PCR技术在链格孢霉鉴定中的应用

目的应用PCR技术对链格孢霉进行鉴定,以期获得制备链格孢霉变应原制剂的纯菌种。方法采用空气曝皿收获链格孢霉菌种并进行培养,应用PCR技术对其进行鉴定。结果经空气曝皿、形态学鉴定为链格孢霉菌株的PCR产物经1.5%琼脂糖凝胶电泳分析,紫外灯下鉴定扩增所得条带约580 bp;测序结果经Blast比对,544个碱基中543个能够与链格孢霉26s rDNA的545个碱基比对上,缺失1个,不能识别1个,相符率达99%。结论证实待检真菌为链格孢霉。

两种链格孢霉变应原提取方法的比较

目的比较传统方法和新方法对链格孢霉变应原浸出液蛋白质含量、组分及生物活性的影响。方法将经空气曝皿获得、中国科学院鉴定为链格孢霉的菌株于26℃恒温下培养4周,取12份5 g湿重的菌苔,6份用传统方法(风干,高速粉碎机粉碎后,搅拌提取),6份采用新方法(液氮研磨+超声破碎,再搅拌提取)提取蛋白质;然后用改良的Bradford法进行蛋白质含量测定:SDS-PAGE分析两种方法提取的蛋白质组分的差别,放射性变应原吸附(RAST)抑制试验比较两者间变应原生物活性的差异。结果传统方法和新方法提取的蛋白质含量分别为(0.205±0.019)和(0.532±0.023)g/ml,所得到变应原的50%抑制率分别为5.96和1.25μg/ml。结论两种提取方法中,新方法能够得到较高的蛋白质含量及更多的蛋白质组分,对于低丰度蛋白的获得及生物学活性即效价的提高具有十分重要的意义。