Rb94对人肺腺癌细胞系A549放射增敏作用的实验研究

目的构建人视网膜母细胞瘤基因（Rb94）真核表达载体，观察其对人肺腺癌细胞系A549的放射增敏作用并探讨其机制。方法构建重组表达质粒pIRES-Rb94，经脂质体转染A549细胞、G418筛选获得稳定转染的细胞系。细胞计数法绘制生长曲线、计算细胞倍增时间；实时RT—PCR检测hTERT、Bcl-2mRNA的表达；成克隆实验检测pIRES—Rb94对A549细胞放射敏感性影响，计算放射增敏比（SER）；流式细胞仪分析细胞周期。结果成功构建pIRES—Rb94质粒，转染A549细胞后获得稳定转染细胞系pIPES-Rb94-A549。与A549细胞相比，pIRES-Rb94-A549细胞倍增时间延长（31．5h：39．5h；t=5．15，P〈0．01）；hTERT、Bcl-2mRNA表达下降（0．02：1．00；t=18．99，P〈0．01；0．01：1．00；t=13．73，P〈0．01）；G2＋M期细胞增加（35．91％：4．53％；t=36．78，P=0．00），G0＋G1期和S期细胞减少（47．02％：74．07％；t=11．71，P=0．00和17．07％：22．32％；t=2．30，P〈0．05）；由D0值计算的SER为1．30。结论Rb94对A549细胞具有明显放射增敏作用，其机制可能是G2＋M期阻滞作用以及下调hTERT、Bcl-2mRNA表达，并可能通过调节细胞周期来影响细胞增殖。