衰老大鼠主动脉增龄性改变的比较蛋白质组学研究

目的研究老年大鼠主动脉与衰老相关的蛋白质，为进一步探讨衰老机制提供依据。方法建立衰老大鼠模型，取成年（9周）和老年（12个月）wistar_Kyoto（WKY）大鼠和同龄的自发性高血压大鼠（SHR），观察血压变化情况，采用苏木伊红（HE）染色观察主动脉形态学改变，应用同位素标记相对和绝对定量（iTRAQ）多重化学标记串联质谱技术鉴定差异蛋白，同时应用实时定量聚合酶链反应（PCR）、免疫印迹（Western-blot）检测部分差异蛋白。结果老年组中SHR大鼠的平均收缩压比WKY大鼠高出97．1％（t=39．00，P〈0．05）；成年组中SHR大鼠的平均收缩压比WKY大鼠高出5．40（t=3．64，P〈0．05）。HE染色结果显示老年WKY组和老年SHR组大鼠主动脉出现衰老改变，且老年SHR组更明显。质谱分析鉴定了7个与衰老相关的差异蛋白，分别是前纤维蛋白1（Profilin—1）、前层蛋白A（Prelamin—A）、热休克蛋白70（HSP70）、肌酸激酶M（CK—M）、腓骨蛋白5（Fibulin-5）、真核翻译起始因子5A_1（eIF5A）、抑制素蛋白（Prohibitin）。实时定量PCR结果显示，与成年组相比，WKY与SHR老年组中Prelamin—A的mRNA表达均升高，分别为0．45±0．04与0．15±0．01、0．78±0．06与0．34±0．02（t值分别为12．67、12．06，均P〈0．01）。与成年组相比，WKY与SHR老年组中Prohibitin mRNA表达降低，分别为1．34±0．05与1．01±0．06、1．24±0．05与0．88±0．08（t值分别为7．41、7．09，均P〈0．01）。Westernblot检测结果显示，与成年组相比，WKY与SHR老年组中Profilin-1的蛋白表达均升高，分别为9．12±0．40与20．76±0．80、16．84±0．50与55．16±0．90（t值分别为22．55、64．46，P〈0．01），且Profilin-1在SHR老年组的蛋白表达比WKY老年组的高，分别为55．16±0．90与20．76±0．80（t=49．49，P〈0．01）。结论通过比较蛋白质组学方法鉴定老年大鼠主动脉与衰老相关的蛋白质，为血管老化的防治提供新的靶点。

健脾补肾活血方对亚急性衰老大鼠慢性脑缺血模型中脑源性神经营养因子及血管内皮生长因子表达的影响

目的观察健脾补肾活血方对低半乳糖(D-gal)诱导的亚急性衰老大鼠慢性脑缺血模型中脑源性神经营养因子(BDNF)及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法健康雄性Wistar大鼠60只,随机分为:正常组、模型组、治疗(高、低剂量)组、对照组。在D-gal诱导亚急性衰老的基础上,永久性结扎其双侧颈总动脉,制备老年慢性脑缺血模型,观察健脾补肾活血复方对模型大鼠脑组织病理学中BDNF及VEGF含量表达的影响。结果与正常组相比,模型组脑组织形态学呈缺血性改变,未见明显梗死灶;与模型组相比,治疗组中BDNF、VEGF表达明显增加,且治疗高剂量组优于低剂量组。结论健脾补肾活血方可以提高亚急性衰老大鼠慢性脑缺血后BDNF及VEGF含量,其作用机制可能通过补肾填精、扶助正气,以促进血管的新生和神经细胞的分化,从而有益于受损的神经元形态和功能恢复,改善神经功能,达到神经再塑的目的。

中老年高血压病与高血压前期患者血流动力学变化的临床研究

目的应用胸阻抗法研究中老年高血压与高血压前期患者的血流动力学特点。方法 462例受检者分为高血压组、高血压前期组与正常组。应用LIFEGARD II型无创血流动力监测仪测定各组血流动力学指标:心搏量(SV)、体循环血管阻力(SVR)、胸液成分(TFC)与左心做功指数(LCWI)等。比较3组之间的血流动力学指标差异,并进一步分析高血压组患者血流动力学特点。结果高血压组与正常组之间比较,SBP、DBP、PP、MAP、SVR、SV、LCWI等指标存在统计学差异(P<0.05)。高血压前期组与正常组之间比较,SBP、PP、MAP、SVR存在统计学差异(P<0.05)。58.8%的高血压组患者存在SVR异常升高。结论高血压与高血压前期的患者中均存在不同程度的血流动力学异常。无创血流动力学监测可为高血压患者的个体化治疗提供参考。

氧化锆和纯钛基底冠材料及饰瓷烧结对种植全冠适合性的影响

目的研究氧化锆和纯钛基底冠材料及饰瓷烧结对种植全冠内部和边缘适合性的影响。方法制作计算机辅助设计/计算机辅助制作(CAD/CAM)氧化锆烤瓷种植全冠(A组)和纯钛烤瓷种植全冠(B组)各8个(n=8)。分别用硅橡胶轻体复制饰瓷烧结前基底冠和饰瓷烧结后全冠的内部和边缘间隙,采用Micro-CT扫描硅橡胶,建立三维图像,测量冠边缘垂直间隙(MG)、冠边缘水平间隙(HMD)和冠内部轴面中点间隙(AW)。采用SPSS17.0软件对测量结果进行统计学分析。结果饰瓷烧结前,A组基底冠MG、HMD和AW均大于B组(P<0.05)。饰瓷烧结后,A组全冠MG小于B组(P<0.05),两组的HMD和AW均无统计学差异(P>0.05)。饰瓷烧结使A组MG减小(P<0.05),使B组MG、HMD和AW均增大(P<0.05),而A组HMD和AW烧结前和烧结后的差异无统计学意义(P>0.05)。结论氧化锆烤瓷种植全冠边缘适合性优于纯钛烤瓷种植全冠;饰瓷烧结对氧化锆和纯钛烤瓷种植全冠适合性均会产生影响。

前纤维蛋白-1对内皮功能影响的研究进展

近年来，血管内皮功能已成为心血管领域研究中发展迅速的热点之一。内皮功能障碍在高血压、心力衰竭、动脉粥样硬化等心血管疾病及糖尿病、代谢综合征等代谢性疾病中发挥着重要的作用。干预血管内皮功能对上述疾病的防治意义重大。

增强型体外反搏对老年患者多系统疾病的综合改善一例并文献复习

目的探讨增强型体外反搏(enhanced external counterpulsation,EECP)对老年患者多系统疾病的综合改善作用。方法分析收治的1例老年多系统疾病患者的临床资料,随访、评估EECP的治疗效果并复习相关文献。结果62岁男性患者诊断为冠状动脉粥样硬化性心脏病不稳定型心绞痛、陈旧性心肌梗死、心功能Ⅱ级(NYHA分级);高血压(3级,很高危);2型糖尿病;脑梗死恢复期;前列腺增生。EECP两疗程治疗后,患者心绞痛症状缓解,心脏收缩和舒张功能均改善,活动耐力增加,治疗药物减少。同时,该患者血压和血糖水平较前下降,双眼视网膜血流信号较前增强,夜尿次数和夜尿量均减少,左侧肢体麻木症状得到改善。结论EECP治疗在该老年患者的多系统疾病中均表现出改善作用,该技术安全、有效、简便易行,在老年病科具有广泛的应用前景。

葡萄籽原花青素对糖尿病大鼠心肌糖基化终末产物受体和结缔组织生长因子的影响

目的探讨葡萄籽原花青素（GSPE）对糖尿病大鼠心肌糖基化终末产物受体（RAGE）、核转录因子κB（NF-κB）和结缔组织生长因子（CTGF）的影响。方法将链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠30只随机分为两组，糖尿病未治疗组（糖尿病1组）和糖尿病GSPE治疗组（糖尿病2组，每日给予GSPE2 50mg／kg灌胃）各15只；正常大鼠20只随机分为正常对照组（对照1组）和正常GSPE治疗组（对照2组，每日给予GSPE 250mg／kg灌胃）各10只，24周后采血检测空腹血糖（FBG）、糖基化终末产物（AGEs），免疫组织化学染色和Western blot测定心肌NFKB蛋白的表达，并应用Western blot测定各组心肌RAGE和CTGF的蛋白表达变化。结果糖尿病1组FBG、血清AGEs含量较对照1组显著升高（P〈0．05），经GSPE治疗后，血清AGEs含量显著降低（P〈0．05），而FBG降低差异无统计学意义；糖尿病1组心肌组织RAGE、NF—κB和CTGF蛋白表达较对照1组显著升高（P〈0．05），GSPE能够显著抑制RAGE、NF—κB和CTGF蛋白表达。结论GSPE对糖尿病心肌病具有保护作用，其可能机制与抑制糖尿病大鼠AGEs-RAGE、NF—κB和CTGF的表达有关。

D-松醇对晚期糖基化终末产物诱导的血管平滑肌细胞增殖和迁移的保护机制

目的研究D-松醇（D-pinitol）对晚期糖基化终末产物（AGEs）诱导的小鼠主动脉血管平滑肌细胞（VSMC）增殖和迁移的作用及其机制。方法体外培养小鼠主动脉VSMC，应用AGEs建立VSMC糖基化损伤模型，观察不同浓度的D-松醇对VSMC增殖和迁移的影响，应用CCK-8测定细胞增殖，细胞划痕检测细胞迁移，并测定各组细胞中转化生长因子-β1（TGF-β1）、p-smad2、p-smad3、Asporin等蛋白的表达。结果AGEs组与对照组比较，Asporin（40.06±4.50比17.47±0.57）、TGF-β1（55.25±2.07比14.42±2.07）、p-smad2（0.97±0.02比0.47±0.02）、p-smad3（0.45±0.01比0.26±0.02）蛋白表达升高（均P〈0.01）；与AGEs组比较，不同浓度D-松醇可明显抑制VSMC的增殖和迁移，并下调TGF-β1、p-smad2、p-smad3及Asporin蛋白的表达，且呈浓度依赖性（P〈0.05或P〈0.01）。结论D-松醇可抑制AGEs诱导的小鼠VSMC的增殖和迁移，Asporin可能通过TGF-β/smad通路参与血管平滑肌细胞外基质重构过程。

糖尿病心肌病内质网应激相关的差异表达蛋白分析

目的 应用同位素标记的相对和绝对定量技术（iTRAQ）检测和探讨糖尿病心肌病内质网应激相关的差异表达蛋白质的变化. 方法 以雄性C57BLKS/J db/db小鼠为2型糖尿病模型组（8只）,db/m小鼠为正常对照组（8只）;每周测定体质量、微量血糖变化.于18周末留取血清测定空腹血糖、总胆固醇、三酰甘油、糖基化终末产物（AGEs）的含量;留取心肌组织行HE染色观察组织病理变化,透射电镜观察肌浆网超微结构变化,应用iTRAQ技术检测各组内质网应激相关的差异表达蛋白. 结果 模型组与对照组比较,第8～18周体质量显著增加（P＜0.01）;第18周空腹血糖、总胆固醇、三酰甘油及血清AGEs含量显著升高（P＜0.01）.模型组小鼠心肌组织HE染色可见心肌细胞肥大、肌纤维排列不规则、肌丝断裂、并伴有核损伤;超微结构观察显示模型组心肌组织肌小节失去正常结构,明暗带消失,肌浆网扩张、肿胀,肌纤维间水肿,其间可见炎性细胞浸润.模型组与正常对照组心肌组织应用质谱分析结合数据库检索,共鉴定了22个与内质网应激相关的差异表达蛋白,其中上调者6个,下调者16个. 结论 内质网应激相关差异表达蛋白含缬酪肽蛋白、B细胞受体相关蛋白31、溶血磷脂酰胆碱酰基转移酶3,在糖尿病心肌病中具有重要作用,并可能为研究或发现糖尿病心肌病防治的新药靶点提供理论基础.

白芦藜醇对自发性高血压大鼠血管重构的保护作用

目的观察白芦藜醇对自发性高血压大鼠血管重构的作用。方法选择20只雄性自发性高血压大鼠（SHR）和10只wistar-Kyoto（wKY）大鼠，数字抽签随机分为对照组、模型组及白芦藜醇组。观察血压、脉搏波速度变化情况，采用苏木-伊红（HE）染色、维多利亚蓝天狼星红染色观察主动脉形态学改变，检测一氧化氮（NO）、内皮素1（ET1）观察血管内皮功能，检测超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、丙二醛（MDA）、过氧化氢（H202）观察氧化应激水平。结果22周末，与对照组比较，模型组大鼠出现血压升高，脉搏波速度增加，主动脉管壁增厚，壁厚内径百分比增大，血管横截面积及血管腔横截面积增大，胶原纤维面积／弹性纤维面积比值增加。主动脉组织中NO、SOD、CAT表达下降而ET-1、MDA、H2O2表达增加。经白芦藜醇处理后，与模型组比较，白芦藜醇组血压无明显变化，而脉搏波速度下降（6681．1±2154．9）cm／s与（4283．1±946．1）cm／s（P〈0．05），主动脉管壁厚度降低（P〈0．01），壁厚内径百分比减小（P〉0．05），血管横截面积减小（P〈0．05），血管腔横截面积减小（P〈0．05）；胶原纤维面积／弹性纤维面积比值减小（P〈0．01）；主动脉组织中NO表达增多（P〈0．01），SOD表达增多（P〈0．01），CAT表达增多（P〈0．05），ET-1表达减少（P〈0．01），MDA表达减少（P〈0．01），H202表达减少（P〈0．05）。结论白芦藜醇具有抗氧化作用，可通过改善氧化应激，延缓血管重构的过程。

葡萄籽原花青素对兔动脉粥样硬化氧化应激的影响

目的通过观察葡萄籽原花青素对动脉粥样硬化兔血浆丙二醛及氧化低密度脂蛋白及主动脉形态学的影响,探讨葡萄籽原花青素对氧化应激及动脉粥样硬化的预防作用。方法将24只雄性新西兰白兔随机分为对照组、模型组及葡萄籽原花青素干预组,每组8只,分别给予不同的饲料,0、4、8、12周末留取血浆,使用酶联免疫吸附法检测血浆丙二醛及氧化低密度脂蛋白含量,留取主动脉行HE染色及扫描电镜观察。结果 12周末氧化低密度脂蛋白含量模型组较对照组明显升高[(54.26±5.33)mg/L vs(24.48±3.13)mg/L,P(0.01],而葡萄籽原花青素组为(45.46±4.01)mg/L,与模型组差异具有统计学意义(P(0.01);模型组丙二醛的含量较对照组明显升高[(7.49±0.53)μmol/L vs(3.08±0.13)μmol/L,P(0.01],而葡萄籽原花青素组含量为(6.90±0.59)μmol/L,与模型组差异具有统计学意义(P(0.05)。形态学观察可见,葡萄籽原花青素干预治疗后,局部破坏减轻,小栓子形成受抑。结论葡萄籽原花青素具有显著抗氧化效果,可抑制低密度脂蛋白氧化,发挥抗动脉粥样硬化形成作用。

通心络对糖尿病大鼠心肌RAGE、NF-κB的影响

目的研究通心络对糖尿病大鼠心肌组织糖基化终末产物受体(RAGE)及核转录因子(NF-κB)表达的影响,探讨其对糖尿病大鼠心肌的保护作用及机制。方法雄性W istar大鼠60只,随机选出15只作为正常对照组(C组,n=15),剩余45只尾静脉注射0.1%链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病模型,成模大鼠40只,随机分为糖尿病模型组(DM组,n=20)和糖尿病通心络治疗组(TXL组,n=20),通心络500m g/(kg.d)。喂养24周后,各组大鼠存活数为C组12只、DM组9只、TXL组13只,处死大鼠迅速心脏穿刺取血,测空腹血糖、糖化血红蛋白(HbA1c)及糖基化终末产物(AGEs)等指标。RT-PCR及W estern b lot法测定大鼠心肌组织中RAGE和NF-κB的表达。结果与C组相比,DM组大鼠血清中AGEs水平及心肌组织中RAGE和NF-κB的表达显著升高(P均<0.05)。经通心络治疗后,TXL组大鼠血清中AGEs的水平与DM组无统计学差异(P>0.05),但心肌组织中RAGE和NF-κB的表达较DM组显著降低(P均<0.05)。结论通心络可能通过抑制糖尿病大鼠心肌组织RAGE及NF-κB的表达而对糖尿病大鼠心肌组织起到一定的保护作用。

Profilin-1在大鼠主动脉老化过程中的变化及葡萄多酚抗老化作用研究

目的 探讨Profilin-1在大鼠主动脉老化过程中的变化及葡萄籽多酚的干预机制.方法 选择青年组（9周）和中年组（12月）Wistar大鼠,分别随机分为对照组和葡萄籽多酚处理组.检测血清中一氧化氮（NO）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛、3-硝基酪氨酸（3-NT）含量.检测profilin-1及诱导性一氧化氮合成酶（iNOS）的蛋白表达水平. 结果 与青年对照组大鼠比较,中年对照组大鼠主动脉出现增龄性改变,如中膜厚度增加[（98.3±0.5）μm和（83.1±1.0）μm,P＜0.05]、管腔内径减小[（15.5±0.2）μm和（18.2±0.5）μm,P＜0.05],中膜厚度与管腔内径百分比增加[（6.4±0.1）％和（4.6±0.1）％,P＜0.05];大鼠主动脉组织profilin-1表达上调（1.58±0.09和1.29±0.04,P＜0.05）,iNOS表达上调（1.02±0.12和0.75±0.02,P＜0.05）,血清NO含量下降[（6.3±0.2）μmol/L和（8.4±0.2）μmol/L,P＜0.05],SOD含量下降[（172.3±1.6） kU/L和（189.1±1.5） kU/L,P＜0.05],丙二醛含量增加[（11.3±0.3）μmol/L和（9.4±0.1）μmol/L,P＜0.05],3-NT含量增加[（40.2±0.3） nmol/L和（35.6±0.5）nmol/L,P＜0.05];经葡萄籽多酚处理后,与对照组比较,中年组中膜厚度降低、管腔内径增加、中膜厚度与管腔内径百分减小;中年组、青年组中处理前后profilin-1的表达均无明显变化;中年组与对照组比较,处理组组织iNOS表达降低,血清NO与SOD含量增加;丙二醛与3-NT含量降低（均P＜0.05）. 结论 profilin-1在大鼠主动脉老化过程中表达增加,并通过促进iNOS相关的氧化应激损害参与血管老化过程;葡萄籽多酚可通过抑制血管氧化应激水平发挥延缓血管老化的作用.