粒细胞发生损伤的始基卵泡占12.4%,卵母细胞损伤20.6%;冷冻后两者的比例分别为23.3%与24.4%。荧光标记的冷冻前卵巢组织中颗粒细胞存活的始基卵泡占72.7%,<50%颗粒细胞存活的卵泡仅占3.6%,卵母细胞存活率为85.5%;冷冻组中颗粒细胞存活的始基卵泡占79.5%,<50%颗粒细胞存活的卵泡仅占2.5%,卵母细胞存活率达86.1%。结论:冷冻复温的过程主要破坏卵泡中的颗粒细胞,而对卵母细胞的损伤很小。

多囊卵巢综合征患者未成熟卵母细胞体外成熟培养后生长分化因子-9的表达

目的:探讨生长分化因子-9(GDF-9)与多囊卵巢综合征(PCOS)患者卵母细胞体外成熟及胚胎发育的关系。方法:采集PCOS患者自然周期月经未成熟卵母细胞,经体外成熟培养(IVM)后,免疫组化比较不同成熟度的卵母细胞及其周围颗粒细胞中GDF-9的表达差异;同时收集行IVM后受精的胚胎以及同期因输卵管因素行常规体外受精-胚胎移植(IVF-ET)的胚胎及未受精的卵子,免疫组化比较这些胚胎中GDF-9表达的差异。结果:①IVM后共获弃卵70个,其中MII期21个、MI期26个、GV期23个,染色结果显示GDF-9的表达在培养后成熟的卵母细胞MII期中表达较MI期、GV期增强,差异有显著性;而MI期、GV期两组间表达无差异;②共对343个卵子的颗粒细胞进行了免疫组化染色,MII期、MI期、GV期、退变卵周围颗粒细胞中GDF-9表达的阳性率随着卵母细胞成熟度的降低,逐渐降低,退变卵中最低。③共获IVF弃胚胎75个,GDF-9在各期胚胎中的表达均为阳性,且各期胚胎间的表达水平无差异。④对62个IVF中未受精的弃卵进行了染色,结果显示GDF-9的表达水平较IVF胚胎降低,差异有显著性。⑤共获IVM弃胚胎57个,各期胚胎间GDF-9的表达也无显著性差异,但IVF组胚胎中GDF-9的表达水平较IVM组高,差异有显著性。结论:GDF-9可能与人类卵母细胞的体外成熟及胚胎发育有关。

人卵巢组织冷冻保存的实验研究

目的 :探讨冷冻保存对人卵巢皮质内各级卵泡形态及对组织体外培养的影响。方法 :取手术切除的 30例患者的卵巢皮质 ,放入二甲基亚砜配制的冷冻保护液中 ,应用程序冷冻法保存于液氮内。冷冻前后取部分卵巢皮质行组织学检测 ;同时培养部分组织块观察上清中雌二醇分泌的变化。结果 :冷冻后存活的始基卵泡 ,与新鲜组比较无显著改变 (P >0 .0 5 ) ,初级卵泡的存活率显著下降 (P <0 .0 5 ) ;而冷冻保存不会明显降低始基卵泡与初级卵泡总的存活率 (P >0 .0 5 )。复温后卵巢组织中仅见 1枚形态正常的次级卵泡。冷冻后培养上清中雌二醇水平与新鲜组比较无明显差异 (P >0 .0 5 )。结论 :程序冷冻法可以较好地保存人卵巢皮质内的始基卵泡 ,且不影响冷冻后卵巢组织的激素分泌。

促性腺激素释放激素用量对体外受精-胚胎移植影响的探讨

目的:探讨达必佳不同用量对体外受精-胚胎移植(invitrofertilizationandembryotrans-fer,IVF-ET)的影响。方法:将准备长方案促排卵行IVF-ET的214例患者随机分为2组,Ⅰ组每天肌肉注射达必佳0.1mg,Ⅱ组每天肌肉注射达必佳0.05mg,观察两组中促性腺激素用量情况、HCG日子宫内膜厚度、激素水平、获卵数、受精数和妊娠率。结果:Ⅰ组与Ⅱ组患者年龄、不孕年限、注射绒毛膜促性腺激素(HCG)日子宫内膜厚度、激素水平、受精率、妊娠率无统计学意义,但Ⅱ组促性腺激素用量少,获卵数多。结论:达必佳减量后仍然可以达到充分的垂体抑制,减少促性腺激素的用量,不影响IVF-ET的成功率。

荧光原位杂交检测精子上游时间对XY精子比例的影响

目的：运用荧光原位杂交（fluorescent in situ hybridization，FISH）技术检测精子改良上游过程中，不同上游时间对含X／Y精子的分离作用，探讨较长上游时间跨度（0～150分钟）对上游后XY精子比例的影响。方法：分析从志愿者取得的正常精液标本10份，每份均进行精子不同时间分批改良上游、固定和荧光原位杂交分析，计数分析X精子占XY精子总数的比例。结果：杂交区域内精子总杂交率为98．33％。未上游时X精子比例为平均为50．03％。通过SPSS方差分析：分时间段检测的X精子占XY精子总数的比例与未上游时差异无显著性（P〉0．05），不同组间差异无显著性（P均〉0．05）。结论：改良上游法对XY精子的分离没有显著效果，没有直接证据表明人工授精和体外受精．胚胎移植过程中精子的上游处理会影响到出生婴儿的性别比例。

卵母细胞发育潜能与颗粒细胞凋亡关系的初步研究

目的探讨卵母细胞发育潜能与颗粒细胞凋亡之间的关系.方法将卵母细胞在体外培养28～30 h后,取其颗粒细胞,采用TUNEL法进行凋亡率的分析,并与卵子的成熟情况和卵子的评分及形成胚胎结果进行对照. 结果经培养后,随着卵母细胞成熟度的降低,凋亡率升高;而且随着卵母细胞评分和发育潜能的降低,颗粒细胞凋亡率逐渐升高.结论卵子发育潜能与颗粒细胞凋亡密切相关,通过测定颗粒细胞的凋亡率可预测未成熟卵母细胞的发育潜能.

补肾活血中药对弱精子症大鼠抗氧化作用的研究

目的研究补肾活血中药对大鼠附睾精子的抗氧化作用。方法取40只大鼠随机分组。模型组给予200 mg/kg奥硝唑灌胃,正常对照组给予0.5%羧甲基纤维素钠灌胃,中药组给予补肾活血中药灌胃。3周后检测大鼠附睾精子的活动率、附睾匀浆MDA、SOD、GSH-PX、乳酸脱氢酶、α-葡糖苷酶、果糖浓度的变化。结果奥硝唑组大鼠附睾精子活动率下降,附睾匀浆MDA浓度升高,SOD、GSH-Px浓度明显低于对照组(P<0.05),LDH、α-葡糖苷酶浓度明显低于对照组(P<0.05)。中药高、低剂量组精子活动率和MDA浓度与正常组比较,均无明显差异。高、低剂量中药组SOD浓度与奥硝唑组比较,均有显著性差异(P<0.01)。高剂量中药组GSH-Px浓度与奥硝唑组比较,有显著性差异(P<0.05)。高剂量组中药组LDH、α-葡糖苷酶含量与奥硝唑组比较显著升高(P<0.05)。结论奥硝唑灌胃能够成功制作弱精子症大鼠模型,对附睾精子的氧化损伤是其中的机制之一。补肾活血中药通过增强体内抗氧化酶活性,增强附睾功能,从而发挥抗氧化作用,保护附睾精子免受奥硝唑所致的氧化损伤。

混匀上游法人工授精治疗抗精子抗体阳性不孕症患者的效果

目的研究对抗精子抗体阳性患者进行混匀上游法人工授精的治疗效果及影响各种人工授精结果的因素。方法通过检测实施人工授精患者夫妇双方抗精子抗体,并对其不孕年限、是否原发、子宫内膜厚度和类型等进行统计分析,结合用混匀上游法处理精液后实施宫腔内人工授精患者的人工授精结局,研究宫腔内人工授精对抗精子抗体阳性患者的治疗效果和各种影响人工授精结局的因素。结果统计人工授精治疗163个周期,妊娠39例,总周期妊娠率为23.93%。在抗精子抗体阳性夫妇和抗精子抗体全阴性夫妇之间妊娠率没有显著性差异。结论混匀上游法洗涤精子后行宫腔内人工授精能去除抗精子抗体的影响。对至少一侧输卵管通畅患者实施的宫腔内人工授精成功率与不孕年限、是否为原发不孕无关。