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高脂饮食致大鼠非酒精性脂肪性肝炎肝纤维化模型的建立 被引量:29
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作者 孙林林 石军 +5 位作者 郝菁华 任万华 阎春英 张捷 林晓燕 崔彬 《临床肝胆病杂志》 CAS 2011年第3期254-257,272,共5页
目的建立并研究高脂肪饮食导致大鼠非酒精性脂肪性肝炎(NASH)肝纤维化的动物模型。方法雄性SD大鼠60只,随机分成正常对照组30只和模型组30只,分别给予普通饲料与高脂饲料,于第4、8、12周末将正常对照组与模型组随机处死10只。分别检测... 目的建立并研究高脂肪饮食导致大鼠非酒精性脂肪性肝炎(NASH)肝纤维化的动物模型。方法雄性SD大鼠60只,随机分成正常对照组30只和模型组30只,分别给予普通饲料与高脂饲料,于第4、8、12周末将正常对照组与模型组随机处死10只。分别检测血清学指标,取肝组织做HE染色及Masson染色,应用图像分析法对Masson染色进行纤维化面积定量分析。结果两组大鼠体重均增加,8周时肝指数明显升高,血清胆固醇及总甘油三酯8周开始与正常对照组比较差异具有统计学意义。转氨酶不同时间点均有升高,8、12周时与正常对照组比较差异具有统计学意义。高脂饮食4周末,HE染色可见肝小叶结构完整,汇管区见少量炎症细胞浸润,无病理性纤维化发生。8周末,达到脂肪肝的诊断标准,开始出现肝纤维化趋势。造模12周,大鼠肝组织脂肪变程度达重度,纤维化面积增大。结论经改良配方后,成功建立了大鼠NASH肝纤维化模型。 展开更多
关键词 肝硬化 实验性 疾病模型 动物 高脂饮食
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乙型肝炎病毒感染与肝外细胞及自身免疫病的研究进展 被引量:12
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作者 刘义庆 栾芳 +1 位作者 赵跃然 张炳昌 《中国医药》 2013年第10期1515-1516,共2页
乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)属于嗜肝脱氧核糖核酸(DNA)病毒科,是引起人类急性和慢性乙型病毒性肝炎的特异性病原体。据世界卫生组织(WHO)估计,全世界约有20亿人感染过HBV,3.5亿人发展成为慢性HBV感染者,其中75%... 乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)属于嗜肝脱氧核糖核酸(DNA)病毒科,是引起人类急性和慢性乙型病毒性肝炎的特异性病原体。据世界卫生组织(WHO)估计,全世界约有20亿人感染过HBV,3.5亿人发展成为慢性HBV感染者,其中75%发生在亚洲和西太平洋地区。我国为乙肝的高流行区,全国约有1.2亿人携带HBV,其中慢性乙肝患者超过3000万。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 脱氧核糖核酸 外周血单个核细胞 自身免疫病
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中性粒细胞胞外诱捕网及其与自身免疫病关系的研究进展 被引量:1
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作者 刘义庆 满姗姗 +1 位作者 张炳昌 赵跃然 《中国医药》 2014年第3期443-445,共3页
中性粒细胞是固有免疫系统的重要组成部分,是人体免疫系统最丰富的免疫细胞,构成了机体抵御病原体入侵的第一道防线.它防御方式有多种,其中最主要的就是吞噬、攻击和清除病原体.在2004年中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)作为一种新的有效... 中性粒细胞是固有免疫系统的重要组成部分,是人体免疫系统最丰富的免疫细胞,构成了机体抵御病原体入侵的第一道防线.它防御方式有多种,其中最主要的就是吞噬、攻击和清除病原体.在2004年中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)作为一种新的有效的抗菌途径被发现:一旦细菌侵入机体,中性粒细胞就会形成胞外网状结构,包埋限制细菌防止其扩散并形成区域高浓度抗菌物质将其迅速有效清除. 展开更多
关键词 中性粒细胞胞外诱捕网 自身免疫疾病
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两个基因多态性并存与2型糖尿病大血管病变的关系
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作者 邹彩艳 李茵茵 +3 位作者 李秋 陈海燕 王来成 吕晓霞 《山东大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2008年第6期620-623,627,共5页
目的探讨抵抗素+299G/A,PPARγ2 Pro12Ala基因多态性并存与糖尿病大血管病变的关系。方法应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术检测296例两个基因多态位点的等位基因、基因型。结果①A组抵抗素基因+299G/A等位基因频率和B组等位... 目的探讨抵抗素+299G/A,PPARγ2 Pro12Ala基因多态性并存与糖尿病大血管病变的关系。方法应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术检测296例两个基因多态位点的等位基因、基因型。结果①A组抵抗素基因+299G/A等位基因频率和B组等位基因频率及基因型分布与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。PPARγ2基因Pro/Ala多态位点的等位基因频率与基因型在2型糖尿病组与对照组间比较差异无统计学意义(P>0.05),B组与A组及对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05);②多态位点联合分析表明,同时携带GA/AAPA基因型的T2DM患者患大血管病变风险明显低于仅携带一种或者未携带基因型者(P<0.05)。结论①抵抗素基因+299G/A多态位点的A等位基因及AA基因型,PPARγ2基因Pro/Ala多态位点的A等位基因可能是大血管病变的保护因素;②同时携带GA/AAPA基因型的T2DM患者大血管病变患病风险更低。 展开更多
关键词 糖尿病 非胰岛素依赖型 血管疾病 抵抗素 多态性 单核苷酸
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CD-TK双自杀基因系统对腺样囊性癌ACC-2细胞放疗增敏的作用
5
作者 张娜 张东升 +5 位作者 韩俊庆 张世周 刘桂军 魏奉才 张捷 牟文丽 《上海口腔医学》 CAS CSCD 2009年第2期183-188,共6页
目的:探讨前体药物及CD-TK双自杀基因系统对人腺样囊性癌(ACC-2)细胞的放疗增敏作用。方法:重组真核表达质粒pIRES-CD及pIRES-TK经电穿孔法共转染ACC-2细胞,以400μg/mL的G418筛选10d,获得稳定表达CD及TK基因的ACC-2细胞,提取该细胞的总... 目的:探讨前体药物及CD-TK双自杀基因系统对人腺样囊性癌(ACC-2)细胞的放疗增敏作用。方法:重组真核表达质粒pIRES-CD及pIRES-TK经电穿孔法共转染ACC-2细胞,以400μg/mL的G418筛选10d,获得稳定表达CD及TK基因的ACC-2细胞,提取该细胞的总RNA,RT-PCR检测CD、TK基因的表达;将阳性克隆的ACC-2细胞分别在有氧及乏氧条件下给予不同剂量(0、2、4、6、8、10Gy)X线照射及前体药物干预,通过细胞克隆形成实验,观察双自杀基因及前体药物在有氧及乏氧条件下对ACC-2细胞的放疗增敏作用。采用SPSS11.5软件包对数据进行多因素方差分析。结果:RT-PCR检测到ACC-2/CD-TK中CD、TK基因的表达;随X线照射剂量的增加,各组细胞放疗后克隆形成率均明显降低;有氧条件下,X线照射ACC-2/CD-TK+前体药物组细胞存活分数均较相同剂量X线照射ACC-2及ACC-2/CD-TK细胞组低(P<0.05);乏氧条件下,X线照射ACC-2/CD-TK+前体药物组细胞存活分数均较相同剂量X线照射ACC-2及ACC-2/CD-TK细胞组低(P<0.05);相同照射剂量下,各相应细胞组在有氧条件下细胞存活分数较乏氧条件下低。结论:CD-TK双自杀基因及其前体药物的应用,可以提高ACC-2细胞放疗敏感性及X线放射治疗对ACC-2细胞的杀伤作用。 展开更多
关键词 自杀基因治疗 前体药物 放射疗法 克隆形成率 腺样囊性癌
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质粒表达载体pIRES-CD的构建及其在ACC-2细胞中的表达
6
作者 黄圣运 张东升 +3 位作者 张世周 刘桂军 牟文丽 张捷 《上海口腔医学》 CAS CSCD 2008年第5期505-509,共5页
目的:克隆大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶(CD)基因,构建质粒表达载体pIRES-CD,并利用该载体转染ACC-2细胞,建立稳定表达大肠杆菌CD基因的ACC-2细胞克隆。方法:通过PCR从大肠杆菌DH5αDNA中扩增出CD基因全长序列,将扩增产物定向插入到克隆载体pMD1... 目的:克隆大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶(CD)基因,构建质粒表达载体pIRES-CD,并利用该载体转染ACC-2细胞,建立稳定表达大肠杆菌CD基因的ACC-2细胞克隆。方法:通过PCR从大肠杆菌DH5αDNA中扩增出CD基因全长序列,将扩增产物定向插入到克隆载体pMD18-T中,进行序列测定。测序正确后,将其亚克隆到质粒表达载体pIRES中,构建以内部核糖体进入位点(IRES)相连的CD基因的质粒表达载体pIRES-CD,采用电穿孔法,以质粒表达载体转染ACC-2细胞,用400μg/mL的G418筛选10d,获得稳定表达CD基因的ACC-2细胞系,提取该细胞的总RNA,用RT-PCR检测CD基因的表达。结果:PCR扩增出1280bp大小的片段,测序结果与GeneBank报道的CD序列基本一致;阳性重组质粒pIRES-CD经XbaI和NotI双酶切后,获得6.1kb和1280bp的片段;RT-PCR从转染细胞的总RNA中扩增出228bp的预期片段。结论:成功扩增了CD基因的DNA片段;成功构建了质粒表达载体pIRES-CD;建立了稳定表达CD基因的ACC-2细胞系,为CD/5-FC自杀基因系统在腺样囊性癌基因治疗中的应用奠定了基础。 展开更多
关键词 自杀基因 胞嘧啶脱氨酶基因 内部核糖体进入位点 核酸内切酶 腺样囊性癌
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信号转导蛋白P65与放疗诱导口腔鳞状细胞癌细胞凋亡的关系
7
作者 马利 张东升 +5 位作者 吴军楼 韩俊庆 张世周 刘桂军 牟文丽 张捷 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期318-322,共5页
目的探讨不同剂量的X射线对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞中信号转导蛋白P65表达的影响以及P65与放疗诱导口腔鳞状细胞癌细胞凋亡的关系。方法人舌鳞癌Tca8113细胞复苏后,在37℃,5%CO2的孵箱中培养。共分对照组、2、4、6、8、10 Gy剂量组,... 目的探讨不同剂量的X射线对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞中信号转导蛋白P65表达的影响以及P65与放疗诱导口腔鳞状细胞癌细胞凋亡的关系。方法人舌鳞癌Tca8113细胞复苏后,在37℃,5%CO2的孵箱中培养。共分对照组、2、4、6、8、10 Gy剂量组,待细胞长至对数生长期后,对细胞分别应用上述照射剂量一次性照射。照射后继续培养,并在照射后的不同时间点(1、3、6、10、24、48 h)应用免疫细胞化学和Western blot检测细胞中P65的表达量,并同时应用流式细胞仪和末端核苷酸转移酶介导的生物素化的dUTP末端标记(TUNEL)法检测不同X射线剂量组的细胞凋亡率。结果不同X射线剂量组的细胞浆内P65蛋白的表达量与对照组相比差异均具有统计学意义(P<0.05),而不同时间点组的细胞浆内P65蛋白表达量相互比较,3 h组的细胞浆内P65蛋白表达量与其他时间点组相比差异有显著性(P<0.05)。不同剂量组的凋亡率与对照组相比,差异均具有统计学意义(P<0.05),而不同时间点组的凋亡率相互比较时,3 h组的凋亡率与其他时间点组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论 X射线可以激活口腔鳞状细胞癌细胞中核因子-κB(NF-κB)P65信号转导通路,而P65在细胞浆中表达与放疗诱导口腔鳞状细胞癌细胞凋亡具有正相关性,激活后进入细胞核内的P65蛋白可能具有抵抗细胞凋亡的作用。 展开更多
关键词 P65 口腔鳞状细胞癌 细胞凋亡
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颌骨骨纤维异常增殖症骨髓间充质干细胞Gsα基因突变分析 被引量:1
8
作者 于舰斌 张东升 +3 位作者 王来城 郑培惠 马利 牟文丽 《中国口腔颌面外科杂志》 CAS 2011年第4期266-270,共5页
目的:探索对颌骨骨纤维异常增殖症(FD)患者骨髓间充质干细胞(BMSCs)的Gsα蛋白编码基因位点进行突变分析的方法。方法:颌骨FD患者经X线及组织病理学确诊后,术中取组织标本进行骨髓间充质干细胞原代培养,提取细胞DNA,通过巢式PCR及酶切... 目的:探索对颌骨骨纤维异常增殖症(FD)患者骨髓间充质干细胞(BMSCs)的Gsα蛋白编码基因位点进行突变分析的方法。方法:颌骨FD患者经X线及组织病理学确诊后,术中取组织标本进行骨髓间充质干细胞原代培养,提取细胞DNA,通过巢式PCR及酶切等方法,将突变基因扩增,并进行基因序列测定。结果:颌骨FD患者BMSCs中,Gsα第201位氨基酸的编码基因突变(G→A或C→T),造成第201位氨基酸由精氨酸→组氨酸或精氨酸→半胱氨酸突变。结论:颌骨FD患者BMSCs中Gsα蛋白第201位氨基酸编码基因位点存在特异性突变,巢式PCR是检测该突变的可靠方法之一。 展开更多
关键词 骨纤维异常增殖症 G蛋白 骨髓间充质干细胞 突变 巢式PCR
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骨纤维异常增殖症病变中骨髓间充质干细胞的分离培养及鉴定 被引量:1
9
作者 于舰斌 郑培惠 +4 位作者 张东升 李胜锋 刘桂军 牟文丽 张捷 《中国口腔颌面外科杂志》 CAS 2011年第2期91-95,共5页
目的:探索从骨纤维异常增殖症(FD)病变组织中分离、培养骨髓间充质干细胞(MSC)的有效方法,为研究骨纤维异常增殖症的病因及发病机制奠定基础。方法:取FD患者新鲜病变组织,将其剪碎后冲洗,获得骨髓间充质干细胞,进行培养,观察细胞形态,... 目的:探索从骨纤维异常增殖症(FD)病变组织中分离、培养骨髓间充质干细胞(MSC)的有效方法,为研究骨纤维异常增殖症的病因及发病机制奠定基础。方法:取FD患者新鲜病变组织,将其剪碎后冲洗,获得骨髓间充质干细胞,进行培养,观察细胞形态,绘制细胞生长曲线,检测其细胞表面标志物及向成骨细胞的诱导分化能力。结果:培养的骨髓干细胞随传代次数增多,细胞形态趋向长梭形,99%的细胞表达CD44和HLA-ABC,不表达CD34;可见诱导后的MSC碱性磷酸酶染色阳性,并形成钙结节。结论:在新鲜FD骨标本中可以成功提取MSC,其在体外具有诱导成骨的能力,获取到的MSC可以满足后续实验的要求。 展开更多
关键词 骨纤维异常增殖症 骨髓间充质干细胞 细胞培养
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强直性脊柱炎患者杀伤细胞免疫球蛋白样受体基因型和单倍型分析 被引量:5
10
作者 张炳昌 刘芸 +2 位作者 焦玉莲 赵跃然 李建峰 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期91-95,共5页
目的分析杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)基因型和单倍型在强直性脊柱炎患者中的分布特点。方法采用序列特异性引物聚合酶链反应方法,分析105例强直性脊柱炎患者、62例骨关节炎患者和412名健康对照KIR基因型和单倍型。结果(1)强直... 目的分析杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)基因型和单倍型在强直性脊柱炎患者中的分布特点。方法采用序列特异性引物聚合酶链反应方法,分析105例强直性脊柱炎患者、62例骨关节炎患者和412名健康对照KIR基因型和单倍型。结果(1)强直性脊柱炎组KIR基因型3DL3-2DL3-2DL1-2DPI-2DL4—3DL1-2DS4-3DL2阳性率(6.67%)明显低于健康对照组和骨关节炎组(20.15%,17.74%;P=0.001,0.037)。(2)强直性脊柱炎组KIR基因型3DL3—2DL3-2DL2—2DL1—2DPI—2DIA-3DLI-2DL5-2DS1-2DS2-2DS3-2DS4-2DS5-3DS1—3DL2阳性率(9.52%)及基因型3DL3-2DL3—2DL2-2DLI-2DPI—2DIA-3DL1—2DL5-2DS1—2DS4—3DL2阳性率(5.71%)明显高于健康对照组(2.18%,0.49%;P=0.001,0.001),骨关节炎组未检出这2种基因型。(3)三组人群KIR单倍型差异无统计学意义。结论KIR基因型分布异常,可能是强直性脊柱炎的免疫遗传因素,其分子机制有待进一步研究。 展开更多
关键词 脊柱炎 强直性 基因型 单倍型 杀伤细胞免疫球蛋白样受体
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罗格列酮对高脂饲养大鼠骨骼肌AMPK活性的影响 被引量:1
11
作者 孙颖 刘毅 +3 位作者 张捷 崔彬 孔磊 赵家军 《山东大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2009年第3期48-52,共5页
目的观察罗格列酮对高脂饲养大鼠骨骼肌AMP激活的蛋白激酶(AMPK)α、葡萄糖转运体4(GLUT4)、胰岛素受体底物1(IRS1)及过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)表达的影响,为临床有效的预防和控制脂毒性提供科学依据。方法雄性Wistar大鼠30... 目的观察罗格列酮对高脂饲养大鼠骨骼肌AMP激活的蛋白激酶(AMPK)α、葡萄糖转运体4(GLUT4)、胰岛素受体底物1(IRS1)及过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)表达的影响,为临床有效的预防和控制脂毒性提供科学依据。方法雄性Wistar大鼠30只,随机分为对照、高脂和高脂加罗格列酮[1 mg/(kg.d)]三组,每组10只。喂养5个月后,采用Real time PCR法测定大鼠骨骼肌中AMPKα1、AMPKα2、GLUT4的mRNA水平,RT-PCR法测定IRS1、PPARγmRNA的表达,Western blot法测定P-AMPK、T-AMPK和GLUT4的含量。结果高脂组大鼠除AMPKα1和IRS1的mRNA表达无变化外,AMPKα2、GLUT4、PPARγ的mRNA水平及P-AMPK、T-AMPK、GLUT4的蛋白水平均比对照组降低(P<0.01或P<0.05)。与高脂组相比,罗格列酮显著增加大鼠骨骼肌GLUT4、PPARγ、IRS1的mR-NA水平及P-AMPK、GLUT4的蛋白水平(P<0.01或P<0.05),而对AMPKα1、AMPKα2的mRNA水平和T-AMPK的蛋白水平无明显影响。结论罗格列酮可增加高脂喂养大鼠的骨骼肌P-AMPK、GLUT4、PPARγ和IRS1的表达,提示其具有参与改善胰岛素抵抗、缓解脂毒性的作用。 展开更多
关键词 罗格列酮 蛋白激酶 AMP激活 高脂 大鼠 WISTAR
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重组共表达载体pSNAV2.0-HSV1-tk-IRES-hIL-1Ra的构建及其在滑膜细胞中的表达 被引量:1
12
作者 刘青春 李伟 +4 位作者 张伟 王来城 张捷 杨东 吴帅 《山东大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2009年第9期81-85,共5页
目的引入内部核糖体进入位点(IRES),构建HSV1-tk与hIL-1Ra双基因共表达AAV重组载体并检测其在滑膜细胞中的表达。方法PCR扩增HSV1-tkI、RES及hIL-1Ra基因片段,分别与pMD18-T simple载体连接,测序后,hIL-1Ra与HSV1-tk先后插入pMD-IRES,... 目的引入内部核糖体进入位点(IRES),构建HSV1-tk与hIL-1Ra双基因共表达AAV重组载体并检测其在滑膜细胞中的表达。方法PCR扩增HSV1-tkI、RES及hIL-1Ra基因片段,分别与pMD18-T simple载体连接,测序后,hIL-1Ra与HSV1-tk先后插入pMD-IRES,构建重组质粒pMD-HSV1-tk-IRES-hIL-1Ra,酶切出HSV1-tk-IRES-hIL-1Ra片段,克隆至AAV载体质粒pSNAV2.0上,构建成重组共表达质粒pSNAV2.0-HSV1-tk-IRES-hIL-1Ra,酶切鉴定后,用脂质体转染上述质粒至原代骨关节炎(OA)滑膜细胞,RT-PCR法鉴定共表达质粒在滑膜细胞中的表达。结果酶切鉴定证实重组共表达质粒构建正确;RT-PCR检测到转染后的OA滑膜细胞中表达HSV1-tk与hIL-1Ra。结论成功构建了重组共表达质粒pSNAV2.0-HSV1-tk-IRES-hIL-1Ra;重组质粒转染OA滑膜细胞后,能表达HSV1-tk与hIL-1Ra。这为OA的基因治疗研究提供了理论依据。 展开更多
关键词 胸苷激酶 受体 白细胞介素 滑膜 骨关节炎
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杀伤细胞免疫球蛋白样受体及HLA-Cw基因多态性与强直性脊柱炎遗传易感性研究
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作者 张炳昌 卢志明 +3 位作者 刘芸 焦玉莲 赵跃然 李建峰 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期1114-1118,共5页
目的探讨杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIRs)2D基因及其配体HLA-Cw等位基因与强直性脊柱炎的遗传易感性是否相关。方法以PCR-SSP基因分型技术检测105例强直性脊柱炎患者KIB2D基因(KIR2DL1、2DS1、2DL2、2DL3、2DS2)和HLA-Cw01~08等位... 目的探讨杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIRs)2D基因及其配体HLA-Cw等位基因与强直性脊柱炎的遗传易感性是否相关。方法以PCR-SSP基因分型技术检测105例强直性脊柱炎患者KIB2D基因(KIR2DL1、2DS1、2DL2、2DL3、2DS2)和HLA-Cw01~08等位基因,并将HLA-Cw01~08分成HLA-cw^lys和HLA-Cw^asn两组,分别计算KIR2D基因、HLA-Cw等位基因及活化性KIR/HLA-Cw组合基因型频率,并与51例骨关节炎患者和120名健康人群比较。结果强直性脊柱炎组患者HLA-Cw^lys基因频率为0.2697,高于骨关节炎组患者的0.1482(P=0.024)和健康对照者的0.1388(P=0.001)。强直性脊柱炎组患者KIR2DS1/HLA-Cw^lys组合基因型阳性率为26.67%,明显高于骨关节炎组的11.76%(P=0.039)和健康对照组的13.33%(P=0.018)。结论HLA-Cw^lys可能与强直性脊柱炎遗传易感性相关;当抑制性受体KIR2DL1的特异性配体HLA-Cw^lys存在时,KIR2DS1基因携带者可能是强直性脊柱炎的高危人群。 展开更多
关键词 脊柱炎 强直性 受体 免疫 HLA抗原 组织相容性抗原Ⅰ类 多态现象 遗传 疾病遗传易感性
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TK基因重组质粒的构建及在ACC-2细胞中的表达
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作者 黄圣运 张东升 +3 位作者 刘桂军 牟文丽 张世周 张捷 《临床口腔医学杂志》 2008年第11期643-646,共4页
目的:克隆胸腺嘧啶核苷激酶(TK)基因,构建质粒表达载体pIRES-TK,并利用该载体转染ACC-2细胞,建立了稳定表达TK基因的ACC-2细胞克隆。方法:通过PCR从逆转录病毒重组体pLNSX-TK中扩增出TK基因全长序列,将扩增产物定向插入到克隆载体pMD18-... 目的:克隆胸腺嘧啶核苷激酶(TK)基因,构建质粒表达载体pIRES-TK,并利用该载体转染ACC-2细胞,建立了稳定表达TK基因的ACC-2细胞克隆。方法:通过PCR从逆转录病毒重组体pLNSX-TK中扩增出TK基因全长序列,将扩增产物定向插入到克隆载体pMD18-T中进行序列测定,测序正确后将其亚克隆到质粒表达载体pIRES中,构建重组表达载体pIRES-TK,用电穿孔法以该质粒转染ACC-2细胞,经G418筛选获得稳定表达TK基因的ACC-2细胞株,提取该细胞株的总RNA,用RT-PCR检测TK基因的表达。结果:PCR扩增出1128bp大小的片段,测序结果与GeneBank报道的TK序列基本一致;阳性重组质粒pIRES-TK经XhoI和MulI双酶切后获得2692Bb和1128bp的片段;RT-PCR从转染细胞的总RNA中扩增出361bp的预期片段。结论:成功扩增了TK基因的DNA片段;成功构建了质粒表达载体pIRES-TK;建立了稳定表达TK基因的ACC-2细胞株,为TK/GCV自杀基因系统在腺样囊性癌基因治疗中的应用奠定良好的基础。 展开更多
关键词 胸腺嘧啶核苷激酶 自杀基因 核酸内切酶 转染 腺样囊性癌
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放射线对口腔鳞状细胞癌细胞中核因子-κB p65表达的影响
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作者 马利 张东升 +4 位作者 韩俊庆 张世周 刘桂军 牟文丽 张捷 《临床口腔医学杂志》 2009年第9期533-535,共3页
目的:探讨不同剂量放射线对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞中核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)p65信号转导蛋白表达的影响。方法:采用人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞,分为6个剂量组,分别为0y、2、4、6、8、10Gy,在照射后的不同时间点(1,3,6... 目的:探讨不同剂量放射线对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞中核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)p65信号转导蛋白表达的影响。方法:采用人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞,分为6个剂量组,分别为0y、2、4、6、8、10Gy,在照射后的不同时间点(1,3,6,10,24,48h)应用免疫细胞化学检测NF-κB p65的表达情况,应用Leica Qwin Plus图像分析系统对图像进行分析,测其灰度值,并应用SPSS10.0软件对数据进行X2检验。结果:免疫细胞化学方法显示不同剂量组的平均灰度值与0Gy组相比均为P<0.05,差异均具有统计学意义,而不同时间点组的平均灰度值相互比较,3h组的平均灰度值与其他时间点组相比均为P<0.05,差异有显著性。结论:放射线可以激活NF-κB p65信号转导通路,此信号转导通路在肿瘤的放射治疗中可能具有重要意义。 展开更多
关键词 放射线 P65 口腔鳞状细胞癌
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蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-2在口腔鳞状细胞癌中的表达及临床意义 被引量:2
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作者 王化淳 黄圣运 +3 位作者 谢红军 刘文雷 张捷 张东升 《山东大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2014年第2期82-85,89,共5页
目的探讨蛋白酪氨酸磷酸酶2(SHP-2)在口腔鳞状细胞癌中的表达,并分析其与临床病理参数之间的关系。方法采用免疫组化SP法检测45例口腔鳞癌组织及8例癌旁黏膜组织中SHP-2的表达情况,分析SHP-2与口腔鳞癌病理特征预后的关系。结果 SHP-2... 目的探讨蛋白酪氨酸磷酸酶2(SHP-2)在口腔鳞状细胞癌中的表达,并分析其与临床病理参数之间的关系。方法采用免疫组化SP法检测45例口腔鳞癌组织及8例癌旁黏膜组织中SHP-2的表达情况,分析SHP-2与口腔鳞癌病理特征预后的关系。结果 SHP-2在口腔鳞癌中的表达显著高于癌旁黏膜组(P<0.05)。SHP-2在口腔鳞癌中的表达率为68.9%,其表达与口腔鳞癌的TNM分期、淋巴结转移及病理分级相关(P<0.05)。单因素生存分析结果显示,SHP-2阳性患者生存率低于阴性患者(P<0.05);多因素生存分析结果显示,SHP-2表达水平不是影响口腔鳞癌患者总生存率的独立预后指标。结论 SHP-2可能参与口腔鳞状细胞癌的发生、发展与转移,其表达水平可能成为判断口腔鳞癌预后的新指标。 展开更多
关键词 口腔鳞状细胞癌 蛋白酪氨酸磷酸酶2 免疫组织化学
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NF-κB信号通路在放射线诱导的腺样囊性癌细胞凋亡中的实验研究 被引量:1
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作者 刘哲 张东升 +6 位作者 吴军楼 黄圣运 韩俊庆 张世周 刘桂军 牟文丽 张捷 《临床口腔医学杂志》 2012年第5期259-262,共4页
目的:探讨NF-κB信号转导通路在放射线诱导的人唾液腺腺样囊性癌(ACC)-2细胞凋亡中的变化规律。方法:采用脂质体2000将pBabe-SR-IκBa质粒瞬时转染入ACC-2细胞,Western blot法检测转染后IκBa蛋白表达的变化,将转染后的ACC-2细胞进行6... 目的:探讨NF-κB信号转导通路在放射线诱导的人唾液腺腺样囊性癌(ACC)-2细胞凋亡中的变化规律。方法:采用脂质体2000将pBabe-SR-IκBa质粒瞬时转染入ACC-2细胞,Western blot法检测转染后IκBa蛋白表达的变化,将转染后的ACC-2细胞进行6种剂量(0、2、4、6、8、10 Gy)的高能X线照射,在照射后不同时间点(1、3、6、10、24、48 h)应用免疫细胞化学检测ACC-2细胞NF-κB p65的表达情况,应用Image Pro-Plus图像分析软件测其细胞核平均灰度值,并用SPSS 16.0软件对数据进行方差分析。结果:与转染pBabe空白质粒组和未转染质粒组比较,转染pBabe-SR-IκBa质粒ACC-2细胞不仅表达内源性IκBa,同时也表达SR-IκBa;接受相同放射线剂量照射后3 h细胞核平均灰度值升高(P<0.05)。SR-IκBa质粒组中,不同剂量组的细胞核平均灰度值均低于0 Gy组;约在接受照射后6~10 h,细胞核平均灰度值达到最低值;相同时间点上,3 h组细胞细胞核平均灰度值随放射剂量增加而降低(P<0.05)。结论:转染突变的IκBa基因可特异性抑制NF-κB信号通路,经放射线照射诱导凋亡后,NF-κB p65蛋白的表达量具有一定的时间-剂量效应规律。 展开更多
关键词 NF-ΚBP65 放射线 腺样囊性癌 质粒转染
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