柿叶黄酮类化合物对D-半乳糖致衰老小鼠的抗炎抗氧化神经保护作用

目的探讨柿叶中黄酮类提取物对D-半乳糖所致衰老小鼠行为学、脑内氧化应激及炎性机制的影响。方法 40只雄性昆明小鼠,随机分为正常对照组(NC组)、模型组(D-gal组)、柿叶黄酮低剂量组(D-gal+F40组)、柿叶黄酮高剂量组(D-gal+F80组)。D-gal组及柿叶黄酮治疗组于颈背部皮下注射D-半乳糖100 mg·kg-1·d-1,连续用药60天建立衰老模型,D-gal+F40组和D-gal+F80组分别以40、80mg·kg-1·d-1的柿叶黄酮提取物灌胃干预。NC组与D-gal组以同样方法给予等体积生理盐水。应用Morris水迷宫试验测试各组小鼠逃避潜伏期(escape latency,EL)及穿越平台次数;试剂盒测定小鼠脑组织超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活性及丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量;酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)及免疫组织化学方法检测脑组织炎性因子、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)及白介素-1β(interleukin-1beta,IL-1β)的表达。结果与NC组相比,D-gal组衰老小鼠EL延长、穿越平台次数减少;脑内氧化应激及炎性因子水平显著升高。D-gal+F40组和D-gal+F80组较D-gal组EL明显降低、穿越平台次数显著增加;脑组织SOD、GSH-Px活性升高,MDA含量降低;同时炎性因子TNF-α和IL-1β的表达减少。结论柿叶黄酮类化合物能够明显改善亚急性衰老小鼠学习记忆能力,提高脑组织的抗氧化能力,降低脑内炎症水平,具有延缓脑衰老的作用。

柿叶提取物对HEK293-APPswe转基因细胞模型的抗氧化作用及对Nrf2/HO-1途径的影响

目的:观察柿叶提取物(PLE)对阿尔茨海默病细胞模型HEK293-APPswe(20E2)的抗氧化应激的影响,并从核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶1(HO-1)信号通路研究其作用机制。方法:Western blot检测APP蛋白表达水平,ELISA检测各组细胞上清Aβ_(1-40)的量,确定细胞模型是否建立成功。用CCK-8检测不同浓度的柿叶提取物对细胞活性的影响,选定干预最佳浓度。设分组:SH-SY5Y为空白对照组(NC组),20E2为模型组(20E2组),用柿叶提取物干预为加药组(20E2+PLE组)。DCFH-DA荧光探针检测各组细胞内ROS的变化,ELISA检测各组细胞上清Aβ_(1-42)的量,Western blot检测胞核、胞浆Nrf2和全细胞HO-1蛋白的表达水平变化。结果:与模型组相比,加药组ROS表达减少,细胞外Aβ_(1-42)浓度降低,细胞核内Nrf2表达增多,HO-1蛋白含量增加。结论:柿叶提取物能有效降低模型组氧化应激的水平,可能是通过降低Aβ_(1-42)的聚集,激活Nrf2/HO-1信号途径,促进Nrf2合成和核转位,从而促进下游抗氧化蛋白HO-1的表达来减弱氧化应激的损伤。氧化应激的影响,并从测APP蛋白表达水平,提取物对细胞活性的影提取物干预为加药组量,Western blot检测胞外Aβ_(1-42)浓度降低,细胞是通过降低Aβ_(1-42)的聚氧化应激的损伤。

吡格列酮对胰岛素抵抗大鼠认知功能及脑组织AGE-RAGE损伤途径的影响

目的探讨吡格列酮（PIO）对高果糖诱发的胰岛素抵抗（IR）大鼠认知功能及脑组织糖基化终末产物（ACEs）．AGEs受体（RAGE）损伤途径的影响。方法45只6～8周龄Wistar大鼠分为正常对照组（NC组）、胰岛素抵抗组（IR组）、吡格列酮组（PIO组），后两组给予饮用10％的果糖水建立胰岛素抵抗模型。模型成功的PIO组给予吡格列酮干预12周后，采用Morris水迷宫试验检测逃避潜伏期；免疫荧光技术检测脑组织AGEs表达；Western blotting检测脑组织过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）、RAGE、磷酸化核转录因子-κB（Phospho-NF-κB）的蛋白表达。结果①IR组与PIO组逃避潜伏期较NC组明显延长，差异有统计学意义（P〈0．01或P〈0．05）；PIO组逃避潜伏期较IR组明显缩短，差异有统计学意义（P〈0．01）。②免疫荧光检测结果显示，PIO组、IR组AGEs表达较NC组明显增强；与IR组相比，PIO组AGEs的表达较弱。③与NC组相比，IR组和PIO组磷酸化NF-κB、RAGE的蛋白表达升高（P〈0．01），PPARγ表达降低（P〈0．05）；与IR组相比，PIO组磷酸化NF-κB、RAGE的蛋白表达明显下降（P〈0．01）；PPARγ表达增加（P〈0．05）。结论胰岛素抵抗大鼠脑组织AGEs-RAGE系统活性增强可能是脑损害机制之一，吡格列酮能改善胰岛素抵抗大鼠的认知功能，抑制AGEs-RAGE通路活性，发挥脑保护作用。

RAGE阻断剂FPS-ZM1对糖基化终末产物所致大鼠脑部炎症反应的影响及机制

目的探讨RAGE受体特异性阻断剂FPS-ZM1对糖基化终末产物(AGEs)所致大鼠脑部炎症反应及认知功能的影响。方法将40只大鼠随机分为四组:生理盐水组(NC组)FPS-ZM1对照组、AGEs组和FPS-ZM1组,采用脑立体定位技术,向AGEs组及FPS-ZM1组大鼠两侧海马注射AGEs 5μl,以制造动物损伤模型,用同样方法向NC组及FPS-ZM1对照组注射等量生理盐水,以制造模型对照;造模前1 w以1 mg·kg-1·d-1FPS-ZM1向FPS-ZM1组和FPS-ZM1对照组大鼠进行腹腔注射,并连续4 w给药,AGEs组、NC组则同时注射相同体积生理盐水,造模3 w后对各组大鼠进行Morris水迷宫实验,检测各组大鼠逃逸潜伏期(EL);用Elisa检测各组大鼠海马区Aβ1~40,Aβ1~42的水平;用Western印迹检测各组大鼠RAGE,p-NF-κB和肿瘤坏死因子(TNF)-α蛋白的表达;用免疫组织化学法检测各组大鼠海马区TNF-α蛋白的表达强度。结果 AGEs组与其他各组相比,EL显著延长(P【0.01),且Aβ1~40、Aβ1~42浓度均显著升高(P【0.01);同时AGEs组RAGE、p-NF-κB和TNF-α的蛋白表达明显增强(P【0.01);FPS-ZM1干预后上述各指标均明显低于AGEs组。结论 FPS-ZM1作为RAGE受体特异性阻断剂,能作用中枢系统减少Aβ1~40,生成从而提高AGEs脑损伤大鼠的智能,并通过抑制脑组织p-NF-κB上调,减轻脑AGEs损伤引起的炎性反应。该药因能透过血脑屏障有望成为抑制阿尔茨海默样病变的有效措施。

褐藻多糖硫酸酯减轻1-甲基-4-苯基吡啶离子引起的细胞损伤和氧化应激

目的以1-甲基-4-苯基吡啶离子(1-methyl-4-phenylpyridinium,MPP+)为工具药处理MN9D细胞,建立帕金森病(Pakinson’s disease,PD)的细胞模型,观察褐藻多糖硫酸酯对细胞的保护作用,并初步探讨其作用机制。方法用不同浓度(25、50、100、200μmol/L)的MPP+处理MN9D细胞36h,50μmol/L MPP+处理MN9D细胞,时间分别为12、2436、48h,建立细胞损伤模型。用0.01、0.1、1g/L褐藻多糖硫酸酯预孵育MN9D细胞1h后,加入50μmol/L MPP+共同作用36h以探讨褐藻多糖硫酸酯的保护作用。MTT法检测细胞活力、生化法测定乳酸脱氢酶(LDH)释放量,并采用二氯荧光素乙二酯(DCF-DA)染色法检测细胞内的氧化应激水平。结果随着MPP+浓度增加或作用时间延长,MN9D细胞MTT值逐渐降低。50μmol/L MPP+处理细胞36h,MTT值明显下降,LDH释放量增加。而0.1、1g/L的褐藻多糖硫酸酯预孵育1h,可明显减轻MN9D细胞的损伤,提高MTT值并降低LDH释放量,细胞形态学改变与生化实验结果一致。50μmol/L MPP+作用12h,可使MN9D细胞的氧化应激水平明显升高,而0.1、1g/L的褐藻多糖硫酸酯预处理1h,可以拮抗MPP+引起的细胞内氧化应激水平增高。结论褐藻多糖硫酸酯可以有效拮抗MPP+对MN9D细胞的损伤作用,其机制可能与褐藻多糖硫酸酯具有抗氧化活性有关。

吡格列酮改善胰岛素抵抗大鼠脑组织Tau蛋白磷酸化水平

目的探讨胰岛素增敏剂吡格列酮(PIO)对胰岛素抵抗(IR)模型大鼠皮质Tau蛋白磷酸化水平的影响及可能的机制。方法选择Wistar大鼠46只,随机选20只分为对照组和PIO组,每组10只;另26只通过果糖喂养建立IR大鼠模型后,分为IR组和IR+PIO组,每组13只,采用免疫印迹法检测皮质Tau蛋白磷酸化、磷酸化磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(PKB)、糖原合成激酶-3β(GSK-3β)及GSK-3β位点中Ser9的磷酸化水平。结果与对照组比较,IR组大鼠皮质Tau蛋白磷酸化水平明显增高;磷酸化PI3K、磷酸化PKB和磷酸化GSK-3β蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01);而PIO能显著抑制Tau蛋白磷酸化水平,上调磷酸化PI3K、磷酸化PKB和磷酸化GSK-3β的水平(P<0.05,P<0.01);各组GSK-3β差异无统计学意义(P>0.05)。结论 IR通过抑制PI3K-丝/苏氨酸蛋白激酶通路激活,促进GSK-3β活性上调,可能是引起大鼠海马Tau蛋白过度磷酸化的重要原因;PIO可能通过降低GSK-3β活性进而抑制Tau蛋白的过度磷酸化。

血小板膜糖蛋白Ibα基因HPA-2、Kozak序列多态性与脑梗死的相关性研究

目的探讨血小板膜糖蛋白(platelet membrane glycoprotein,GP)Ibα基因HPA-2、Kozak序列多态性与脑梗死的相关性。方法选取316例经CT/MRI证实的脑梗死患者做病例组,209例与病例组年龄、性别相匹配的无脑血管病人群做对照组。采用聚合酶链反应-限制性片断长度多态性(polymerase chain reactionrestriction fragment lengthpolymorphism,PCR-RFLP)技术检测人类血小板抗原-2(human platelet antigen-2,HPA-2)及Kozak序列多态性在两组中的分布频率。结果病例组GPIbα基因HPA-2等位基因频率、基因型与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。病例组Kozak序列C等位基因频率为25.95%,对照组C等位基因频率为18.18%,两组间差异具有统计学意义(χ2=8.132 3,P<0.01)。结论GPIbα基因HPA-2序列多态性与脑梗死无相关性;Kozak序列多态性可能是脑梗死的遗传易感因素。

DSA在Moyamoya病中的应用及护理

目的:探讨DSA对Moyamoya病诊断应用及护理方法。方法:对19例经DSA确诊的Moyamoya病患者的资料进行了回顾性分析。结果:19例DSA显示不同程度的颈内动脉分叉处血管狭窄或闭塞,且存在不同程度的脑底异常血管网形成。通过术前、术中、术后全面的护理,患者无并发症发生。结论:DSA能对Moyamoya病作出明确诊断,通过全面的护理,可减少并发症的发生。

柿叶黄酮提取物抑制BV2小胶质细胞活化在体外氧糖剥夺/再灌注损伤模型中发挥抗炎作用的研究

目的在体外氧糖剥夺/再灌注(oxygen glucose deprivation/reperfusion,OGD/R)损伤模型中,研究柿叶黄酮提取物(flavonoid components extract from Diopyros Kaki,FLDK)对BV2小胶质细胞活化及炎症因子释放的抑制效应,并初步探讨其可能机制。方法将BV2小胶质细胞随机分为3组:正常对照组(control组)、氧糖剥夺/再灌注组(OGD/R组)、柿叶黄酮提取物治疗组(OGD/R+FLDK组),以氧糖剥夺3 h和再灌注24 h的方法建立OGD/R损伤模型。采用CCK-8法检测细胞活性,乳酸脱氢酶(LDH)法检测细胞损伤率,酶联免疫吸附(ELISA)法检测白介素-1α(IL-1α)、白介素-1β(IL-1β)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等炎症因子分泌,RT-PCR法检测Toll样受体4(Toll like receptor 4,TLR4)、骨髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,My D88)、核转录因子-κB(nuclear transcription factor-κB,NF-κB)的m RNA水平,Western blot法检测TLR4、MyD88、NF-κB p65蛋白表达水平及核转录因子-κB抑制蛋白(inhibitor of NF-κB,IκB)磷酸化水平。结果 CCK-8及LDH法结果显示,FLDK可显著减轻OGD/R损伤介导的BV2细胞活性下降及细胞损伤率增加(P<0.05);ELISA、RT-PCR及Western blot法结果显示,FLDK可显著降低OGD/R损伤介导的BV2小胶质细胞炎症因子释放,TLR4、My D88和NF-κB p65的m RNA及蛋白表达水平,IκB蛋白的磷酸化水平及NF-κB p65核易位(P<0.05)。结论在体外OGD/R损伤模型中,柿叶黄酮提取物抑制BV2小胶质细胞活化及炎症因子释放发挥抗炎作用的机制可能是通过抑制TLR4/My D88/NF-κB信号通路的激活实现的。

胰岛素样生长因子-1对Aβ_(25～35)诱导的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用及机制

目的观察胰岛素样生长因子(IGF)-1对Aβ_(25～35)诱导的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞损伤的保护作用,并初步探讨其可能机制。方法将SH-SY5Y细胞随机分为对照(Control)组,Aβ_(25～35)处理(Aβ_(25～35))组,IGF-1治疗(Aβ_(25～35)+IGF-1)组,Wortmannin抑制剂(Aβ_(25～35)+IGF-1+Wort)组,单纯渥曼青霉素(Wortmannin)组。CCK-8法检测细胞活力,检测乳酸脱氧酶(LDH)漏出率,判断细胞损伤程度,荧光探针DCFH-DA法检测细胞内活性氧(ROS)含量的变化,试剂盒测定丙二醛(MAD)含量及超氧化物气化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,流式细胞仪分析法测定细胞凋亡率,Western印迹法检测相关蛋白表达。结果与Aβ_(25～35)组相比,Aβ_(25～35)+IGF-1组细胞活力明显升高,LDH漏出率明显下降(P<0.05)。IGF-1可明显减少Aβ_(25～35)诱导SH-SY5Y细胞ROS及MDA生成,增加SOD及GSH-Px酶活性(P<0.05)。与Aβ_(25～35)组相比,IGF-1治疗还能增加蛋白激酶B(Akt)及叉头框蛋白(Fox)O3a磷酸化水平,降低Puma蛋白表达水平及细胞凋亡率(P<0.05)。而加入磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)特异性抑制剂Wortmannin预处理,可阻断上述IGF-1的保护作用(P<0.05)。结论 IGF-1对Aβ_(25～35)诱导的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用可能与激活PI3K/Akt信号通路有关。

糖基化终末产物对大鼠基底前脑胆碱能神经元的损伤作用

目的研究糖基化终末产物(AGE-BSA)对原代培养的基底前脑胆碱能神经元形态、生存率、凋亡率、胆碱乙酰转移酶(ChAT)与乙酰胆碱酯酶(AchE)活性的影响。在体外水平研究AGEs在阿尔茨海默病(Alzheimer's dis-ease,AD)神经元缺失发生中的作用及其可能机制。方法原代培养大鼠基底前脑胆碱能神经元,观察细胞生长变化,进行免疫荧光细胞化学鉴定;用300μg/mLAGE-BSA以及糖基化终末产物受体(RAGE)中和抗体阻断处理原代培养的基底前脑胆碱能神经元,作用不同时间后置于倒置显微镜下观察细胞形态变化;采用MTT法检测神经元的存活率;采用流式细胞术检测神经元的凋亡率;经比色法检测ChAT和AchE的活性变化。结果 AGE-BSA干预胆碱能神经元72 h后,细胞形态发生明显损伤性变化,细胞存活率明显降低,凋亡率增高,ChAT活性明显下降,AchE活性明显升高;RAGE中和抗体阻断组72 h较之AGE-BSA组,细胞形态损伤变化较轻,生存率偏高,凋亡率较低,ChAT活性较高,AchE活性偏低,但比空白对照组生存率降低,凋亡率增高,ChAT活性明显下降,AchE活性明显升高。结论糖基化终末产物作用72 h可以引起胆碱能神经元的损伤,并造成ChAT活性下降和AchE活性明显升高,部分阻断其与特异性受体RAGE的结合可以减弱其损伤作用,提示糖基化终末产物通过其受体参与了对胆碱能神经元的损伤作用。

糖基化终产物对小胶质细胞分泌IL-1β和TNF-α的影响

目的研究糖基化终产物(AGEs-BSA)对原代培养的小胶质细胞分泌白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的影响,在细胞水平探讨AGEs-BSA在阿尔茨海默病(AD)发生中的作用及其可能机制。方法体外培养小胶质细胞,用AGEs-BSA干预,用免疫细胞化学方法,进行鉴定并观察其形态变化;用AGEs-BSA300μg/mL激活和抗RAGE中和抗体阻断的方法对原代培养的小胶质细胞进行处理,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清液中IL-1β和TNF-α的水平。结果 AGEs-BSA干预后小胶质细胞胞体变大,形态不规则,呈"阿米巴样",细胞上清液中IL-1β、TNF-α浓度均明显升高(P<0.001),抗RAGE中和抗体+AGEs-BSA组细胞上清液IL-1β、TNF-α浓度较AGEs-BSA组呈下降趋势(P<0.01),但仍高于正常对照组(P<0.01)。结论 AGEs-BSA可激活小胶质细胞,诱导其释放IL-1β和TNF-α,并呈时间依赖性。提示糖基化终产物能直接或通过作用其受体激活小胶质细胞介导的免疫炎性反应。

糖基化终末产物对SH-SY5Y细胞氧化应激及凋亡的影响

目的研究糖基化终末产物(AGEs)对人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)凋亡的影响,探讨AGEs与阿尔茨海默病(AD)发病机制的关系。方法分别以不同浓度糖基化修饰的牛血清白蛋白(AGE-BSA)处理SH-SY5Y细胞48 h,选取AGE-BSA敏感浓度(200μg/mL)处理细胞不同时间,流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率,确定AGE-BSA诱导SH-SY5Y凋亡最佳浓度及时间。将细胞随机分为对照组、牛血清白蛋白(BSA)对照组、AGE-BSA组、AGE-BSA+抗RAGE中和抗体组、AGE-BSA+α-硫辛酸组、AGE-BSA+DPI(NADPH氧化酶抑制剂)组。FCM检测细胞凋亡率变化,Hoechst 33258染色观察细胞形态改变,应用活性氧荧光探针DCFH-DA检测活性氧(ROS)水平,Western blot测定Caspase-12的表达。结果细胞凋亡率随AGE-BSA浓度增加及作用时间延长而升高,200μg/mL AGE-BSA作用48 h细胞凋亡率从对照组的(2.23±0.08)%增加到(16.8±1.27)%(P<0.05),同时,Hoechst染核后可见典型凋亡形态改变,细胞内ROS水平显著增高,Caspase-12蛋白表达明显上调,与对照组相比差异显著(P<0.05),而分别用抗RAGE中和抗体、α-硫辛酸、DPI预处理后再加入AGE-BSA,各组与AGE-BSA组比较,凋亡率明显下降,ROS水平、Caspase-12蛋白表达均明显降低(P<0.05)。结论糖基化终末产物可刺激SH-SY5Y细胞产生大量ROS及活化Caspase-12介导细胞凋亡,通过阻断其与特异性受体RAGE结合或减少细胞内ROS可减轻细胞凋亡的发生。

环氧化酶2基因多态性与动脉粥样硬化缺血性脑卒中的相关性

目的探讨中国汉族人环氧化酶2的单核苷酸多态性位点及单元型与动脉粥样硬化缺血性脑卒中的关系。方法对626名缺血性脑卒中患者和604名健康者检测环氧化酶2的两个多态位点:-1195G/A和8473T/C,并对每个基因位点和两个位点的单元型进行分析。结果8473T/C位点的基因型TC在疾病组中明显增多(经混杂因素校正后,OR=1.329,95%CI=1.028-1.719),单元型A-1195C8473的比率在疾病组较对照组高,Logistic回归分析显示带有单元型A-1195C8473的个体更容易患缺血性脑卒中(经混杂因素校正后,OR=1.372,95%CI=1.070-1.760)。结论在汉族人环氧化酶2的基因型TC(8473T/C位点)和单元型A-1195C8473可能是脑梗塞的遗传易感因素。

褐藻多糖硫酸酯对6-羟基多巴胺所致MN9D细胞损伤的保护作用及其机制

目的以6一羟基多巴胺（6一OHDA）为工具药，建立帕金森病（PD）的细胞模型，观察褐藻多糖硫酸酯（Fuc）对细胞模型的保护作用并初步探讨其作用机制。方法用不同浓度（12．5、25、50、100、200μmol／L）的6-OHDA处理MN9D细胞24h，挑选出合适浓度50μmol／L。再以50μmolfL6-OHDA处理MN9D细胞不同时间（6、12、24及48h），建立细胞损伤模型，挑选出合适时间24h。用0．01、0．1、1．0mg／mLFuc预孵育MN9D细胞1h后加入50μmol／L6-OHDA共同作用24h，以探讨Fuc的保护作用。MTT法检测细胞存活率，生化法测定乳酸脱氢酶（LDH）释放量．二氯荧光素乙二酯（DCF—DA）染色法检测细胞内的氧化应激水平。结果随着6．OHDA浓度增加或作用时间延长，MN9D细胞MTT值逐渐降低。50μmol/L6．OHDA处理细胞24h，MTT值明显下降，LDH释放量增加。而0．1、1．0mg／mL的Fuc预孵育1h可明显减轻MN9D细胞的损伤，提高MTT值并降低LDH释放量，细胞形态学改变与生化实验结果一致。50μmol/L6-OHDA作用8h可明显升高MN9D细胞内的氧化应激水平，而1．0mg／mL的Fuc预处理1h可以拮抗6-OHDA引起的细胞内氧化应激水平增高。结论Fuc可以有效的拮抗6-OHDA对MN9D细胞的损伤作用，其作用机制可能与抗氧化活性有关。

FPS-ZM1对糖基化终产物诱导海马区Aβ代谢水平的影响

目的观察RAGE受体阻断剂FPS-ZM1对高级糖基化终产物(AGEs)诱导海马区Aβ及相关代谢因素表达水平的影响。方法将40只大鼠随机分为生理盐水组(NC组)、FPS-ZM1对照组、AGEs组和FPS-ZM1组。向大鼠海马区注射AGEs,以建立AGEs脑损伤模型,并用FPS-ZM1干预。造模3周后HE染色观察海马区神经元病理改变;Morris水迷宫实验检测逃逸潜伏期(EL);蛋白印迹法检测各组RAGE、p-NF-κB、BACE1和APP的蛋白表达;酶联免疫吸附法检测各组Aβ1-40、Aβ1-42的水平。结果与NC组、FPS-ZM1对照组相比,AGEs组及FPS-ZM1组海马神经元排列疏松,p-NF-κB、BACE1和APP的蛋白表达和Aβ1-40、Aβ1-42浓度均升高(P<0.01);但FPS-ZM1组上述改变均明显低于AGEs组,同时AGEs组RAGE表达明显增强,EL显著延长(P<0.01),但FPS-ZM1组与NC组和FPS-ZM1对照组相比无统计学差异(P>0.05)。结论 RAGE受体阻断剂FPS-ZM1能通过降低Aβ及相关代谢因素的表达水平,有效抑制AGEs所致的脑损伤。

糖基化终末产物促SH-SY5Y细胞β-淀粉样蛋白生成及相关机制

目的通过研究糖基化终末产物(AGEs-BSA)对培养的人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)β-淀粉样蛋白(Aβ)的生成,以及淀粉样前体蛋白(APP)及相关酶—β-分泌酶(BACE1)、γ-分泌酶(PS1)的表达的影响,在体外水平探讨AGEs-BSA在阿尔茨海默病(AD)发病中的作用及其可能的机制。方法以培养的SH-SY5Y细胞为模型,将细胞随机分为4组。用MTT实验得到的AGEs-BSA最佳干预时间及浓度干预细胞,用免疫细胞化学方法及ELISA方法观察及检测各组细胞内Aβ1-40、Aβ1-42表达,用免疫印迹法检测各组细胞内APP、BACE1、PS1变化。结果 BSA组与空白对照组相比APP、BACE1、PS1、Aβ的表达无明显差异(P>0.05);AGEs-BSA组与BSA组相比APP、BACE1、PS1、Aβ的表达明显增加(P<0.05);AGEs-BSA+抗RAGE中和抗体组APP、BACE1、PS1、Aβ的表达较单纯AGEs-BSA组明显减少(P<0.05),但仍高于BSA组(P<0.05)。结论 糖基化终末产物能够促使SH-SY5Y细胞中APP的表达增加,并通过上调BACE1、PS1的活性使Aβ生成增加。通过阻断其与特异性受体RAGE的结合可以部分减少APP、BACE1、PS1及Aβ的表达和生成。

糖基化终末产物对大鼠海马结缔组织生长因子与炎症因子表达的影响

目的探讨糖基化终末产物(AGEs)对大鼠海马区结缔组织生长因子(CTGF)与炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子(TNF-α)表达的影响及其可能的机制。方法 50只Wistar大鼠随机分为5组(每组10只),各组用微量注射泵海马内注射法制造动物损伤模型。3周后:通过免疫组织化学检测各组大鼠海马转化生长因子β1(TGF-β1)、CTGF表达;通过Westernblot检测大鼠海马TGF-β1、CTGF以及炎症因子IL-1β和TNF-α表达并进行蛋白半定量分析。结果在AGE-BSA组大鼠的大脑海马区神经元内TGF-β1、CTGF着色呈棕黄色,颜色灰度明显高于正常对照组;AGE-BSA组TGF-β1、CTGF、IL-1β和TNF-α蛋白表达明显高于正常对照组(P<0.01);与AGE-BSA组比较,RAGE中和抗体组TGF-β1、CTGF、IL-1β和TNF-α蛋白表达明显减少(P<0.05)。结论糖基化终末产物通过与其受体(RAGE)结合促进TGF-β1的表达上调,进而导致海马区神经元内CTGF的高表达,而且可以造成炎症因子IL-1β和TNF-α表达增多。

胰岛素抵抗大鼠脑组织APP代谢及其相关酶的表达及吡格列酮的干预效果

目的观察胰岛素抵抗(IR)大鼠脑组织β-淀粉样蛋白(Aβ)、淀粉样前体蛋白(APP)及其代谢相关酶的表达及吡格列酮(PIO)的干预效果。方法从45只Wistar大鼠中随机选取10只作为对照组(NC组),35只给予10%果糖水诱发胰岛素抵抗,4周后根据胰岛素抵抗指数(IRI),将制作成功的胰岛素抵抗模型26只大鼠随机分为IR组、PIO组。PIO组灌服吡格列酮(10 mg.kg-1.d-1)12周,IR组和NC组给予相同体积的生理盐水。免疫组化法观察大鼠海马Aβ42的表达;免疫印迹法检测大鼠脑APP、β-分泌酶(BACE1)、γ-分泌酶(PS1)的变化。结果IR组和PIO组大鼠海马Aβ42的表达明显高于NC组,与IR组相比,PIO组表达明显减低(P<0.01);与NC组相比,IR组和PIO组大鼠脑组织APP、BACE1及PS1的表达增高,PIO组表达较IR组减少(P<0.05)。结论胰岛素抵抗大鼠脑组织通过上调BACE1、PS1活性,使Aβ42生成增加;吡格列酮能抑制BACE1、PS1的表达,减少Aβ42生成。

柿叶黄酮提取物对氧糖剥夺/复糖复氧损伤的HT22细胞氧化应激的保护作用

目的探讨柿叶黄酮提取物(FLDK)对氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R)损伤的HT22细胞氧化应激的影响及其可能机制。方法将HT22细胞随机分为正常对照组(Control组)、OGD/R组、OGD/R+FLDK治疗组(OGD/R+FLDK组)、OGD/R+FLDK+转录因子NF-E2相关因子(Nrf2)基因沉默组(OGD/R+FLDK+si-Nrf2组)。对HT22细胞氧糖剥夺3 h并复糖复氧24 h建立OGD/R模型;FLDK为自氧糖剥夺开始即加入,一直持续到复糖复氧结束;利用si-Nrf2阻断Nrf2通路。采用CCK-8法检测细胞活性,乳酸脱氢酶(LDH)法测定细胞损伤率,试剂盒法测定丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)荧光探针检测胞内活性氧(ROS)水平,Western blotting法检测Nrf2及血红素氧合酶-1(HO-1)蛋白表达。结果与Control组相比,OGD/R组细胞活性下降(P<0.001),细胞损伤率升高(P<0.001),氧化产物ROS及M DA含量增加(P<0.001),抗氧化酶SOD及GSH-Px活性下降(P<0.001),全细胞HO-1蛋白表达升高(P=0.009)及胞核Nrf2蛋白表达升高(P=0.016);与OGD/R组相比,FLDK治疗可使细胞活性升高(P<0.001),细胞损伤率降低(P<0.001),氧化产物ROS及MDA含量下降(P<0.001),抗氧化酶SOD及GSH-Px活性升高(P<0.001),全细胞HO-1蛋白表达升高(P<0.001)及核内Nrf2蛋白表达升高(P=0.005);与OGD/R+FLDK组相比,进行Nrf2基因沉默预处理后,HO-1蛋白表达下降(P<0.001)及胞核Nrf2蛋白表达下降(P<0.001),ROS含量增加(P<0.001),细胞活性下降(P<0.001)。结论柿叶黄酮提取物对OGD/R损伤的HT22细胞氧化应激具有保护作用,其机制可能与激活Nrf2/HO-1信号通路有关。