促甲状腺激素调节肝脏 AMPKαThr 172而非 Ser 173的磷酸化

目的探讨促甲状腺激素(TSH)调节肝脏AMP激活的蛋白激酶(AMPK)α亚基的多磷酸化位点,揭示TSH调节AMPKα活性可能存在的机制。方法①在TSH刺激HepG2细胞组和对照组、TSH受体敲除(Tshr-ko)和同窝配对野生型(WT)小鼠中,用实时定量PCR和Western blotting检测AMPKαmRNA、总蛋白、苏氨酸(Thr)172和丝氨酸(Ser)173、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)Ser 79磷酸化水平;②AMPK激活剂AICAR、PKA抑制剂H89或TSH刺激肝细胞,检测AMPK、ACC磷酸化水平。结果相对于对照组,TSH刺激HepG2细胞后,AMPKα总蛋白水平无统计学差异,AMPKαThr 172磷酸化减少(P<0.05),Ser 173表达无明显变化(P>0.05)。与WT小鼠比较,Tshr-ko小鼠肝脏AMPKαmRNA和总蛋白水平表达不变,AMPKαThr 172(P<0.05)和ACC Ser 79(P<0.01)磷酸化升高,Ser 173磷酸化无改变(P>0.05)。AICAR和H89增加AMPKαThr 172和ACC Ser 79的磷酸化。H89与TSH共刺激HepG2细胞时,TSH减少AMPKαThr 172蛋白表达的作用被部分反转。结论 TSH通过TSH受体调节肝脏AMPKαThr 172而非Ser 173的磷酸化。

适量酒精对棕榈酸引起的胰岛β细胞功能损伤的保护作用

目的观察酒精、棕榈酸对胰岛β细胞(INS-1细胞)功能的影响。方法 INS-1细胞分为对照组、20 mmol/L酒精(模拟适量饮酒)组、100 mmol/L酒精(模拟大量饮酒)组、0.2 mmol/L棕榈酸(PA)组、PA+20 mmol/L酒精组以及PA+100 mmol/L酒精组。作用48 h后,采用放射免疫法检测糖刺激胰岛素的释放量,Westernblotting检测胰腺十二指肠同源异型盒因子1(PDX-1)、葡萄糖转运蛋白2(GLUT2)和磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK,包括T-AMPK和P-AMPK)蛋白水平。结果①与对照组相比,20 mmol/L酒精对INS-1细胞无显著影响(P>0.05);100 mmol/L酒精组和PA组均下调了INS-1细胞PDX-1、GLUT2蛋白水平和胰岛素释放量(P均<0.05)。相对于单独PA组,20 mmol/L酒精和PA合用时显著增加细胞PDX-1、GLUT2蛋白水平和胰岛素释放量(P均<0.05)。100 mmol/L酒精和PA合用时则未出现这种现象(P>0.05);②与对照组相比,20 mmol/L酒精对细胞AMPK表达和活化无明显影响(P>0.05);100 mmol/L酒精仅仅下调AMPK表达(P<0.05);PA同时下调AMPK表达和活化(P<0.05)。当20 mmol/L酒精和PA合用时,可以改善由PA引起的AMPK表达和活化的下调(P<0.05);而100 mmol/L酒精与PA合用组则无明显变化(P>0.05)。结论大量酒精和PA均能损害INS-1细胞功能;适量酒精(20 mmol/L酒精)能够改善由棕榈酸引起的胰岛β细胞功能损伤。