LncRNA HOTAIR通过靶向miR-204-5p调控BCL2促进肺癌进展

目的与背景HOX转录反义RNA(HOX transcript antisense RNA,HOTAIR)是一种长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA),广泛参与多种恶性肿瘤的进展。HOTAIR可能参与了肺癌的进展,本研究旨在阐明HOTAIR对肺癌进展的作用及其潜在的分子机制。方法采用实时荧光定量PCR(real time quantitative PCR,RT-qPCR)检测HOTAIR和miR-204-5p在肺癌组织和肺癌细胞中的表达水平。采用MTT和流式细胞术检测细胞增殖和凋亡情况。采用双荧光素酶报告基因检测系统和RT-qPCR分析HOTAIR和miR-204-5p之间,以及miR-204-5p和B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcell lymphoma/leukemia2,BCL2)之间的作用。采用蛋白质免疫印迹检测BCL2的表达水平。结果在肺癌组织和细胞株中,HOTAIR表达水平升高,而miR-204-5p的表达水平降低,并且HOTAIR与miR-204-5p的表达呈负相关。HOTAIR可促进肺癌细胞增殖,抑制肺癌细胞凋亡。HOTAIR可作为miR-204-5p的海绵,发挥竞争性内源RNA(competing endogenousRNA,ceRNA)作用。miR-204-5p表达上调后,HOTAIR对肺癌细胞增殖和凋亡的作用发生逆转。此外,miR-204-5p可靶向BCL2,HOTAIR通过调控miR-204-5p影响BCL2表达。结论 HOTAIR可通过miR-204-5p调控BCL2表达,进而促进肺癌细胞的生长,抑制细胞凋亡,HOTAIR/miR-204-5p/BCL2轴可能是肺癌中新的调控机制和潜在治疗靶点。

洋地黄毒苷抑制PI3K/AKT信号通路对下咽癌Fadu细胞增殖和凋亡影响

目的探讨强心苷药物洋地黄毒苷对下咽癌Fadu细胞增殖和凋亡的影响,并初步探讨其可能的作用机制。方法 0、50、100、200和400nmol/L的洋地黄毒苷不同时间点处理Fadu细胞,细胞计数试剂(CCK-8)和三磷酸腺苷(ATP)发光法检测Fadu细胞增殖,Annexin Ⅴ-FITC/PI双标流式细胞术和Caspase3/7活细胞荧光实时法检测细胞凋亡,蛋白质印迹法检测PI3K和AKT总蛋白和磷酸化蛋白水平。结果细胞增殖检测结果显示,洋地黄毒苷剂量和时间依赖性抑制FaDu细胞增殖,48h后,CCK-8检测值分别为0.73±0.02、0.63±0.02、0.43±0.02和0.23±0.02,低于对照组的1.27±0.05,F浓度=17 810.000,P<0.001;F时间=230.900,P<0.001;F时间×浓度=292.100,P<0.001,IC50值为102nmol/L。而ATP检测值为360 175.00±15 432.88、277 193.00±20 311.25、212 869.66±9 955.65和164 726.66±12 536.46,低于对照组的682 460.66±37 594.12,F浓度=345.600,P=0.003;F时间=120.700,P<0.001;F时间×浓度=95.000,P<0.001。细胞凋亡检测结果显示,随着洋地黄毒苷浓度增加,FaDu细胞的凋亡率增加到(20.42±1.54)%和(34.58±2.16)%,高于对照组的(11.94±1.39)%,F浓度=130.100,P<0.001;而凋亡相关蛋白Caspase3/7的活性增加到33 986.00±2 513.50和43 786.33±1 736.32,高于对照组的22 652.66±2 162.53;F浓度=71.860,P<0.001。蛋白质印迹法分析结果显示,洋地黄毒苷能剂量性的降低p-PI3K蛋白到0.51±0.04和0.18±0.002,低于对照组的1.00±0.07,F浓度=276.400,P<0.001;而p-AKT蛋白降低到0.46±0.03和0.13±0.004,低于对照组1.00±0.05,F浓度=483.500,P<0.001。结论洋地黄毒苷可能通过抑制PI3K/AKT信号通路诱导下咽癌细胞的凋亡,抑制细胞增殖。