金黄色葡萄球菌fnbA和fnbB基因及fnbAB双基因缺失突变体菌株的构建

目的 构建纤维连接蛋白结合蛋白 （ FnbP）基因fnbA、fnbB及fnbAB基因敲除质粒并构建相应基因缺失金黄色葡萄球菌菌株。方法 提取金黄色葡萄球菌NCTC8325菌株的基因组，以合成的含有GGGG-attB1的基因特异性序列为引物，采用PCR技术分别扩增目的基因片段，应用Gateway基因克隆技术，通过BP反应与含有attP1和attP2的pKOR1质粒载体混合，在attB和attP之间发生位点特异性重组，构建成含有fnbA 、fnbB和fnbAB基因敲除质粒，再电转到金黄色葡萄球菌菌株NCTC8325。结果 构建质粒pKOR1dfnbA、pKOR1dfnbB和pKOR1dfnbAB测序结果正确，经PCR验证，质粒pKOR1dfnbA、pKOR1dfnbB和pKOR1dfnbAB均成功电转入金黄色葡萄球菌NCTC8325菌株。结论 成功构建fnbA、fnbB和fnbAB基因敲除金黄色葡萄球菌菌株NCTC8325，为研究FnBPA 和FnBPB在金黄色葡萄球菌感染机制中的作用提供了有力工具。