银杏叶提取物对大鼠肝星状细胞细胞因子和胶原合成及细胞增殖的影响

目的研究银杏叶提取物抗肝纤维化的可能机理。方法用不同浓度(0,1,10,100,500μg·ml-1)的银杏叶提取物处理HSC-T6细胞24h和48h,采用RT-PCR法检测各组细胞转化生长因子β1(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原mRNA的表达;应用流式细胞仪检测细胞增殖周期的变化。结果银杏叶提取物在10,100,500μg·ml-1浓度能明显抑制TGF-β1、CTGF、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原mRNA的表达(P<0.01或P<0.05),在一定范围内呈剂量和时间依赖性,影响HSC-T6的细胞周期,降低其增殖活性。结论银杏叶提取物可明显抑制HSC-T6细胞的增殖,抑制细胞因子及细胞外基质成分基因的表达,由此发挥抗肝纤维化的作用。

熊去氧胆酸选择性诱导人肝肿瘤细胞凋亡及抑制增殖的实验研究

目的: 探讨熊去氧胆酸 (UDCA)对肝肿瘤细胞株诱导凋亡及抑制增殖的作用和机制。方法:用四氮唑蓝法、流式细胞术、TUNEL法、Wright Giemsa染色法、电镜及免疫细胞化学等方法,观察UDCA对肝肿瘤细胞株HepG2,BEL7402和正常人肝细胞株L 02的生长活力、细胞凋亡、细胞周期及Bax/bcl 2表达的影响。结果: UDCA对HepG2,BEL7402细胞株生长的抑制作用随药物浓度增高而增强(r2 =0. 96, P<0. 01;r2 =0. 97, P<0. 01;48h)。UDCA对HepG2及BEL7402的IC50分别为0. 92 mmol·L-1, 0. 86 mmol·L-1。UDCA(1. 0mmol·L-1 )对HepG2及BEL7402的凋亡率分别为(42±6) %及 (44±4) %,明显高于对照组(P<0. 01),并且阻滞细胞周期于S期。以UDCA(0. 8mmol·L-1 )处理HepG2 后bcl 2 表达由(24. 3±2. 4) %降低为 (10. 1±1. 6 ) %,Bax表达由(43±5) %升高为 (59±3) % (P<0. 01 );处理BEL7402细胞后bcl 2表达由 (21. 6±1. 8) %降为(11. 6±2. 1) %,Bax表达由 ( 44±4 ) %升高为(59±3) % (P<0. 01)。UDCA对L 02细胞无明显作用。结论: UDCA对HepG2, BEL7402细胞株有显著的抑制增殖及诱导凋亡作用,它可能与UDCA阻滞细胞周期、降低bcl 2和提升Bax的表达有关。

乙型肝炎病毒cccDNA定量与乙型肝炎临床及病理关系

目的探讨慢性乙型肝炎(CHB)肝组织HBVcccDNA定量与乙型肝炎的关系。方法分别采用荧光定量PCR、酶联免疫吸附分析法(ELISA)检测48例CHB肝组织HBV cccDNA定量、肝组织和血清HBV DNA定量、乙型肝炎病毒标志物。同时用链霉菌抗生素蛋白-过氧化物酶连接法(SP)检测肝细胞中HBcAg表达。分析肝组织HBV cccDNA与组织和血清HBV DNA、HBeAg、肝细胞内HBcAg水平及肝脏炎症活动度的关系。结果1.肝组织HBV cccDNA定量与组织和血清HBV DNA定量呈正相关(r=0.837,P<0.001;r=0.627,P<0.005);2.肝组织HBV cccDNA定量与肝细胞内HBcAg半定量呈正相关(r=0.618,P<0.005);3.肝组织HBV cccDNA定量与肝脏炎症活动度无明显相关(P>0.05):4.HBeAg阳性较抗-HBe阳性患者肝组织HBV cccDNA定量、肝组织和血清HBV DNA定量高(P<0.05)。结论荧光定量PCR法检测肝组织HBV cccDNA定量是评价HBV复制最直接可靠的指标,在CHB的诊断和抗病毒治疗中有重要意义。但与肝组织炎症无明显相关。

熊去氧胆酸选择性诱导人肝肿瘤细胞凋亡及抑制增殖的实验研究

目的探讨熊去氧胆酸(UDCA)对肝肿瘤细胞株诱导凋亡及抑制增殖的作用和机制。方法用四氮唑蓝法、流式细胞术、脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法、Wright-Giemsa染色法、电镜及免疫细胞化学等方法,观察UDCA对肝肿瘤细胞株HepG2、BEL7402和正常人肝细胞株L-02的生长活力、细胞凋亡、细胞周期及Bax/bcl-2基因表达的影响。结果UDCA对HepG2、BEL7402细胞株具有显著地抑制生长、诱导凋亡、阻滞细胞周期于S期、降低bcl-2和提升Bax表达的作用。UDCA对HepG2及BEL7402的IC50分别为0.92,0.86mmol/L。UDCA(1.0mmol/L)对HepG2及BEL7402的凋亡率分别为42%及44%,明显高于对照组(P<0.01)。UDCA对L-02细胞无明显作用。结论UDCA对HepG2、BEL7402细胞株有显著地抑制增殖及诱导凋亡作用,该作用可能与UDCA阻滞细胞周期、降低bcl-2和提升Bax的表达有关。

肝素抗肝纤维化作用机制及临床疗效评价

探讨肝素对慢性乙型肝炎患者肝纤维化的影响及作用机制。将63例慢性乙型肝炎患者随机分为A(26例)、B(37例)两组,分别给予常规药物治疗和肝素治疗。治疗前后分别检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)、总胆红素(TB il)、透明质酸(HA)、Ⅳ型胶原(CⅣ)和转化生长因子-β1(TGF-β1)、血管性假性血友病因子(vWF)水平。B组中6例分别于治疗前后行肝活检术。治疗后A、B两组的ALT、TB il水平均显著下降。B组治疗后HA、CⅣ、TGF-β1及vWF水平均显著下降,而A组HA、CⅣ水平反较治疗前升高,TGF-β1及vWF水平无明显变化。B组治疗后肝组织原纤维增生减轻,肝星状细胞恢复正常。肝素通过抑制肝星状细胞活化和改善肝脏微循环达到抗纤维化的目的。

肝素对肝纤维化大鼠模型作用的疗效观察

目的建立肝纤维化大鼠模型,对肝素、干扰素和复方丹参的抗肝纤维的疗效进行评价。方法应用CCl4建立肝纤维化大鼠模型,分别给予不同剂量的肝素、干扰素和丹参进行抗肝纤维化干预治疗。8周后处死大鼠,留取血清检测HA、IV-C、LN、PCⅢ等,留取肝组织,行HE和Massson三色染色。结果肝素治疗组、复方丹参治疗组的各项血清学指标水平与肝纤维化大鼠造模组相比均有显著性差异。α干扰素治疗组与肝纤维化大鼠造模组相比,HA和PCⅢ水平有显著性下降,ⅣC、LN水平无显著性差异。肝素治疗组的HA、ⅣC、LN、PCⅢ水平均较复方丹参治疗组、α干扰素治疗组为低。胶原纤维染色显示,肝素可明显抑制肝纤维化的发展,作用效果优于干扰素和复方丹参。结论肝素、α干扰素、丹参具有抗肝纤维化作用,但以肝素的作用效果为最强。

外周血GGTmRNA-H亚型表达与原发性肝癌转移的关系

目的探索外周血GGTmRNA-H亚型表达与肝癌血源性播散的关系。方法以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,检测原发性肝癌(HCC)、肝转移癌、良性肝病患者及健康者外周血γ-谷氨酰转移酶mRNA-H亚型(GGTmRNA-H)。结果38例HCC患者中有16例检出GGTmRNA-H,阳性率为42.1%。肝转移癌、良性肝病及健康者均为阴性。外周血GGTmRNA-H阳性率与临床分期、肝内转移、门静脉癌栓和远处转移密切相关。结论外周血GGTmRNA-H是反映HCC患者有无血源性播散的重要标志,并对AFP阴性或低值的HCC患者有补充诊断的作用。

原代培养大鼠肝星状细胞、枯否氏细胞及肝素的干预作用

目的同步分离培养大鼠肝星状细胞及枯否细胞,应用肝素进行干预,观察肝素在体外对肝星状细胞及枯否细胞的影响。方法应用Nycodenz一步密度梯度离心法一步分离肝纤维化大鼠的肝星状细胞及枯否细胞。分别将不同浓度的肝素加入肝星状细胞和枯否细胞培养板中,应用MTT比色法检测各组肝星状细胞和枯否细胞的增殖状况,免疫细胞化学检测各组肝星状细胞中α平滑肌肌动蛋白(αSMA)、转化生长因子β1(TGFβ1)、层连蛋白(LN)的表达。结果加入高浓度肝素、低浓度肝素及未用药的肝星状细胞0D值分别为0.0626±0.0137、0.0746±0.0131和0.1106±0.0198。加入高浓度肝素、低浓度肝素及未用药的枯否氏细胞0D值分别为0.1340±0.0270、0.1540±0.270和0.2120±0.0444。二肝素组肝星状细胞、枯否氏细胞0D值均显著低于未加药组。高浓度肝素组肝星状细胞及枯否氏细胞OD值较低浓度肝素组为低,但无显著性差异。加入肝素的肝星状细胞αSMA、TGFβ1,LN的表达较未用药的肝星状细胞为弱。高浓度肝素组αSMA、TGFβ1LN的表达较低浓度肝素组弱。结论肝素可抑制肝星状细胞的增殖、活化及胶原的分泌,且对枯否氏细胞也具有抑制作用。