半导体激光诱导大鼠脉络膜新生血管模型的实验研究

目的:评价532nm半导体激光诱导棕色挪威(brown norway,BN)大鼠脉络膜新生血管(choroidal neovasularization,CNV)模型的可行性。方法:使用半导体激光(功率150 mW,光斑直径75μm,曝光时间0.1 s)对10只BN大鼠建立CNV模型。分别于光凝后7、14、21和28 d随机选取5只行眼底荧光素血管造影术(fundus fluorescein angiogrphy,FFA)和光学相干断层成像术(optical coherence tomography,OCT)检查,比较FFA早期(<2 min)和晚期(>10 min)荧光渗漏斑数/平均渗漏面积(mm2)的变化,并行统计学分析。结果:光凝后FFA检查经组间两两比较,142、1和28 d的早期荧光渗漏斑数/渗漏面积差异无统计学意义(P>0.05),14、21和28 d与7 d相比差异有统计学意义(P<0.05);7、14、21和28 d早期和晚期荧光渗漏斑数差异无统计学意义(P>0.05)。激光斑视网膜的平均厚度与平均荧光渗漏面积有相关性(r=0.73,P<0.05)。结论:半导体激光诱导BN大鼠的CNV模型是可行的。FFA联合OCT可有效检测CNV的形成和变化。

芪参益气滴丸对实验性动脉粥样硬化斑块组织学的影响

目的利用高分辨率超声血管成像技术观察芪参益气滴丸对实验兔的腹主动脉粥样硬化斑块组织结构的影响。方法20只兔喂养高胆固醇饲料,12周末将16只模型兔随机分为自然消退组和中药组,药物干预12周,分别于实验开始、12周末和24周末应用超声血管成像技术,测量用药前后实验兔的腹主动脉内中膜厚度(Intima-Media Thickness,IMT)、内中膜及外膜图像平均回声强度(Average Image Intensity,AⅡ)。结果芪参益气滴丸治疗组与自身治疗前相比,AⅡ的校正值(AⅡc%)显著增大(P<0.01),而IMT显著减少(P<0.01);治疗后2组IMT有显著差异(P<0.01)。结论芪参益气滴丸在一定程度上通过改变斑块的组织结构,增大斑块密度,从而起到稳定斑块的作用。

心肝宝胶囊对STZ诱导的糖尿病大鼠早期肾损伤的保护作用及其机制研究

目的探讨心肝宝胶囊对链尿佐菌素(streptozocin,STZ)诱导的糖尿病(diabetes mellitus,DM)大鼠早期肾损伤的保护作用及其机制。方法选取24只雄性Wistar大鼠建立STZ DM动物模型。造模后随机分为模型组、心肝宝胶囊治疗组[中药组,0.5g/(kg·d)]及贝那普利治疗组[西药组,4mg/(kg·d)],每组8只,另选取8只大鼠作为空白对照组(空白组)。模型组与空白组给予等量自来水灌胃,连续干预8周。干预4、8周末检测各组大鼠血糖,8周后观察24h尿蛋白(24h urine protein,24hUP)、血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)和肌酐(serum creatinine,SCr),采用免疫组化法检测转化生长因子-β1(transforming growth factor-beta1,TGF-β1)、层黏连蛋白(laminin,LN)、Ⅳ型胶原蛋白(collagenⅣ,Col-Ⅳ)的表达,采用RT-PCR法检测肾脏TGF-β1、组织金属蛋白酶抑制剂-1(tissue inhibitor of matrix metalloproteinase-1,TIMP-1)及纤溶酶原激活物抑制剂(plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)mRNA的表达,行HE、PAS和Masson染色观察肾脏病理变化。结果与空白组比较,DM大鼠造模后出现血糖升高、多饮、多食、多尿、体重减轻、消瘦、体毛枯燥无光泽、易激惹等表现,干预8周后两个用药组症状减轻。与空白组比较,模型组24hUP、SCr、血糖、Col-Ⅳ、LN、TGF-β1阳性表达量,TGF-β1、TIMP-1及PAI-1mRNA,肾小球面积(GA)、细胞外基质(ECM)及ECM/GA均升高,差异均有统计学意义(P<0.01),病理改变可见明显肾小球体积增大,毛细血管袢扩张,小球系膜细胞增生,系膜区基质增多,增宽,基底膜增厚,肾小管排列紊乱,部分上皮细胞可见空泡变性、脱落,可见蛋白管型,间质有炎性细胞浸润。与模型组比较,两个用药组各指标均降低,差异均有统计学意义(P<0.01),病理改变较轻,系膜细胞轻度增生,系膜基质轻度增多。中药组SCr、PAI-1mRNA表达低于西药组(P<0.05),两个用药组其他指标比较,差异无统计意义(P>0.05)。结论心肝宝胶囊对STZ诱导的糖尿病大鼠早期肾损伤有一定保护作用及抗肾小球纤维化作用,其机制可能与下调TGF-β1、TIMP-1、PAI-1及Col-Ⅳ的表达,减少细胞外基质,减少尿蛋白有关。

多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶在心血管疾病中的研究进展

氧化应激、亚硝酸盐、电离辐射等可损伤DNA,使DNA出现切口或断裂.细胞为维持正常功能,激活多种DNA修复酶,对DNA进行修复.多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶[poly （ADP-ribose）polymerase,PARP]作为DNA修复酶之一,可被损伤的DNA激活.

未折叠蛋白应答在晶状体上皮细胞凋亡中的作用

目的探讨内质网应激中未折叠蛋白应答在晶状体上皮细胞(hLECs)凋亡中的作用及其与白内障发病机制的关系。方法将hLECs分为对照组和实验A、B、C、D组,分别用0、1、2、5、10 mmol/L的同型半胱氨酸(Hcy)作用细胞24 h,应用MTT法检测不同浓度药物对细胞的增殖抑制率;应用Hoechst33258荧光染色检测细胞凋亡率;应用活性氧荧光探针DCFH-DA检测刺激后细胞中活性氧产物(ROS);应用GSH试剂盒检测刺激后细胞中还原型谷胱甘肽(GSH)的含量;应用Western blot技术检测刺激后细胞中的GRP78和Caspase-12的表达。结果不同浓度的Hcy刺激晶体上皮细胞后,细胞活力呈浓度依赖性下降,其中5 mmol/L,10 mmol/L Hcy可使细胞活性下降48.3%,57.7%,与对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.01),并且能诱导细胞的明显凋亡;与对照组相比,C、D组细胞中ROS水平呈浓度依赖性升高,GSH含量减少,GRP78和Caspase-12表达显著升高(P均<0.05)。结论高浓度的内质网刺激因子可刺激晶体上皮细胞产生内质网应激,并通过未折叠蛋白应答导致晶状体上皮细胞凋亡,产生白内障。

尿毒清对慢性肾功能衰竭大鼠肾脏纤维化的影响

目的探讨尿毒清对慢性肾功能衰竭大鼠肾脏纤维化的影响。方法36只大鼠随机分为3组,正常对照组、手术对照组及尿毒清组。除正常对照组外,余均采用左侧肾脏切除加尾静脉重复注射阿霉素的方法制作慢性肾功能衰竭大鼠模型。术后1周正常对照组和手术对照组每天灌胃同体积生理盐水,尿毒清组给予尿毒清混悬液3g/(kg.d)灌胃,共给药8周。于第4、8周测量24h尿蛋白定量、肾功能,第8周光镜下观察肾脏病理变化,应用免疫组织化学SABC法测定肾组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、胶原Ⅳ(COLIV)的表达。结果与正常对照组比较,手术对照组24h尿蛋白、血尿素氮(Bun)、血清肌酐(SCr)明显升高(P<0.01),肾组织α-SMA、COLIV的表达较高(P<0.01)。尿毒清组尿蛋白、Bun、Scr均较手术对照组明显下降,肾组织α-SMA和COLIV的表达低于手术对照组(P<0.01)。结论尿毒清可减少蛋白尿的排泄,改善肾功能,抑制肾小管上皮细胞表型转化,延缓肾脏纤维化。

钠-葡萄糖协同转运蛋白2抑制剂达格列净对糖尿病心肌病小鼠心肌重构的影响

目的 探讨钠-葡萄糖协同转运蛋白2抑制剂达格列净对糖尿病心肌病小鼠心肌重构的影响及机制.方法 2021年1-12月选取60只6周龄雄性C57BL/6J小鼠,建立糖尿病心肌病鼠40只,成模28只,未干预组、达格列净治疗组(干预组)1∶1配比各14只,另外20只小鼠为对照组.干预组小鼠应用达格列净灌胃12周,超声检测各组小鼠心脏结构与功能,组织学与电镜评估心肌纤维化程度,酶联免疫吸附法检测炎症因子浓度,原位末端标记(TUNEL)染色观察心肌细胞凋亡,二氢乙锭荧光染色评价心肌氧化应激水平.结果 实验末干预组小鼠体重与空腹血糖略低于未干预组,但差异无统计学意义(P>0.05),而左心室射血分数优于未干预组[(61.07±4.66)%比(45.8±4.80)%(t=-5.24,P<0.05)];组织学结果显示干预组小鼠心肌肥厚、心肌细胞排列紊乱较未干预组减轻,胶原容积分数亦降低[(18.4±1.9)%比(31.8±3.7)%,t=-12.0,P<0.05].进一步研究结果显示,干预组小鼠炎症因子浓度降低,白介素-6(82.19±10.90)ng/L比(291.02± 31.02)ng/L(t=23.8);肿瘤坏死因子-α(70.45±12.13)ng/L 比(201.31±27.10)ng/L(t=16.5),穿透素 3(13.05±2.04)μg/L(42.40±1.26)μg/L(t=45.8),均 P<0.05;心肌凋亡指数 1.736±0.247比0.864±0.129(t=11.7,P<0.05),心肌氧化应激水平干预组1.274±0.298较未干预组2.655± 0.252改善(t=-13.3,P<0.05).结论 达格列净通过减轻心肌氧化应激和炎性反应改善心肌肥厚并抑制心肌纤维化,起到干预糖尿病小鼠心肌重构的作用,最终保护糖尿病心肌病小鼠的心功能.

血管紧张素Ⅳ型受体过表达对早期动脉粥样硬化斑块形成的影响

目的探讨血管紧张素Ⅳ型受体(AT4R)过表达对早期动脉粥样硬化斑块形成的影响及可能机制。方法Apo E-/-小鼠60只高脂饮食喂养4周后,随机分为AT4R过表达组(Ad-AT4R组)、空载体组(Ad-EGFP组)和PBS空白对照组,每组20只。分别通过尾静脉注射携带有AT4R的腺病毒、腺病毒空载体及PBS溶液。继续高脂饮食4周后处死小鼠,留取血样及血管组织。检测血糖及血脂各项指标;采用苏木精-伊红染色法及油红O染色检测主动脉根部斑块面积百分比。结果与空白对照组和Ad-EGFP组相比,Ad-AT4R组体质量、血糖及血脂无显著性差异(P>0.05),苏木精-伊红染色及油红O染色斑块面积百分比显著降低(P<0.05)。结论 AT4R过表达可抑制早期动脉粥样硬化斑块的形成,且不依赖于对血糖、血脂水平的调节。因此,AT4R可能存在潜在抗动脉粥样硬化的作用。

G蛋白偶联受体40激动剂TAK-875亚砜类似物的合成、绝对构型确证及生物活性研究

G蛋白偶联受体40(GPR40)是治疗二型糖尿病的潜在靶点.本研究首先合成TAK-875(1)作为检测GPR40激动活性的对照药物.进一步合成化合物1的亚砜类似物11.手性制备HPLC分离化合物11得到光学纯化合物12(S,S,100.0%de)和13(R,S,100.0%de).其绝对构型通过圆二色谱确证.评价化合物1(EC_(50)=84.3 nmol·L^(-1)),11(EC_(50)=77.5nmol·L^(-1)),12(EC_(50)=76.1 nmol·L^(-1)),13(EC_(50)=114.0 nmol·L^(-1))对GPR40的激动活性,发现所合成的化合物体外保持了对照药物的活性.并通过计算机模拟对接的方法对活性保持的原因进行了解释.鉴于化合物12和13的良好活性与绝对构型的差别,下一步可分别对它们的成药性进行评价.

线粒体乙醛脱氢酶2在心肌缺血再灌注损伤中的作用

一、乙醛脱氢酶（aldehyde dehydrogenase，ALDH）2的基本知识 ALDH是一种四联体蛋白，是人体内乙醇代谢的关键酶之一。乙醇在体内首先经乙醇脱氢酶（ethanol dehydrogenase，ADH）代谢为乙醛，再由ALDH代谢为乙酸进入三羧酸循环。

粉红胶霉菌对糖尿病大鼠肾组织TGF-β_1、TIMP-1及PAI-1表达的影响

目的探讨粉红胶霉菌对糖尿病大鼠肾组织中转化生长因子β1(TGF-β1)、金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)、纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)表达水平的调节及其与糖尿病肾脏病变的关系。方法将24只正常雄性Wistar大鼠随机分为空白对照组(N组)8只,糖尿病模型组(M组)8只,粉红胶霉菌治疗组(G组)8只,其中M组、G组应用链尿佐菌素(STZ)6.5mg/100g腹腔注射建立糖尿病大鼠模型。G组成模后给予粉红胶霉菌0.05g/100g.d灌胃,M组与N组给予等量生理盐水灌胃,每4周末监测血糖,8周后观察24h尿蛋白定量及血尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)在血清中的浓度水平,同时行HE、PAS和MASSON染色观察肾脏病理变化,采用实时荧光定量RT-PCR法检测肾脏TGF-β1、TIMP-1及PAI-1mRNA的表达。结果 M组和G组SCr、BUN水平及24h尿蛋白定量明显高于N组(P<0.01),M组上述指标显著升高,与G组比较亦有统计学意义(P<0.01)。肾组织病理学观察N组无明显异常,M组出现肾小球肥大,肾小球内细胞外基质蓄积,基底膜增厚,系膜细胞增生指标明显高于N组(P<0.01),G组病变轻于M组。G组TGF-β1、TIMP-1及PAI-1mRNA的表达均明显低于M组,但高于N组(P<0.01)。结论粉红胶霉菌对STZ诱导的糖尿病大鼠早期肾损伤有一定保护作用及抗肾小球纤维化作用,其机制可能是通过下调TGF-β1、TIMP-1和PAI-1mRNA的表达、减少细胞外基质、减少尿蛋白来实现的。

血清CTRP9、APN水平与急性冠脉综合征的相关性

目的探讨血清C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白9(CTRP9)、脂联素(APN)水平与急性冠脉综合征(ACS)及冠脉病变程度的关系及可能的作用机制。方法结合临床表现和冠状动脉造影术(CAG)造影结果将61例冠心病(CHD)患者分为不稳定型心绞痛组(UAP组,n=18),急性心肌梗死组(AMI组,n=18),稳定型心绞痛组(SAP组,n=25),另取CAG检查无狭窄的正常对照组(CON组,n=26)。其中UAP组和AMI组合称为急性冠脉综合征组(ACS组),UAP组、AMI组和SAP组合称为冠心病组(CHD组)。采用酶联免疫吸附试验检测血清CTRP9、APN水平,同时检测血脂、血糖水平。采用Pearson相关分析和多元回归分析方法分析CTRP9、APN与ACS及冠脉病变程度的相关性。结果 CHD组APN水平显著低于对照组(P<0.05);ACS组CTRP9水平显著低于对照组(P<0.01)和SAP组(P<0.05),APN水平显著低于对照组(P<0.01);AMI组CTRP9水平显著低于SAP组(P<0.01)。血清CTRP9与APN正相关(r=0.742,P<0.01),与FPG负相关(r=0.592,P<0.01),在CHD组与HDL-C水平正相关(r=0.254,P<0.05)。血清CTRP9、APN与Gensini积分负相关(r=0.579、0.777,P均<0.01)。结论 CTRP9、APN与ACS及冠状动脉病变程度相关,能为ACS和冠脉病变程度的诊断与评估提供较便利的预测指标。

肾衰宁对糖尿病大鼠肾脏损伤的保护作用

目的探讨肾衰宁对糖尿病大鼠肾脏的保护作用及可能机制。方法雄性Vista大鼠24只,随机选取8只作为正常对照组(N组),其余16只注射链脲佐菌素(STZ)制成糖尿病模型,并随机分为糖尿病肾病组(DN组,n=8)和肾衰宁治疗组(S组,n=8),给药8周。检测血糖、肾功能、24h尿蛋白定量等指标,并进行肾脏病理学检查及免疫组化测定肾组织中转化生长因子β1(TGF-β1)、层黏连蛋白(LN)及Ⅳ型胶原蛋白(ColⅣ)的表达。结果与N组相比,DN组和S组血糖、血肌酐、尿素氮、24h尿蛋白均明显增加(P<0.01),肾组织中TGF-β1、LN及ColⅣ表达明显升高(P<0.01);与DN组相比,S组除血糖外(P>0.05),其余指标均明显降低(P<0.01)。结论肾衰宁在糖尿病的肾损伤过程中具有保护作用,可降低尿蛋白,改善肾功能,并通过下调肾脏TGF-β1的表达,抑制细胞外基质(ECM)成分的积聚,从而延缓肾脏纤维化的进程。

抗凋亡转录因子在肝细胞肝癌中的表达及预后作用

目的分析抗凋亡转录因子(AATF)在肝细胞肝癌(LIHC)中的表达及意义。方法分别利用基因表达谱交互式分析(GEPIA)和人类蛋白质图谱(HPA)分析AATF mRNA与蛋白在肝细胞肝癌(LIHC)组织及对照组织的差异表达及定位;通过c BioPortal分析AATF在LIHC基因组改变及与AATF相互作用的蛋白质网络;通过Kaplan-M eier Plotter分析AATF对肝癌患者5年生存期及总生存期的影响;通过Tumor Immune Estimation Resource分析AATF与LIHC患者生存期的相关性。结果与对照组织相比,AATF的mRNA(P<0.05)及蛋白表达水平在LIHC组织中显著上调,其蛋白在两种组织的细胞膜及细胞质中均有定位。AATF的基因组改变在LIHC中发生率很低。与AATF相互作用的蛋白有ATM丝氨酸/苏氨酸激酶、检查点激酶2(CHEK2)等,主要参与调控细胞周期、细胞凋亡及转录调控等过程。AATF mRNA表达水平与LIHC患者的预后呈负相关(log-rank P=0.003)。结论 AATF在LIHC组织中高表达,且与患者不良预后相关。

骨髓间充质干细胞对INS-1细胞凋亡的影响

目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)对过氧化氢(H2O2)诱导胰岛β细胞凋亡的影响。方法以H2O2作用于大鼠胰岛瘤细胞INS-1细胞构建凋亡模型,通过Transwell装置实现INS-1细胞与BMSCs共培养。实验分为4组:单独INS-1细胞培养组(A组);INS-1+H2O2处理组(B组);BMSC+INS-1Transwell共培养组(C组);BMSC+INS-1+H2O2Transwell共培养组(D组)。MTT法检测细胞存活率,Annexin-V/PI染色流式细胞技术检测细胞凋亡水平。结果 H2O2显著降低INS-1细胞存活率,引起INS-1细胞凋亡,且呈剂量依赖性,通过Tran-swell与BMSCs共培养后,由H2O2诱导的INS-1凋亡细胞比例下降,与单独H2O2刺激组相比,细胞凋亡率下降了约26.3%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 BMSCs通过Transwell共培养显著抑制H2O2诱导的INS-1细胞凋亡,其作用机制可能与BMSCs旁分泌作用有关,为进一步利用BMSCs防治糖尿病提供了理论依据。

FK506对早期糖尿病肾病大鼠足细胞损伤的保护作用

目的探讨FK506对早期糖尿病肾病大鼠肾小球足细胞损伤的保护作用。方法将38只正常雄性SD大鼠随机分为正常对照组(N组)8只、糖尿病肾病组(DN组)10只、FK506治疗组(F组)10只、洛汀新治疗组(L组)10只,其中DN组、F组、L组应用链脲佐菌素(STZ)60 mg/kg腹腔注射建立糖尿病大鼠模型。F组成模4周后给予FK506 1 mg/(kg.d)灌胃,L组成模4周后给予洛汀新10 mg/(kg.d)灌胃,DN组与N组4周后给予等量蒸馏水灌胃,每4周末监测各组大鼠血糖(BS)、体质量(BW)、24 h尿蛋白定量,药物干预8周后测定各组大鼠的血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、肾质量/体质量(KW/BW),在光镜、电镜下观察肾脏病理组织学改变,应用West-ern blot印迹检测足细胞特异标记物Nephrin的蛋白表达。结果①与N组比较,DN组大鼠BS、SCr、BUN、KW/BW、24 h尿蛋白定量均明显上升(P<0.05);与DN组比较,F组和L组上述指标除BS外均明显降低(P<0.05),且F组和L组之间差异无统计学意义(P>0.05);②光镜下,肾组织病理学观察N组无明显异常,DN组可见明显的肾小球体积增大,肾小球系膜细胞增生,系膜区增宽,基底膜增厚;F组、L组较DN组病理改变明显减轻(P<0.05),且F组和L组之间病理改变无显著性差异(P>0.05);③电镜下,DN组肾小球基底膜显著增宽,足突排列紊乱,足突增宽、融合,F组、L组较DN组上述病变有所减轻(P<0.05);④Western blot结果显示,DN组肾组织Nephrin蛋白表达较N组下降60.1%(P<0.05),F组和L组可明显恢复肾组织Nephrin蛋白的表达(P<0.05)。结论 FK506可能部分通过恢复糖尿病大鼠肾组织Nephrin蛋白表达、维护足细胞结构和功能的完整而发挥减少尿蛋白、延缓DN进展的作用。

牛磺酸熊脱氧胆酸对高糖环境下晶状体上皮细胞的保护作用

目的探讨牛磺酸熊脱氧胆酸(TUDCA)对高浓度葡萄糖诱导的人晶状体上皮细胞(hLECs)凋亡的作用及信号转导机制。方法hLECs在不同浓度葡萄糖培养液中培养24h,诱导建立hLECs凋亡模型,并采用不同浓度TUDCA(0.2、0.5、1.0、2.0mmol/L)进行干预。MTT法检测细胞增殖情况;Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡形态学改变;AnnexinV-FITC/PI双染后流式细胞仪检测细胞凋亡率;Westernblot技术检测细胞葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的表达。结果不同浓度葡萄糖培养细胞24h后,随着葡萄糖浓度的增加,细胞增殖抑制率亦升高(P<0.01)。高浓度葡萄糖(250mmol/L)培养24h可抑制hLECs的增殖活性,显著诱导hLECs凋亡(P<0.01),加入TUDCA共同培养后,hLECs凋亡率则显著降低(P<0.01),高浓度葡萄糖所引起的细胞GRP78蛋白表达也明显受到抑制(P<0.05)。结论内质网应激参与了高浓度葡萄糖诱导的hLECs凋亡,TUDCA可通过内质网应激途径抑制hLECs的凋亡,对hLECs产生保护作用。