微载体培养技术在骨与软骨组织工程研究中的应用

背景:骨与软骨组织工程学中增殖种子细胞和保持细胞特定表型是其难点,微载体生物反应器培养系统提供了很好的条件来解决这个问题。目的:分析近年来国内外骨、软骨细胞微载体培养的研究进展,为骨与软骨细胞微载体培养技术和组织工程研究提供理论基础。方法:由第一作者在2010-11进行检索。检索数据库:PubMed数据库(网址http://www.ncbi.nlm.gov/PubMed);万方数据库(网址http://www.wanfangdata.com.cn),资料的检索时间范围为1967/2011。英文检索词为"microcarrier,cartilage,tissue engineering",中文检索词为"微载体,软骨,组织工程学"。排除与本文无关及陈旧、重复的文章,共保存32篇文献做进一步分析。结果与结论:在微载体培养系统中,可较好的调控骨与软骨细胞培养条件,能在短时间内大量的增殖,并能保持其细胞的表型,甚至出现表型增强现象,在骨、软骨组织工程学研究和临床应用中有着巨大潜力。

骨质疏松的骨转换生物标志物及其临床应用

骨质疏松症(osteoporosis)的诊断标准为发生了脆性骨折和(或)骨密度低下.骨密度检测目前以双能X线吸收法测定为金标准,而骨转换生物标志物检测对骨质疏松程度的评估则是其重要补充.骨代谢生化标志物是从血液、尿液中可检测出的骨代谢生化产物及相关激素,其能够反映骨代谢状况,其中能反映骨代谢转换的指标称为骨转换生物标志物.本文就骨质疏松的骨转换生物标志物及其临床应用进行综述.

七叶皂苷钠搽剂治疗急性软组织损伤的临床研究

目的探讨七叶皂苷钠搽剂治疗软组织损伤的临床疗效。方法将150例急性软组织损伤患者随机分为试验组和对照组,分别给予七叶皂苷钠搽剂和奇正消痛贴治疗1周。治疗前后分别计算患者在疼痛、压痛、肿胀、和功能障碍等方面的积分差值。结果七叶皂苷钠搽剂能明显改善患者的临床症状与体征,且无任何不良反应,其总有效率高于奇正消痛贴组。结论七叶皂苷钠搽剂是一种较好的治疗软组织损伤的理想外用药。

抑制miR-21a-5p能促进脊髓损伤小鼠运动功能的恢复

背景:脊髓损伤后病理生理改变复杂,尚无有效的治疗手段。miRNAs作为可以精细调控多种基因表达的内源性非编码RNA,可为脊髓损伤的治疗提供新思路。目的:探究抑制miR-21a-5p对小鼠脊髓损伤后运动功能恢复的影响及可能的机制。方法:第1步:Allen’s打击法构建小鼠脊髓损伤模型,提取术后3 d损伤处脊髓组织(n=24)对比假手术组(n=24)筛选出差异表达miRNA;第2步:脊髓损伤后鞘内注射miRNA抑制剂(antagomir-21a)构建观察组(n=24),对照组造模成功后鞘内注射等量的antagomir做对照(n=24)、假手术组(n=24)术后不做特殊处理;对比各组行为学评分(BMS评分),检测脊髓损伤相关标志物的表达。结果与结论:(1)小鼠脊髓损伤后miR-21a-5p的表达较假手术组显著升高(P <0.05);(2)观察组小鼠脊髓损伤后抑制miR-21a-5p,假手术组与脊髓损伤组小鼠运动功能评分差异明显(P <0.05),术后7 d观察组小鼠运动功能评分逐渐超过对照组,术后14 d显著高于对照组(P <0.05);(3)观察组小鼠脊髓组织中纤维连接蛋白与CSPGs的表达量低于对照组,且神经营养因子的表达高于对照组(P<0.05);(4)结果说明:小鼠脊髓损伤后miR-21a-5p的表达上调,抑制miR-21a-5p的表达可以抑制瘢痕形成并增加神经营养因子的分泌,从而促进运动功能的恢复。

老年股骨转子间骨折内固定失败后髋关节置换术重建髋部功能

[目的]探讨老年股骨转子间骨折内固定失败的治疗方法。[方法]对11例老年股骨转子间骨折内固定失败后患者,取出内固定物,行人工髋关节置换术,分析其内固定治疗失败的原因,总结人工髋关节置换术的疗效。[结果]全部病例获得随访,随访1-3年,术后髋关节功能明显改善,Harris评分由术前的43分提高到80.3分。[结论]人工髋关节置换术作为股骨转子间骨折失败的挽救性治疗措施,能恢复患肢功能。

全球新型冠状病毒感染的研究进展

2012年9月24日,世界卫生组织(WHO)证实了一种引起症状类似传染性非典型肺炎(SARS)的新型冠状病毒的存在,它既能引起普通感冒,也能引起严重急性呼吸道感染(SARI)。该病毒能否像SARS病毒一样在全球造成人际间传播,引起了人们的广泛关注,本研究从新型冠状病毒感染的病原学、流行病学、临床表现和预防控制四个方面进行了综述。

褥式缝合在微血管吻合中的临床应用

目的探讨褥式缝合在微血管吻合中的临床应用效果。方法回顾2007年1月至2015年12月的血管吻合中应用褥式缝合的断指再植316例、手指再造32例及游离皮瓣165例。结果随访时间为6个月～8年。308例再植成活．其中26例出现血管危象急诊探查，仅7例出现包括吻合口在内的血管栓塞．16例血管吻合口未栓塞，系因吻合口近端或远端血管挫伤导致的血管栓塞，3例系因单纯的血管痉挛所致：8例坏死病例均为末节挤压离断再植。其中6例获得血管危象探查，探查见其组织损伤严重，血管广泛栓塞．无保留价值，给以行残端修整术，2例患者拒绝手术探查最终坏死。32例再造手指完全成活，其中2例全形再造术后二趾瓣出现血管危象。探查系血管扭转引起血管痉挛所致，给以离断调整后重新吻合．最终成活．164例游离皮瓣完全成活。其中5例出现J衄管危象．经探查后恢复血运完全成活。1例因患者一般情况差．患方拒绝探查，最终皮瓣坏死。结论微血管的褥式缝合，可以显著提高血管的吻合质量．增加通畅率．而且其操作难度并不高，稍加练习即可掌握，值得临床推广应用。

应用步态分析评价足趾缺损对足功能的影响

目的用步态分析的方法研究不同类型的足趾损伤对足功能的影响。方法随访术后2～8年拇趾远节部分缺损、拇趾远节缺损、二趾缺损和二趾列缺损四组患者40例,采用自身健足对照,用Footscan足底压力分析系统行足底生物力学分析。结果拇趾远节部分缺损主要引起局部应力的改变,拇指远节缺损引起重心后移及前足蹬离期的缩短,二趾缺损可引起足底应力的外移,跖骨头缺损引起整个前足压力显著升高。结论各类足趾缺损均会对足底步态产生不同影响,拇趾远节及第二跖骨头缺损对足底应力分布影响较大,应尽力予以保留。

中东呼吸综合征最新研究进展

2012年9月,世界卫生组织首次报告了2例临床表现类似于传染性非典型肺炎(SARS)的新型冠状病毒感染病例。2013年5月,世界卫生组织将这种新型冠状病毒感染性疾病命名为"中东呼吸综合征(MERS)"。近期,MERS病例在沙特等中东地区和部分欧洲国家不断增加,病死率较高,引起了全球更为广泛的关注。对MERS病例报告发病情况、流行病学、病原学和预防控制4个方面的最新研究进展进行了综述。

一起淡玫红鹅膏菌中毒事件处置报告

目的对一起毒蘑菇中毒事件进行定性,总结处置经验,提出防控对策。方法通过流行病学调查、临床诊断、蘑菇形态学鉴定及毒性成分分析,并将患者所食蘑菇DNA序列在GenBank中进行比对,确定引起中毒的蘑菇种属及致死成分。结果引起中毒毒蘑菇为淡玫红鹅膏菌,是山东省内首次发现菌种,其干样α-鹅膏毒肽含量达3 827μg/g。结论此次中毒事件是一起由淡玫红鹅膏菌引起的食物中毒,致死成分为鹅膏毒环肽;今后应从摸底菌种分布、建立风险预警机制、加强宣教力度和提升应急处置能力四个方面做好防控工作。

兔退变椎间盘体内转染hTGF－β1、β3的生物学效应

目的 应用重组腺相关病毒2（recombinant adeno-associated virus,rAAV2）介导人转化生长因子β1（human transforming growth factor-β1,hTGF-β1）和β3（hTGF-β3）单基因或双基因联合体内转染退变兔髓核细胞,观察基因产物的表达及其对基质成分蛋白多糖和Ⅱ型胶原合成的生物调节作用.方法 36只新西兰大白兔注射纤维结合素片段（fibronectin fragment,Fn-f）制造椎间盘退变模型.造模成功后,随机分为5组：实验A组8只,造模椎间盘髓核内注射rAAV2-hTGF-β1;实验B组6只,注射rAAV2-hTGF-β3;实验C组6只,联合注射rAAV2-hTGF-β1和rAAV2-hTGF-β3;实验对照D组8只,注射rAAV2介导的增强绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein,EGFP）;空白对照E组8只,髓核内注射PBS.1周后处死A组及E组中各2只兔,收获髓核组织,制作冰冻切片,免疫组化法观察hTGF-β1的表达;基因转导后4、8、12周每组处死2只兔取髓核组织组织培养和裂解,35S整合分析法检测新合成蛋白多糖的含量,免疫印迹法检测髓核Ⅱ型胶原的含量.术后12周时处死D组剩余的2只兔,观察EGFP的表达.结果 （1）术后1周,免疫组化染色显示A组髓核组织切片中髓核细胞内及细胞间hTGF-β1阳性表达较E组显著增多,基因产物大量有效表达;（2）术后4、8、12周实验A组、B组、C组基因转染后蛋白多糖表达较E组提高1.28～2.06倍,Ⅱ型胶原表达提高1.25～1.73倍,差异均有统计学意义;C组蛋白多糖表达较A组、B组提高1.195～1.290倍,Ⅱ型胶原表达较A组、B组提高1.152～1.219倍,差异有统计学意义;A组、B组间或D组、E组间蛋白多糖及Ⅱ型胶原表达差异均无统计学意义;（4）术后12周,D组髓核细胞胞质内及细胞间质中观察到大量绿色荧光,基因产物EGFP仍有大量表达.结论 AAV作为新型基因转导载体可以有效介导治疗基因体内转染兔退变的髓核细胞,基因转染1周目的 基因即大量表达且持续表达超过12周;治疗因子hTGF-β1和hTGF-β3可有效促进退变髓核细胞基质蛋白多糖和Ⅱ型胶原的合成,双基因联合转染具有正向协同作用.

成人退变髓核细胞微载体旋转立体培养对细胞外基质合成的影响

目的探讨成人退变髓核细胞的体外微载体旋转立体培养模式及其对细胞外基质合成的影响。方法标本取自2005年9月至2009年5月因椎间盘疾患而施行椎体间融合术的患者，对总共34个退变的髓核组织进行体外培养，将其随机分为单层培养组和微载体旋转立体培养组。对2种培养方式的对数生长期髓核细胞进行Ⅰ、Ⅱ型胶原的SP-ABC免疫组化法染色，并行Ⅰ、Ⅱ型胶原的Wester nblot定量检测；用”S标记放射免疫定量分别检测两组处于不同生长期细胞的蛋白多糖含量，数据采用两独立样本的t检验进行统计分析。结果Ⅰ、Ⅱ型胶原的SP-ABC免疫组化法和Westernblot定量检测均显示微载体培养组高于单层培养组。SP-ABC免疫组化法结果：Ⅰ型胶原：32．5±4．4比15．2-4±1．2，t=2．871，P〈0．01；Ⅱ型胶原：43．6±4．1比23．1±2．2，t=2．375，P〈0．05；Westernblot定量检测结果：Ⅰ型胶原：0．62±0．08比0．504-0．06，t=3．327，P〈0．01；Ⅱ型胶原：1．464-0．08比0．86±0．04，t=2．453，P〈0．05。^35S标记放射免疫显示两种生长期的髓核细胞，微载体培养组表达蛋白多糖的含量均高于单层培养组（稳定生长期：348214±312比21046±673，t=2．134，P〈0．05；对数生长期：451344±175比321934±713，t=2．801，P〈0．01）。结论微载体旋转立体培养法对成人退变髓核细胞基质内Ⅰ、Ⅱ型胶原和蛋白多糖的表达具有正向调控的作用，可以适用于成人退变髓核细胞的大量扩增。

重组人促红细胞生成素抑制大鼠颈脊髓亚急性压迫性损伤中细胞凋亡的实验研究

目的研究重组人促红细胞生成素(rhEPO)对大鼠颈脊髓亚急性压迫性损伤的治疗效果。方法80只Wistar大鼠随机分为4组,假手术组(A组,n=5)仅行椎板切除,余大鼠用后路渐进性压迫法造成C5节段脊髓压迫性损伤。造模成功后,生理盐水对照组(B组,n=25)静脉给予生理盐水1mL/d,小剂量治疗组(C组,n=25)和大剂量治疗组(D组,n=25)分别静脉给予rhEPO500u/(kg·d)、5000u/(kg·d);损伤后分别于3、7、14、21、28d用BBB评分评价四肢运动功能;免疫组化法检测受压颈髓节段EPO和EPO-R的分布及数量;各时间点处死模型,脊髓标本进行TUNEL染色和流式细胞仪定量检测细胞凋亡情况。结果EPO-R随颈脊髓亚急性压迫性损伤渐重呈反应性增多,C、D组的各时间点BBB评分明显高于B组(P<0.01);TUNEL染色和流式细胞仪检测受压脊髓细胞凋亡结果显示:在21d时,rhEPO最能有效抑制脊髓运动神经元细胞的凋亡(P<0.01),小剂量rhEPO维持治疗给药剂量效果好。结论颈脊髓亚急性压迫性损伤后给予rhEPO可减轻脊髓的运动神经元细胞的凋亡,促进脊髓运动功能恢复,且小剂量rhEPO维持治疗即可取得良好效果。

颈脊髓损伤后大鼠水钠代谢紊乱动物模型的建立

目的建立大鼠颈脊髓损伤后水钠代谢紊乱的动物模型。方法在预实验基础上选成年雌性Wistar大鼠45只,随机分为正常饲养无手术对照组(A组)15只,肠内营养乳剂(TP)喂养并行胃造瘘和颈后路椎旁肌剥离手术对照组(B组)15只,肠内营养乳剂喂养并行颈脊髓完全横断损伤及胃造瘘术、导尿术实验组(C组)15只,其中C组3只鼠术后死亡弃用,测量血钠、尿钠浓度及尿量。结果与B组相比,C组于手术4 d后均获得明显低钠血症(P<0.05)。A组和B、C组术前血钠浓度无明显差异(P>0.05)。结论大鼠颈脊髓完全损伤后引起低钠血症的发生,可以作为颈脊髓损伤并发低钠血症动物模型进行深入研究。

重组腺相关病毒2介导hTGF-β_1基因体内转染兔退变髓核细胞对蛋白多糖含量的影响

目的应用重组腺相关病毒2(recombinant adeno-associated virus2,rAAV2)介导hTGF-β1基因体内转染兔退变椎间盘髓核细胞,观察基因产物的表达及其对退变髓核细胞蛋白多糖合成的生物调节作用。方法于24只成年新西兰大白兔,雌雄不限,体重1.7～2.2kg,L1、2、L2、3、L3、4、L4、5椎间盘注射25μL浓度为1mmol/L的纤维结合素片段(fi bronectin fragment,Fn-f)制备椎间盘退变模型,注射Fn-f4周时的造模椎间盘模拟早期退变的椎间盘。将24只兔随机分为3组(n=8),A、B、C组分别于造模椎间盘髓核内注射25μL rAAV2-hTGF-β1(1×1012vg/mL)、rAAV2-增强绿色荧光蛋白(enhanced green?uorescent protein,EGFP,rAAV2-EGFP)、PBS。术后1周A、C组各处死2只兔,取髓核组织采用免疫组织化学染色观察hTGF-β1的表达;术后4、8、12周每组取2只兔髓核组织,35S整合分析法检测新合成蛋白多糖的含量;术后12周处死B组2只兔,荧光显微镜观察髓核组织中EGFP的表达。结果术后1周,免疫组织化学染色示A组髓核细胞及基质中广泛存在强阳性染色颗粒,C组仅存在少量阳性颗粒。35S整合法检测示,各时间点A组35S蛋白多糖合成率均高于B、C组,比较差异有统计学意义(P<0.05);B、C组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。术后12周,荧光显微镜下观察B组盘髓核组织可见大量绿色荧光表达。结论新型基因转导载体rAAV2可有效介导hTGF-β1基因体内转染兔退变髓核细胞,基因产物可持续表达超过12周,hTGF-β1可有效促进退变髓核细胞蛋白多糖的合成。