小鼠轮状病毒EW株VP7基因的克隆及其在重组腺病毒中的表达

目的:构建表达小鼠轮状病毒(EDIM)EW株VP7基因的重组腺病毒,以在小鼠模型上研究轮状病毒的免疫保护机制。方法:用RT-PCR方法扩增EDIMVP7全长cDNA并进行基因序列分析,将所得的VP7基因片段插入腺病毒穿梭质粒pShuttle-CMV,获得重组质粒pShuttleCMV-EVP7,将该质粒与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转化大肠杆菌BJ5183获得重组腺病毒质粒pAdCMV-EVP7,将该质粒线性化后转染293细胞包装重组腺病毒rvAdEVP7。以rvAdEVP7感染293细胞,并分别应用电子显微镜、PCR、RT-PCR和Westernblot等方法观察rvAdEVP7的形态、VP7基因整合、遗传稳定性、VP7基因在细胞内转录及表达等有关生物学特性。结果:获得了小鼠轮状病毒的全长cDNA,重组腺病毒rvAdEVP7具有典型的腺病毒形态,PCR、RT-PCR和Westernblot等分子生物学方法分析显示:rvAdEVP7中确有特异性的VP7基因稳定整合;有较好的遗传稳定性;感染293细胞后能有效转录;可表达轮状病毒主要结构蛋白VP7。结论:成功构建含VP7基因的重组腺病毒rvAdEVP7,为进一步研究轮状病毒的免疫保护机制打下了基础。

从基因角度认识H7N9禽流感病毒

2013年3月底我国首次报道了感染人的H7N9禽流感病毒,这是一个单纯禽源病毒的三元重组体,其HA和PB2蛋白已经出现哺乳动物适应性突变。本文从基因角度对H7N9禽流感病毒的来源、基因重组的模式以及其感染人的原因作一介绍。

表达轮状病毒抗原的重组腺病毒在恒河猴中的免疫反应性及安全性的初步研究

目的 研究表达轮状病毒主要抗原VP7、VP6的非复制型重组腺病毒在恒河猴模型上的免疫反应性和安全性 ,为轮状病毒基因工程疫苗的进一步研究奠定基础。方法 将重组腺病毒通过滴鼻或灌胃途径免疫恒河猴 ,用酶联免疫吸附实验 (ELISA)检测恒河猴血清中轮状病毒特异性抗体IgG ,并监测免疫前后各组恒河猴血、尿常规及一系列反映肝功能和肾功能的生化指标。在整个实验过程中 ,常规监测恒河猴的体温、体重及临床症状。结果 重组腺病毒通过滴鼻或灌胃途径免疫均能诱导恒河猴产生针对轮状病毒抗原的特异性血清IgG ;在重组腺病毒免疫整个过程中 ,各免疫组恒河猴无不良反应 ,体温基本正常 ,体重增长正常 ;和正常对照组相比 ,免疫后各免疫组恒河猴血、尿常规及肝功能、肾功能无显著性变化。结论 表达轮状病毒抗原的重组腺病毒免疫恒河猴能产生针对轮状病毒的特异性免疫反应 ,并且不影响其正常的生长发育及健康状况 。

大肠埃希菌脂多糖诱导树突状细胞杀灭幽门螺杆菌作用的研究

目的探讨大肠埃希菌(E.coli)脂多糖(LPS)诱导树突状细胞(DCs)细胞系DC2.4吞噬并杀灭幽门螺杆菌(H.pylori)的可行性及其作用机制。方法将DC2.4分为对照组、E.coli LPS处理2h组和处理24h组;以流式细胞术(FCS)检测不同组DC2.4对H.pylori的吞噬量以及吞噬-溶酶体成熟标志蛋白溶酶体相关膜蛋白-1(LAMP-1)的表达量;以RT-qPCR检测相应组DC2.4中TLR4的表达。结果 DC2.4经E.coli LPS处理后对H.pylori的吞噬量明显增加(P=0.003),DC2.4吞噬H.pylori后吞噬-溶酶体成熟标志蛋白LAMP-1的表达量也明显增加(P=0.02);E.coli LPS处理的DC2.4吞噬H.pylori时TLR4的表达量增加(P=0.009)。结论 E.coli LPS可以诱导DCs对H.pylori的吞噬作用以及吞噬-溶酶体的成熟,有利于DCs对H.pylori的杀灭。E.coli LPS诱导杀灭作用的机制可能是解除了H.pylori对TLR4信号通路的抑制,为有效清除体内H.pylori感染提供了参考方向。

生物大分子的分子动力学模拟过程在百万亿次集群上的部署优化

分子动力学模拟作为研究生物大分子功能和性质的新工具,已广泛应用于蛋白质和核酸等物质的分子动态学行为研究,但目前常规分子动力学模拟时间尺度较小,不能达到生物大分子分子动态行为的有效取样范围。温度副本交换分子动力学可同时运行多个独立模拟,明显提高模拟时间的可及尺度,但需要千核以至万核的计算资源,目前已发表的相关文献其模拟体系使用的计算资源均较小。本文利用国家超算济南中心的神威4000A百万亿次集群,首先进行单副本的分子动力学模拟,然后利用外切纤维素酶催化结构域的模拟体系(约5万原子)进行多达128个温度副本的分子动力学模拟,一次模拟任务最多成功利用6 720个CPU核心同时进行计算,最高总运算速度累计达到2 274 ns/d,这为分子动力学模拟利用上万核心进行计算提供了新的思路。

miRNA与病毒感染的研究进展

miRNAs是一类小的非编码RNAs，可以引发内在的RNA干扰功能。miRNAs最初在Caenorhabits elegan线虫中发现，最近在病毒中也发现有miRNA的存在，很多研究认为病毒编码的miRNAs可能与病毒潜伏感染有关，也可能在病毒与宿主免疫系统相互作用中发挥功能。对miRNAs的功能研究将会为治疗病毒引起的疾病提供新的方法，为癌症的发生发展提供分子生物学的证据。本文就miRNA的生物学特性，作用机制，以及目前发现的一些病毒miRNA及病毒miRNA与细胞miRNA的关系进行了阐述。

SCID-HuIC小鼠模型的建立及在rAd5HPV16L1-E7疫苗中的应用

目的 研究脐血移植建立SCID HuIC小鼠嵌合动物模型以及在HPV16L1 E7重组腺病毒中的应用。方法 (1)采用尾静脉注射法给实验组注射脐血单个核细胞悬液 ,对照组注射RPMI16 4 0培养液 ;8周末检测血中人IgG抗体水平及人CD4 5、CD3、CD19;(2 )将SCID HuIC小鼠和SCID小鼠 ,分别经腹腔注射和滴鼻途径给予rAd5HPV16L1 E7重组病毒 ,于第 4周末取血检测rAd5HPV16L1 E7重组病毒特异性IgG抗体、脾细胞培养液中IFN γ的含量及T 淋巴细胞增殖。结果 (1)实验组中人IgG抗体阳性数为 10 15 ,含量为 (0 16 7± 0 0 89) ;人CD4 5为 (9 39± 4 2 1) ,CD3为 (3 2 5± 3 99) ;CD19为 (1 6 9± 0 75 ) ,对照组未测出人IgG抗体以及CD4 5、CD3、CD19;(2 )腹腔注射组和滴鼻组病毒特异性IgG抗体均为 10 0 %阳性 ;实验组培养液中IFN γ的含量和T 淋巴细胞增殖实验病毒特异性蛋白刺激组均高于非刺激组 (P <0 0 5 ) ;对照组SCID小鼠rAd5HPV16L1 E7重组病毒特异性IgG抗体、T 淋巴细胞增殖和培养液中人IFN γ均为阴性。结论 (1)采用人脐血移植SCID小鼠建立SCID HuIC小鼠嵌合动物模型是可行的 ;(2 )人新鲜脐血移植重建的SCID HuIC小鼠具有对rAd5HPV16L1 E7重组病毒的免疫应答能力 ,而未移植者 (对照组 )则对rAd5HPV16L1 E7重?