3种卵巢癌细胞中hTERT转录水平及其与端粒酶活性的相关性研究

背景与目的:端粒酶在约90%的肿瘤细胞中有活性而在绝大多数正常细胞中受抑,催化亚单位端粒酶逆转录酶(humantelomerasereversetranscriptase,hTERT)是端粒酶的重要组成部分,其表达的调控主要发生在转录水平。端粒酶、hTERT、hTERT启动子三者之间密切相关。本研究探讨卵巢癌细胞系中hTERT启动子的活性及其与hTERTmRNA表达和端粒酶活性之间的关系。方法:应用脂质体转染法将hTERT核心启动子基因转入3种卵巢癌细胞OVCAR3、SKOV3、3AO及正常卵巢上皮细胞中,并用荧光素酶检测实验检测其中hTERT启动子的活性;应用RT-PCR半定量法检测这4种细胞中hTERTmRNA的表达水平;应用PCR-ELISA定量检测这4种细胞中端粒酶的活性。同时以端粒酶阳性的永生化人胚肾成纤维细胞HEK293作为阳性对照,以端粒酶阴性的人胚肺成纤维细胞HELF作为阴性对照。结果:OVCAR3、SKOV3、3AO细胞及正常卵巢上皮细胞中的hTERT启动子活性(视每种细胞中pGL3-control的启动子活性为100%)分别为31.4%、20.3%、17.7%和0.3%;hTERTmRNA的相对表达水平(视SKOV3的表达水平为1.00)分别为1.30、1.00、0.63和0;端粒酶活性分别为0.580、0.414、0.386和0.103(>0.200时定为阳性)。3种卵巢癌细胞中hTERT启动子活性、hTERTmRNA表达水平和端粒酶活性均特异性增高。

宫颈癌及子宫内膜癌细胞系中hTERT启动子活性的研究

目的 :探讨Hela及HHUC细胞系中hTERT启动子的活性及其与hTERTmRNA表达和端粒酶活性之间的关系。方法 :将hTERT核心启动子基因转入Hela、HHUC细胞系、人正常皮肤表皮细胞及子宫内膜上皮细胞中 ,检测细胞系hTERT启动子的活性、hTERTmRNA表达水平及端粒酶活性。分别以HEK2 93细胞系作为阳性对照 ,HELF细胞系作为阴性对照。结果 :细胞系Hela、HHUC、人正常皮肤表皮细胞及正常子宫内膜上皮细胞中的hTERT启动子活性分别为 2 0 1%、14 9%、0 3%和 0 5 % ;hTERTmRNA相对表达水平分别为 0 6 3、0 5 1、0和 0 ;端粒酶活性分别为 0 393、0 387、0 14 4和 0 15 2。结论 :宫颈癌细胞系及子宫内膜癌细胞系中hTERT启动子活性、hTERTmRNA表达水平和端粒酶活性均特异性增高 ,而在正常角化细胞及子宫内膜上皮细胞中则被抑制或不表达。