脂肪间充质干细胞条件培养基制备温敏凝胶外用治疗皮肤烫伤

背景:有研究显示脂肪干细胞参与烫伤后皮肤组织的修复,但利用脂肪干细胞分泌物制备水凝胶,并治疗皮肤烫伤的研究尚未见报道。目的:分析人脂肪干细胞条件培养基水凝胶外用治疗小鼠皮肤烫伤模型的疗效。方法:采用酶解联合贴壁培养法,从脂肪组织培养获得脂肪干细胞并进行鉴定。取稳定增殖期细胞,收集其条件培养基,加入壳聚糖、甘露醇、β-甘油磷酸钠和透明质酸等制备温敏水凝胶,同时用新鲜脂肪干细胞完全培养基制备水凝胶。24只C57BL/6小鼠背部脱毛后用95℃铝块烫伤10 s快速建立3度皮肤烫伤模型,右侧以脂肪干细胞条件培养基水凝胶每天涂抹2次;左侧使用脂肪干细胞新鲜培养基水凝胶每天涂抹2次,连续涂抹7 d,观察愈合时间与愈合进程,计算愈合率,在烫伤后第4,14,28天取材进行苏木精-伊红染色观察组织病理学变化。结果与结论:①人脂肪间充质干细胞为成纤维状,增殖旺盛,平均倍增时间为55 h,可被诱导分化为成骨细胞、软骨细胞和脂肪细胞,高表达CD29、CD44、CD90和CD105,低表达CD31和CD34,证明其符合间充质干细胞的标准;②用人脂肪间充质干细胞条件培养基制备的温敏水凝胶在4-20℃呈现为清凉透明的黏稠液体,放入37℃15 min变为半固态凝胶;③95℃铝块烫伤小鼠表皮、真皮及皮下脂肪和肌肉组织的正常结构完全破坏,符合严重的3度烫伤标准,伤口面积均大致为3 cm^2;④在修复过程中发现,与新鲜培养基水凝胶对照组相比,脂肪干细胞条件培养基水凝胶组创口愈合时间短,伤口整洁,瘢痕增生少,创面组织结构恢复好;⑤脂肪干细胞条件培养基水凝胶组炎症浸润深度、炎症浸润细胞密度、肉芽组织厚度、成纤维细胞密度、新生血管密度和表皮厚度等指标显著好于新鲜培养基水凝胶组,差异有显著性意义(P<0.05);⑥以上结果表明,人脂肪间充质干细胞条件培养基水凝胶可有效促进烫伤皮肤伤口愈合,提高再生皮肤质量。

多孔状生物微晶玻璃修复下颌骨缺损的实验研究

目的:探讨多孔状生物微晶玻璃植入实验兔下颌骨缺损中引导骨形成的作用,为骨组织的修复与重建筛选一种良好的骨移植替代材料。方法:12只成年新西兰大白兔,随机分为4组,每兔两侧下颌骨均制作1.0cm×0.8cm大小的贯通性骨缺损,实验侧植入多孔状生物微晶玻璃材料,对照侧植入自体骨骼。术后第2、4、8、12周时,分别处死一组动物,对标本进行影像学、组织学及扫描电镜检查,观察颌骨缺损处的成骨情况。结果:多孔状生物微晶玻璃植入体内后,并不引起明显的排斥反应,缺损周围类骨组织逐渐长入材料周边孔隙,并逐渐矿化成骨,术后12周时,材料与周围组织形成牢固的骨性连接。结论:多孔状生物微晶玻璃具有较强的修复骨缺损的能力,是一种较好的骨移植替代材料。

下颌骨牵张成骨过程中TGF-β1动态表达的实验研究

目的:观察转化生长因子-β1(TGF-β1)在牵张成骨过程中时间和空间上的表达,探讨TGF-β1发挥的作用及其作用机制。方法:选用成年新西兰大白兔16只,行两侧下颌骨切开术,经7天间歇期后以0.5mm/12h的速度牵张,7d后固定。分别于间歇期1d、7d,牵张期1d、4d、7d,固定期1、3、5周随机处死2只动物取下颌骨标本,运用SABC免疫组织化学染色方法,对不同时间段的下颌骨标本进行TGF-β1的检测。结果:TGF-β1在潜伏期和固定期表达较弱,牵张期表达明显增强,在牵张第7天表达达高峰,且集中表达于未分化间充质细胞、成纤维细胞、成软骨细胞和成骨细胞。结论:TGF-β1在牵张成骨过程中,发挥着较为重要的作用。有望利用外源性TGF-β1提高牵张成骨形成骨的质和量,从而为牵张成骨术更好地应用于临床提供理论基础。

40例男子乳房发育症的手术治疗

男子乳房发育症（gyneacomastia,GYN）也叫男子女性型乳房,是男子乳房的一种持续性增大,多是由于患者体内雌激素浓度相对增高,引起乳腺组织增生发育。男子乳房发育症患者发育的乳房组织在组织学上没有分泌乳汁的腺体存在。

瘢痕疙瘩的治疗模式和进展

瘢痕疙瘩是发生于皮肤表面的难治病变之一 ,是整形外科等学者研究的热点之一 ,近年来积累了较为丰富的经验 ,取得了较大进展。现就瘢痕疙瘩的治疗模式和研究进展作一重点阐述 。

人骨髓基质干细胞体外三维立体培养的实验研究

目的:探讨人骨髓基质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cells,hBMSCs)在部分脱钙骨三维支架上立体培养的可行性。方法:将自人骨髓中分离出的骨髓基质干细胞进行培养、扩增,接种于多孔的部分脱钙骨支架上,通过荧光活性染料DiI标记和扫描电镜观察骨髓基质干细胞在部分脱钙骨上的生长和粘附情况,并测量hBMSCs在部分脱钙骨上的粘附率。结果:hBMSCs在部分脱钙骨上的粘附率为(99.1±1)%;DiI标记的细胞于接种后第2、4、7天激光共聚焦检测,见支架空隙中细胞逐渐增多;电镜观察,接种7天后,电镜下见细胞覆盖了部分脱钙骨表面;自部分脱钙骨中份切开,横断面电镜观察见断面中充满细胞。结论:hBMSCs在部分脱钙骨支架的三维立体环境中生长良好,是一种较好的体外培养方法。

低氧预处理骨髓间充质干细胞耐受缺血缺氧的能力

背景:有研究表明骨髓间充质干细胞的生理环境氧体积分数低于常规培养用的20%-21%,适度低氧体积分数下,骨髓间充质干细胞表现出促进生长增殖,保持分化潜能的特性。目的:观察低氧预处理后的大鼠骨髓间充质干细胞的生物学特性,以期为低氧预处理后的骨髓间充质干细胞体内移植治疗寻找体外依据。方法:将大鼠骨髓间充质干细胞传代接种后置于体积分数1%O2,5%CO2的低氧培养箱内培养,以体积分数20%O2,5%CO2常氧培养的骨髓间充质干细胞同样封闭作为对照。结果与结论:MTT检测显示,在低氧条件下培养的经低氧预处理的骨髓间充质干细胞较常氧条件下培养的细胞在贴壁后会经历一个相对较长时间的潜伏期,随后才进入指数生长期,体积分数1%O2为非致死性的培养条件。锥虫蓝染色显示,封闭无血清条件下,两组细胞存活率均随着时间的推移而降低(P<0.05),而常氧组下降更快。流式细胞仪检测显示,低氧组的细胞表面分子标记物CD29(+),CD90(+),CD31(-),CD45(-)的表达与低氧预处理前差异无显著性意义,未向血管内皮细胞分化。实时定量PCR和酶联免疫实验检测结果显示,低氧预处理48 h后,骨髓间充质干细胞中血管内皮生长因子mRNA和蛋白的表达均升高(P<0.05)。Western-blot检测显示,低氧预处理24-48 h后,骨髓间充质干细胞中缺氧诱导因子1α的蛋白表达明显增多(P<0.05)。证实,体积分数1%O2能短暂抑制骨髓间充质干细胞的增殖,但不会产生致死性效应,可以作为低氧预处理的氧体积分数。体积分数1%O2预处理48 h后,骨髓间充质干细胞的表型未发生明显变化,仍维持其干性。低氧预处理提高骨髓间充质干细胞对缺血缺氧的耐受能力,机制可能与低氧诱导因子1α表达增多有关。

让皮肤实现“无痕”梦想

许多外伤后或需要手术的患者都会问医生会不会留下瘢痕，担心瘢痕影响美观，其实任何手术或深达真皮的创伤都会留下瘢痕，只是明显不明显而已。引起瘢痕增生的病因很多，主要与创面感染、手术后并发症、愈合分级及手术刀口的张力过大有关。临床上主要针对瘢痕的病因采取措施，如外伤后切口应彻底清创，使污染创面变为清洁创面；在做手术时，切口设计、组织的切开、分离及缝合时应按照美容整形手术的原则进行；

阴囊部位Fournier坏疽的外科诊疗分析

目的通过分析阴囊部位Fournier坏疽的临床特点、外科诊疗过程及疗效,探讨处理此类疾病的有效方法。方法收集自2015年8月至2017年8月治疗阴囊部位Fournier坏疽的8例患者的临床资料,并对临床诊断、创面清创及后期创面重建过程及治疗结果进行回顾性分析。结果8例患者阴囊部位细菌培养均呈阳性。UFGSI和LRINEC中位评分为4(2~8)分和2(1~5)分,分数高低与住院天数及病情严重程度相符。其中3例经1次清创、5例经2次清创,之后采用负压辅助系统治疗;待创面新鲜后,采取直接缝合1例,局部皮瓣修复1例,自体中厚皮片植皮6例,均痊愈出院。中位随访16.5(11~23)个月,创面愈合良好,无复发。结论患者的临床表现、细菌培养和UFGSI、LRINEC评分,对于阴囊部位Fournier坏疽的诊断和预后判断具有重要意义。在控制基础疾病的同时,采取早期多次清创,并应用负压辅助系统,以及后期根据创面情况来选择合适的重建方式,均可获得较好的预后效果。

透明质酸钠凝胶DX23治疗面中部凹陷安全性和有效性的临床验证

目的探讨注射用修饰透明质酸钠凝胶DX23对填充治疗面中部凹陷的有效性和安全性。方法采用前瞻、随机、多中心、"无治疗"对照研究方法,纳入2019年3月至2021年2月在首都医科大学附属北京安贞医院、山东大学齐鲁医院、济宁市第一人民医院治疗面中部凹陷的患者。以分层区组随机方式,使用随机函数列表对患者进行分组,试验组采用注射用修饰透明质酸钠凝胶DX23治疗面中部凹陷,DX23中透明质酸钠浓度为23 mg/ml,注射器与皮肤垂直90°进针,注射层次为骨膜浅层或皮下层,注射量为1~6 ml。对照组采用无治疗对照。面中部的上界为颧弓向外延续至耳轮上缘,向内延续至外眦的连线,下界为口角至耳垂的连线。研究者用注射后6个月面中部凹陷严重程度量表(MAS)应答率为主要指标评价改善面中部凹陷严重程度的疗效,术后MAS评分较术前减少1分为应答,即有效。以末次治疗后6、12个月MAS应答率(MAS应答率=MAS应答例数/总例数×100%)、面中部三维图像容积平均变化值、面部整体美观改善量表(GAIS)应答率,以及患者评估面中部容积改善程度的满意度为次要疗效指标,并监测不良反应。使用SPSS 25.0、SAS 9.4和Stata IC 15.0软件进行数据分析,选用全分析集(FAS)和符合方案集(PPS)进行分析,推断性分析使用t检验、χ2检验,P<0.05为差异有统计学意义。结果共纳入164例患者,试验组134例,男7例,女127例,年龄(43.0±9.7)岁(21.6~66.6岁);对照组30例,男5例,女25例,年龄(39.3±11.1)岁(25.6~43.5岁)。试验组填充双侧面中部凹陷,首次使用注射用修饰透明质酸钠凝胶DX23(4.07±1.28)ml。试验组30 d后失访脱落3例,60 d后失访脱落2例,违背试验方案剔除10例,15例患者最终进入FAS但未进入PPS,最终119例患者完成试验。试验组治疗后6、12个月的MAS应答率分别为94.96%(113/119)和56.30%(67/119);对照组6个月的MAS应答率为3.33%(1/30);治疗后6个月随访,试验组研究者和患者评价GAIS应答率为97.48%(116/119)(PPS)与97.69%(27/30)(FAS),对照组研究者评价GAIS应答率为3.33%(1/30)(FAS,PPS),患者评价GAIS应答率为0(0/30)(FAS,PPS),2组间比较,研究者和患者GAIS应答率差异均有统计学意义(P均<0.01)。注射后6个月,试验组与对照组面颊部容积与基线差值比较差异均有统计学意义[(1.65±1.40)ml(PPS)vs.(0.12±0.85)ml;(1.55±1.44)ml(FAS)vs.(0.12±0.85)ml;P均<0.001]。试验组注射后6个月随访,1例失访,PPS中满意81例,非常满意34例,中立3例;对照组患者中立29例,不满意1例。试验组共128例患者发生了注射部位反应,包括肿胀、发硬、触痛、疼痛和肿块(隆起)、淤青,超过75%的患者8 d内自行缓解,3例采取热敷处理,28 d内缓解,1例注射后1 d左下睑肿胀,局部按压3个月后缓解;对照组有1例在试验开始12个月后出现循环缺血、颈动脉硬化。结论注射用修饰透明质酸钠凝胶DX23通过局部增容来纠正面中部凹陷,具有安全且持续的特点。

链式专案管理下的延续性护理对糖尿病足患者自护行为、认知能力及生活质量的影响

目的分析链式专案管理下的延续性护理对糖尿病足患者自护行为、认知能力及生活质量的影响。方法选取2019年7月至2021年1月于山东大学齐鲁医院收治的糖尿病足患者103例。根据护理模式不同分为对照组50例(采用常规基础护理)和实验组53例(采用链式专案管理下的延续性护理)。对比两组糖尿病足部护理行为评价量表、糖尿病足部护理知识评价量表、生活质量量表(quality of life scale for patients with Type 2 diabetes meliitus,DMQLS)及病情恶化发生率。结果两组干预后饮食控制、遵医服药、血糖检测、足部护理、高低血糖处理评分均上升;且实验组评分高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。两组干预后足部问题处理、趾甲修剪、鞋型选择评分均上升;且实验组评分高于对照组;差异有统计学意义(P<0.05)。两组干预后生理、心理、疾病、社会评分均上升;且实验组评分高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。对照组病情恶化发生占比为20.00%,实验组病情恶化发生占比为5.66%,且实验组病情恶化发生率低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论对于糖尿病足患者应用链式专案管理下的延续性护理可有效提高其自护行为能力及认知能力,改善其生活质量,且减少疾病恶化风险,值得临床大力推广。

利用人骨髓基质干细胞异位构建组织工程化骨的实验研究

目的 探讨以人骨髓基质干细胞为种子细胞、以部分脱钙骨为支架材料在体内构建组织工程化骨的可行性及其成骨机制。方法 培养、扩增人骨髓基质干细胞，将第4代hBMSCs接种于部分脱钙骨支架上，通过扫描电镜观察其生长和粘附情况，并测量粘附率。于裸鼠皮下植入人骨髓基质干细胞和部分脱钙骨复合物，以无细胞部分脱钙骨作对照。8及12周取材观察。结果 8及12周复合物植入组均见新骨形成，多数骨小梁表面衬有一层成骨细胞样细胞，提示可能存在膜内成骨。单纯部分脱钙骨植入组未见新骨形成。结论 人骨髓基质干细胞与部分脱钙骨复合可以在体内构建组织工程化骨；其成骨机制可能为膜内成骨。

兔腰神经根慢性炎性压迫后的行为学改变及超短波疗效观察

目的 通过观测模拟腰椎间盘突出动物模型的神经行为学改变 ,探讨超短波治疗对神经源性疼痛的疗效。方法 从椎间外孔塞入带髓核的有孔硅胶管 ,建立兔腰神经根慢性炎性压迫模型 ,测定动物的运动功能、热辐射刺激缩腿反应的潜伏期及电刺激痛阈值 ,观察空白对照组、损伤模型组和超短波治疗组在损伤后不同时间 (10d、3 0d和 90d)时的动物神经行为改变情况。结果 损伤模型组动物患肢的热痛阈和电痛阈发生改变 ,出现明显痛觉过敏的现象 ;超短波治疗组动物在损伤后 10d时患肢亦出现痛觉过敏的现象 ,但在损伤后 3 0d时已基本恢复正常。结论 兔腰神经根受到慢性压迫和自体髓核刺激后可引起痛觉过敏 ,而超短波治疗对兔腰神经根慢性炎性压迫后产生的神经源性疼痛具有积极的治疗作用。

长期肌内注射青霉素致双臀部大面积钙盐沉积症一例

患者女,68岁,因双侧臀部异物性结节30余年,多发破溃2年,于2016年4月入院。患者40年前因双侧输卵管结扎术后反复腹痛伴发热,诊断为盆腔感染,双侧臀部肌内注射青霉素抗感染,随病情反复间断注射。最长连续注射时间达3个月,80万U每日2次。治疗5年后,因双侧臀部注射部位变硬,进展为结节,改为静脉用药。质硬部位无明显不适感,未治疗,但质硬部位逐渐扩大、融合,累及至大腿中上部。2年前质硬部位破溃,有大量乳白色黏稠渗液,遂就诊。

KIF4A对巨噬细胞血管生成相关因子表达的调节作用

目的探讨驱动蛋白KIF4A对巨噬细胞不同亚群中血管生成相关因子表达的影响。方法 THP-1细胞在PM A及不同人重组细胞因子的外界刺激下分别分化为M0、M1、M2细胞,采用ELISA技术检测此3种巨噬细胞亚群中血管生成相关因子的表达水平。利用siRNA转染敲除M0、M1、M2细胞中KIF4A的表达,采用实时定量PCR检测敲除后血管生成相关因子的表达水平。结果巨噬细胞M0上清中可检测到LIF、VEGF、s VEGFR1及TIM P1,而s VEGFR2、Flt-3、Leptin、LeptinR、CD40L均不表达。其中LIF、VEGF、TIM P1在M0向M1、M2分化过程中,表达差异均无统计学意义(P>0.05);s VEGFR1在M0向M1分化过程中表达差异无统计学意义(P>0.05),向M2分化过程中表达显著上调(P<0.01)。转染KIF4A siRNA后,M0与M1细胞中LIF、s VEGFR1、VEGF、TIM P1的表达差异均无统计学意义(P>0.05);M2细胞中LIF、VEGF、TIM P1表达差异均无统计学意义(P>0.05),但s VEGFR1表达水平明显降低(P<0.05)。结论 M2细胞s VEGFR1表达水平显著上调;KIF4A参与M2细胞中s VEGFR1的表达。