纤维连接蛋白瓜氨酸化后对聚蛋白多糖酶-1活性的影响

目的通过观察聚蛋白多糖酶-1（ADAMTS-4）与纤维连接蛋白（FN）以及瓜氨酸化的FN（cFN）的结合活性及结合后的酶解活性，探讨ADAMTS-4的活性调节机制。方法应用肽酰基精氨酸脱亚胺酶4（PADl4）对纤维连接蛋白（FN）进行瓜氨酸化并采用蛋白印迹法进行验证；应用酶联免疫吸附法测定FN和CFN与2种不同相对分子质量的ADAMTS-4的结合活性；使用聚蛋白多糖酶活性分析试剂盒测定2种ADAMTS-4的活性和其与FN、cFN结合后酶活性的变化。统计分析采用单因素方差分析，LSD-t检验或t检验。结果蛋白印迹法证实PADl4可以使FN瓜氨酸化为cFN；cFN与相对分子质量为93000的ADAMTS-4的结合活性明显低于FN（分别为0．624＋0．033，2．1824-0．042；t：50．522，P〈0．01），而两者与缺失碳端的相对分子质量为53000的ADAMTS．4的结合活性差异无统计学意义（分别为0．934＋0．012，0．971±0．024；t=2．388，P〉0．05）。相对分子质量为93000的ADAMTS．4能够酶解聚蛋白多糖产生大量酶解产物[ARGxx肽段浓度：（0．908±0．088）nmol／L]，与FN结合后降解聚蛋白多糖的能力明显下降[ARGxx肽段浓度：（0．5734-0．000）nmol／L，P〈0．05]，与cFN孵育后的ADAMTS-4降解聚蛋白多糖产生的ARGxx肽段浓度[（0．8304-0．020）nmol／L]明显高于与FN孵育后产生的ARGxx肽段浓度[（O．5734-0．000）nmol／L，P〈0．05]。相对分子质量为53000的ADAMTS-4的酶活性在与FN或eFN孵育前后酶活性无明显变化（P均〉0．05）。结论FN能结合ADAMTS-4并抑制它的活性，PADl4能将FN转化为cFN，cFN与ADAMTS-4的结合活性明显降低，从而对ADAMTS-4的活性抑制作用减弱。