自噬抑制剂可增强三阴性乳腺癌细胞系MDA—MB-468和MDA-MB-231对吉非替尼的敏感性

目的观察自噬抑制剂能否增强三阴性乳腺癌（TNBC）细胞系MDA—MB-468和MDA-MB-231对表皮生长因子受体（EGFR）抑制剂吉非替尼的敏感性。方法以吉非替尼单药或联合自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA）或巴弗洛霉素A1（BAF）处理MDA—MB．468和MDA．MB．231细胞，以及雌激素受体阳性的MCF-7细胞，采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞增殖，流式细胞术检测细胞凋亡，Westernblot法检测自噬标记蛋白以及凋亡通路相关蛋白的表达。结果吉非替尼对吉非替尼＋3-MA组和吉非替尼＋BAF组MDA-MB-468细胞的半数抑制浓度（IC50）分别为（4．1±0．2）μmol／L和（3．8±0．3）μmol／L，均明显低于吉非替尼组MDA-MB-468细胞[（7．0±0．2）μmol,／L，均P〈0．05]。吉非替尼对吉非替尼＋3．MA组和吉非替尼＋BAF组MDA-MB-231细胞的IC50分别为（9．7±0．1）／xmol／L和（7．7±0．2）μmoL／L，均明显低于吉非替尼组MDA-MB-231细胞[（14．7±0．1）μmol／L，均P〈0．05]。吉非替尼组、吉非替尼＋3．MA组、吉非替尼＋BAF组MDA-MB-468细胞的凋亡率分别（12．43±3．18）％、（23．37±2．71）％和（18．71±2．81）％，吉非替尼联合自噬抑制剂3-MA或BAF时，MDA-MB-468细胞的凋亡率均明显高于单用吉非替尼时的凋亡率（均P〈0．05）。吉非替尼组、吉非替尼＋3-MA组、吉非替尼＋BAF组MDA-MB-231细胞的凋亡率分别为（12．15±1．82）％、（16．94±2．19）％和（33．83±5．92）％，吉非替尼联合自噬抑制剂3-MA或BAF时，MDA-MB-231细胞的凋亡率均明显高于单用吉非替尼时的凋亡率（均P〈0．05）。吉非替尼联合3-MA或BAF对MCF．7细胞的凋亡无明显影响（P〉0．05）。吉非替尼联合3-MA或BAF后，MDA．MB．468和MDA．MB．231细胞中p-PTEN的表达明显增加，LC3和p-Akt蛋白表达明显下调，cleavedaspa$e-9和cleavedaspase-3蛋白的活性增加。结论自噬抑制剂可能通过激活PTEN／P13K／Akt通路相关蛋白的表达增强MDA—MB-468和MDA-MB-231细胞对吉非替尼的敏感性；自噬抑制剂联合吉非替尼可能通过启动caspase级联反应促进MDA-MB-468和MDA-MB-231细胞凋亡。