烧伤变性脱细胞真皮基质可再生利用的实验研究

目的探讨烧伤变性脱细胞真皮基质（DADM）作为真皮替代物用于创面修复的可行性。方法（1）取12只Wistar大鼠，其中9只背部造成深Ⅱ度烫伤（以下称烧伤）创面，分别于伤后1、2、3d（每时相点3只）取创面全厚皮肤，用2．5g／L胰蛋白酶-体积分数0．5％Triton X-100行脱细胞处理制成DADM，相应称为DADM-1d、DADM-2d、DADM-3d；余下3只大鼠不致伤，同法制备ADM作为对照。对ADM和各DADM行大体、组织学观察及微生物学和生物力学检测（极限抗拉强度、最大拉力、断裂伸长率、应力-应变关系）。（2）另取64只Wistar大鼠，按随机数字表法分为ADM组、DADM．1d组、DADM-2d组、DADM-3d组，每组16只。于各大鼠背部制作-2．0cm×1．8cm大小皮瓣，将前述ADM和DADM-1d、DADM-2d、DADM-3d切制成1．8cm×1．5cm大小后分别埋植于皮瓣下。术后1、3、5、9周，每组每时相点取4只大鼠，肉眼观察创面愈合情况及埋植物的变化，并对埋植物行组织学观察。对数据行单因素方差分析及t检验。结果（1）新鲜制备的各DADM呈乳白色，质地柔软有弹性，韧性较ADM弱。光学显微镜下见ADM和各DADM中均无上皮结构和细胞存在，DADM胶原纤维增粗程度不均匀，排列紊乱，嗜伊红性增强。各DADM微生物学检测结果均为阴性。DADM-1d、DADM-2d、DADM-3d之间极限抗拉强度、最大拉力、断裂伸长率和应力-应变关系比较，差异均无统计学意义（F值为0．088-3．591，P值均大于0．05）；其中DADM-3d此4项指标值最高，分别为（13．0±2．4）MPa、（61±4）N、（173±7）％、（45．7±2．0）％。ADM此4项指标各为（19．0±2．6）MPa、（95±4）N、（201±5）％、（62．5±2．2）％，与3种DADM两两比较均偏高（t值为6．42±17．125。P值均小于0．01）。（2）埋植术后1周，各组大鼠创面元渗出或红肿，埋植物未收缩或卷曲；创面有炎性细胞浸润并有Fb及毛细血管长人。术后3周时，DADM-1d、DADM-2d、ADM组埋植区毛发生长正常，DADM-3d组埋植区毛发较稀疏；各组炎性细胞减少，Fb增多，有新生小血管长人，DADM．3d组炎性细胞减退稍延迟。术后第5周，各组埋植区毛发恢复正常，埋植物收缩、变薄，表面纤维膜包裹紧密，有较大血管束长人；各组真皮基质与周围正常组织融合。术后第9周，ADM和DADM均为薄、软白色组织片，与皮瓣内面连接紧密；各组无炎性细胞浸润，胶原纤维排列规则、致密，与正常胶原组织融合。结论烧伤DADM无明显免疫原性，生物相容性好，经离体改造有望成为创面修复治疗中的真皮替代物。

自噬相关基因Beclin1在大鼠深Ⅱ度烧伤皮肤中的表达

目的观察自噬相关基因Beclin1在大鼠深Ⅱ度烧伤皮肤中的表达,初步探讨自噬与烧伤皮肤之间的关系。方法 16只雄性Wistar大鼠随机分为正常组(对照组)和烧伤组(实验组),每组各8只。实验组建立深Ⅱ度烧伤模型,烧伤后分别于1、3、7 d取材。组织学检查观察各组动物皮肤全层情况,免疫组化检测Beclin1在各组动物皮肤的表达,并行图像处理和统计学分析。结果 Beclin1基因在实验组表达阳性,对照组表达阴性,组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Beclin1基因在Wistar大鼠烧伤皮肤中的表达呈阳性,推测自噬参与深Ⅱ度烧伤皮肤的修复过程。

大鼠胚胎皮肤前体复合物裸鼠移植模型的构建

目的筛选大鼠胚胎皮肤裸鼠移植的最佳妊娠时间窗,探索研究胚胎皮肤及其附件发育机制并进行干预的新方法。方法获取不同胎龄(E14.5 d、E16.5 d、E18.5 d)的携带少量皮下组织的大鼠胚胎皮肤前体复合物(ESPCs),以皮瓣下埋植的方式移植到裸鼠背部。7 d后打开皮瓣并暴露成活的ESPCs,观察其成活后胚胎皮肤及附件生长发育的组织学变化。结果 E16.5 d、E18.5 d移植物可顺利成活并继续生长发育,最终生成带皮肤附件的完整的皮肤结构;E14.5 d移植物则形成畸胎瘤样肿物。结论通过皮瓣下埋植可成功移植大鼠ESPCs;E16.5 d左右为ESPCs移植的最佳妊娠时间。