成骨生长肽免疫检测方法的研究

目的:建立一种快速而准确的检测血清成骨生长肽浓度的方法。方法:制备具有较高效价的成骨生长肽抗体,通过竞争性酶联免疫吸附法及其改进方法建立检测成骨生长肽浓度的标准曲线。结果:亲和纯化的抗体比盐析抗体的标准曲线更好,改进的竞争性酶联免疫吸附法方法比普通的竞争性酶联免疫吸附法方法的检测灵敏度高一个数量级,可满足临床检测血清成骨生长肽浓度灵敏度的要求。结论:改进的竞争性酶联免疫吸附法可以为临床研究提供可靠而灵敏地检测血清成骨生长肽含量的方法。

猪抗病毒特异性免疫调节因子的制备及其相关性质的分析

通过获取抗人乙肝病毒特异性免疫调节因子并对其有关活性的研究,进一步探索在家畜疫苗接种过程中低分子量抗病毒免疫调节因子的特异性功能基础及免疫效应机制。用乙肝疫苗接种幼猪,致其产生特异性免疫应答,然后从其脾脏淋巴细胞中制备抗病毒免疫活性调节因子进行理化鉴定。MTT法活性检测和氨基酸组分及其含量的对比分析结果表明,制备的免疫调节因子为低分子量多肽与核酸复合物;具有特异性粘附抑制活性;在氨基酸组成上与非特异性免疫调节因子相同,但在所含氨基酸的百分含量上却有一定差异。检测结果提示,这种差异是决定其抗病毒特异性功能的化学基础。

成骨生长肽对大鼠骨髓基质细胞增殖和成骨分化的作用

目的:观察成骨生长肽诱导体外培养的大鼠骨髓基质细胞增殖及向成骨分化的作用。方法:取6周龄SD大鼠,贴壁法分离培养骨髓基质细胞,在不同浓度成骨生长肽的诱导下,观察细胞形态变化,绘制骨髓基质细胞生长曲线,碱性磷酸酶和钙结节组织化学染色。结果:成骨生长肽对骨髓基质细胞增殖和成骨分化的作用呈剂量依赖性:成骨生长肽浓度在10-10及10-11mol/L时促进骨髓基质细胞增殖,而在10-8及10-9mol/L时对骨髓基质细胞的增殖略有抑制作用;成骨生长肽浓度在10-10及10-11mol/L时骨髓基质细胞碱性磷酸酶染色基本呈阴性,与对照组相比差异无统计学意义,而在10-8及10-9mol/L浓度下可以显著提高骨髓基质细胞碱性磷酸酶染色的阳性率。结论:成骨生长肽可以明显促进大鼠骨髓基质细胞增殖及向成骨细胞分化,其促成骨活性具有显著的浓度依赖性。

成骨生长肽诱导的大鼠骨髓基质细胞基因表达谱变化中骨折愈合相关基因的筛选

目的基因表达谱芯片筛选成骨生长肽诱导大鼠骨髓基质细胞骨折愈合相关基因的表达变化及其促进骨折愈合的机制。方法密度梯度离心法分离大鼠骨髓基质细胞,以10-9mol/L的成骨生长肽诱导24h的第三代大鼠骨髓基质细胞作为实验组,以第三代大鼠骨髓基质细胞为对照组,提取诱导组与实验组总RNA,分别用cy5和cy3探针逆转录标记,与博奥27KRat Genome Array芯片杂交,荧光扫描分析。结果芯片结果显示大鼠骨髓基质细胞经成骨生长肽刺激24h后共有145个差异表达的基因,其中91个上调表达的基因,54个下调表达的基因。差异表达的基因中可能与骨折愈合相关的基因共有27个:包括4个血管发生相关的基因、9个骨代谢相关的基因、14个炎症与免疫相关的基因。结论基因表达谱芯片有助于研究成骨生长肽诱导大鼠骨髓基质细胞促进骨折愈合的分子机制。

羊骨髓来源的低分子活性物质对大鼠骨髓基质细胞成骨分化的作用

目的:观察羊骨髓来源的低分子活性物质诱导体外培养的大鼠骨髓基质细胞成骨分化的作用。方法:取新鲜的羊腿骨提取羊骨髓来源的低分子活性物质。取6周龄SD大鼠,密度梯度离心法分离、培养大鼠骨髓基质细胞,第三代大鼠骨髓基质细胞在羊骨髓来源的低分子活性物质的诱导培养下,检测大鼠骨髓基质细胞碱性磷酸酶活性。结果:羊骨髓来源的低分子活性物质可以显著提高大鼠骨髓基质细胞的碱性磷酸酶活性。结论:羊骨髓来源的低分子活性物质可以明显促进大鼠骨髓基质细胞的成骨分化。