山东省肉、蛋鸡场微生物耐药性调查

为了解畜肉鸡肠道及环境中微生物对常用几种抗生素的耐药情况,现对山东省的13个肉、蛋鸡场进行采样检测。结果表明,肉鸡场粪样中分离出的总菌和耐药菌数量比蛋鸡场高出3~4个数量级;从药敏试验结果看,各分离出的菌对试验所选抗生素均有不同程度的耐药性,多重耐药、交叉耐药已经相当严重。

葡萄糖氧化酶和植物乳杆菌抑菌性能的研究

采用牛津杯法研究葡萄糖氧化酶(GOD)和植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)对鸡源、猪源大肠杆菌(Escherichia coli)和沙门氏菌(Salmonella)的抑菌作用。结果表明,牛津杯法检测到GOD对不同来源致病菌均具有抑菌性,且在一定浓度范围内随浓度增加抑菌性能增强,在GOD酶活10 U/mL时仍具有抑菌作用,抑菌圈直径均≥9.25 mm。GOD酶在37~75℃干热处理10 min后仍具有较好的抑菌活性,65℃时对猪源大肠杆菌K88和37℃时对沙门氏菌0533抑菌作用最强,抑菌圈直径分别为10.75 mm和12.25 mm。植物乳杆菌BLCC2-0126对被试病原菌抑菌圈直径最大,对猪源大肠杆菌K99和沙门氏菌0533抑菌圈直径为13.75 mm。总之,GOD和BLCC2-0126均具有抑菌作用,且可共用于实际生产中。

植物乳杆菌固体发酵对复方中药中有效成分含量的影响

该研究采用植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)BLCC2-0015、BLCC2-0126和BLCC2-0410固体发酵复方中药(黄芪、甘草和益母草等),测定发酵过程中复方中药的pH、微生物数量及总酸、有机酸、粗多糖等有效成分含量的变化,评价其对复方中药有效成分含量的影响。结果表明,植物乳杆菌发酵可降低复方中药的pH值,提高乳杆菌活菌数,抑制大肠杆菌(Escherichia coli)及霉菌的生长,并提高总酸、乳酸、苹果酸、粗多糖、阿魏酸及甘草次酸的含量。其中,植物乳杆菌BLCC2-0410发酵效果最好,发酵72 h时,复方中药的pH为4.32;乳杆菌活菌数为4.53×10^(9)CFU/g,大肠杆菌及霉菌未检出;总酸、乳酸、苹果酸、粗多糖、阿魏酸和甘草次酸含量均显著升高(P<0.05),分别为27.82 g/kg、19.25 g/kg、4.06 g/kg、5.83%、42.00 mg/kg和517.9 mg/kg。

6株鼠李糖乳杆菌的安全性评价

鼠李糖乳杆菌具有多种益生性能,广泛应用于多个行业,但菌株的安全性具有个体差异。本研究通过对实验室保存的6株鼠李糖乳杆菌进行溶血性、有害代谢产物、抗生素耐受性、小鼠急性毒性试验进行菌株的安全性评价,同时进行6株鼠李糖乳杆菌的抑菌性能试验。试验结果显示,所选用的6株鼠李糖乳杆菌均无溶血活性,不会产生氨基酸脱羧酶和吲哚,不能将硝酸盐还原为亚硝酸盐;会产生少量的D-乳酸,含量均低于0.0600μmol/mL,其中0479产D-乳酸最少,为0.0395μmol/mL;0463、0465、0479菌株对红霉素、氯霉素、氨苄西林、克林霉素、庆大霉素、卡那霉素、四环素、链霉素均敏感;对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、产气荚膜梭菌具有一定的抑制能力,抑菌圈直径在9.75 mm以上;小鼠急性毒性试验结果表明,6株鼠李糖乳杆菌对小鼠安全、无毒副作用。综上所述,所测试的6株鼠李糖乳杆菌安全性较高,为其应用奠定了基础。

植物乳杆菌发酵复方中药对阿魏酸和甘草次酸溶出率的影响

建立HPLC法检测中药阿魏酸、甘草次酸含量,比较固体发酵对中药阿魏酸、甘草次酸溶出率的影响。阿魏酸检测色谱条件:色谱柱InertSustain AQ-C18(5μm,4.6 mm×250 mm),柱温箱25℃,进样量10μL,流速1.0 mL/min,流动相乙腈醋酸水溶液,检测波长310 nm。结果表明,该方法在0.02~0.1 mg/m L范围内线性关系良好。甘草次酸检测色谱条件:色谱柱InertSustain AQ-C18(5μm,4.6 mm×250 mm),柱温箱30℃,进样量:10μL,流速:1.0 mL/min。流动相磷酸乙腈甲醇水溶液梯度洗脱,检测波长254 nm。结果表明,该方法在0.05~1.0 mg/mL范围内线性关系良好。经检测:发酵中药阿魏酸、甘草次酸溶出率分别为40.50 mg/kg、517.9 mg/kg,发酵前中药阿魏酸、甘草次酸溶出率分别为34.12 mg/kg、387.8 mg/kg,发酵复方中药较未发酵组阿魏酸、甘草次酸溶出率分别增加18.70%、33.55%,复方中药发酵后可显著提高阿魏酸、甘草次酸溶出率。

中药和益生菌组方防治鸡滑液囊炎支原体的应用研究

试验旨在验证中药和益生菌在防治鸡滑液囊炎支原体病方面的作用,以期有效防控鸡滑液囊炎支原体病的流行。试验采用体外筛选出具有抑制鸡滑液囊炎支原体(MS)的中草药(甘草、蒲公英),再辅以桑枝与川芎两味具有活血化瘀功能的中草药,与两株具有显著提高机体免疫力的植物乳杆菌BLCC2-0418、BLCC2-0287形成中药与益生菌组方,并构建MS模型,考察了中药与益生菌组方对MS感染肉鸡的治疗效果。结果显示:中药与益生菌组方能够显著缓解由于攻毒导致的采食量下降引起的体重降低以及足垫厚度和关节直径增高的现象,减轻关节损伤;可提高肉鸡血清免疫球蛋白G(IgG)抗体水平,提高机体免疫力;可降低血清中炎性细胞因子白细胞介素-6(IL-6)含量,提高血清中抗炎性因子白细胞介素-10(IL-10)含量,可抑制关节炎症反应,对MS导致的关节病变可起到积极的治疗作用。研究表明,中药与益生菌组方可以降低由于感染MS导致的关节损伤。

高产苯乳酸菌株选育及发酵豆粕工艺优化

该研究以泡菜为原料,以金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)与大肠杆菌(Escherichia coli)为指示菌,通过溶钙圈法及牛津杯法初筛,苯乳酸产量检测复筛,从泡菜中分离筛选具有抑菌性能的高产苯乳酸菌株,将其应用于发酵豆粕以评估其产苯乳酸性能,并对其进行形态学观察、生理生化实验及分子生物学鉴定。结果表明,共获得8株具有抑菌效果的菌株,其中,菌株R69苯乳酸产量最高,为1.25 mg/mL,添加苯丙酮酸时,该菌株固态发酵豆粕的苯乳酸产量为425.70 mg/kg,该菌株被鉴定为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)。菌株R69固态发酵豆粕时,添加0.2%蛋白酶、3%糖蜜和0.15%苯丙酮酸可提高苯乳酸含量,苯乳酸含量达到624.49 mg/kg,且可有效抑制大肠杆菌和霉菌的生长。

饲喂乳酸菌对母猪和哺乳仔猪生长性能、血清生化指标及粪便微生物数量的影响

本试验旨在研究饮水中添加乳酸菌对母猪和哺乳仔猪生长性能、血清生化指标及粪便微生物数量的影响。试验选择相同胎次、妊娠后期（81-85 d）的母猪40头,随机分为4组,每组10头。对照组及3个试验组母猪通过饮水每天每头分别饲喂0、200、250和300 m L乳酸菌液（活菌浓度≥1×10^9CFU/m L）,试验期80 d;对照组及3个试验组哺乳仔猪通过饮水每天每头分别饲喂0、5、10和15 m L乳酸菌液,试验期7 d。结果表明：1）与对照组相比,250 m L乳酸菌液可极显著提高母猪断奶体况评分（P〈0.01）,试验组母猪断奶后正常发情率和情期受胎率均为100.00%。2）试验组仔猪断奶重、平均日增重、仔猪皮毛发育状况评分较对照组均极显著提高（P〈0.01）,其腹泻率均有降低趋势。3）与对照组相比,饲喂乳酸菌液显著增加母猪初乳免疫球蛋白G含量（P〈0.05）,对乳蛋白、乳脂含量以及血清抗氧化指标也有提高趋势;300 m L乳酸菌液使母猪粪便中大肠杆菌、沙门氏菌数量显著减少（P〈0.05）,而乳酸菌数量显著增多（P〈0.05）。试验证明,饲喂乳酸菌能够改善猪肠道微生态和健康状况,提高母猪的繁殖性能和哺乳仔猪的生长性能。

1株植物内生菌解淀粉芽孢杆菌的安全性评价

试验旨在评价1株从杜仲中分离的解淀粉芽孢杆菌的安全性。试验从菌株溶血性、氨基酸脱羧和明胶液化试验、抗菌药物敏感性、腹腔注射、经口灌胃、抑菌活性等进行安全性综合评价。腹腔注射试验分为腹腔注射组(1.0×10^(10)CFU/0.3 mL)和生理盐水组,一次性注射,连续观察5 d。经口灌胃试验分为高剂量组(1.0×10^(10)CFU/0.2 mL)、中剂量组(1.0×10^(9)CFU/0.2 mL)、低剂量组(1.0×10^(8)CFU/0.2 mL)和生理盐水组,每天灌胃1次,连续灌胃28 d。结果显示,腹腔注射和经口灌胃小鼠均健康存活,未见临床变化,试验期间体重正常增加,各组小鼠血常规、血清生化指标和脏器指数差异均不显著(P>0.05),解淀粉芽孢杆菌DZ01未发生易位,氨基酸脱羧和明胶液化试验均为阴性。解淀粉芽孢杆菌DZ01对所测的8种抗菌药物均表现敏感。除粪肠球菌和铜绿假单胞菌外,解淀粉芽孢杆菌DZ01上清液对其余6株指示菌均具有抑菌活性。研究表明,解淀粉芽孢杆菌DZ01具有较好的安全性。

敌草快诱导的氧化应激对肉鸡生产性能、肝脏功能、免疫功能和抗氧化性能的影响

为了探讨不同浓度敌草快(Diquat)诱导的氧化应激对肉鸡生产性能、肝脏功能、免疫功能和抗氧化性能的影响,同时确定敌草快诱导氧化应激的最佳剂量和作用时间。本试验将64只16日龄健康AA肉鸡随机分为4个组:对照组、试验Ⅰ组、试验Ⅱ组和试验Ⅲ组,3个试验组分别腹腔注射10、15和20 mg/(kg·bw)敌草快溶液,对照组注射等剂量的无菌生理盐水,试验期21 d。结果显示,3个试验组肉鸡在试验期内均处于氧化应激状态,其中试验Ⅲ组肉鸡有死亡现象,试验Ⅱ组肉鸡采食量和体重下降,肝脏肿大,肝脏功能受损;试验第7天,与对照组相比,试验Ⅱ组肉鸡血清谷丙转氨酶(ALT)活性显著升高(P<0.05),肠黏膜分泌型免疫球蛋白A(sIgA)和血清免疫球蛋白G(IgG)含量显著降低(P<0.05),肝脏组织超氧化物歧化酶(SOD)活性显著降低(P<0.05),血清总抗氧化能力(T-AOC)含量和SOD活性均显著降低(P<0.05),丙二醛(MDA)含量显著升高(P<0.05);试验第21天,各项指标显示氧化损伤有所恢复。结果表明,可选取15 mg/(kg·bw)敌草快作为诱导肉鸡氧化应激的最佳剂量,而且氧化应激效应可持续至21 d,导致肉鸡生产性能下降、肝脏功能受损、免疫功能降低和抗氧化性能降低。

霉菌毒素生物脱毒剂对肉仔鸡生产性能、免疫功能及肝脏中毒素残留的影响

试验旨在研究霉菌毒素降解菌复配水合钠钙铝酸盐使用对饲喂霉变饲料肉鸡的生长性能、免疫功能、血清生化指标及肝脏中毒素残留的影响。选取体重均匀、健康状况基本相近的300只白羽肉鸡随机分为3组,每组5个重复,每个重复20只。对照组(Ⅰ组)饲喂正常玉米日粮;发霉饲料组(Ⅱ组)用50%霉变玉米替代正常玉米;霉菌毒素脱毒剂组(Ⅲ组)用50%霉变玉米替代正常玉米+2.0‰霉菌毒素脱毒剂。结果表明:(1)与对照组相比,发霉饲料组各生长阶段的平均日增重均显著降低(P<0.05),料重比显著升高(P<0.05);与发霉饲料组相比,霉菌毒素脱毒剂组显著提高了各生长阶段肉鸡的平均日增重(P<0.05),显著降低了各生长阶段肉鸡的料重比(P<0.05)。(2)24 d和38 d时均以试验Ⅲ组脾脏指数最高,分别高出发霉饲料组28.93%和11.36%,差异均显著(P<0.05);与发霉饲料组相比,霉菌毒素脱毒剂组显著提高了24 d和38 d肉鸡法氏囊指数。(3)38 d时试验Ⅱ组肉鸡血清中谷丙转氨酶和谷草转氨酶均最高,显著高于试验Ⅰ组和Ⅲ组(P<0.05);饲喂毒素饲料的试验Ⅱ组总蛋白和白蛋白含量均最低,均显著低于试验Ⅲ组(P<0.05)。(4)与试验Ⅱ组相比,试验Ⅲ组黄曲霉菌毒素B1和玉米赤霉稀酮含量分别降低53.53%和58.09%,差异均显著(P<0.05)。

复合微生物的筛选及其发酵秸秆的应用效果

为提高秸秆的发酵效果,通过筛选纤维素酶活力和木聚糖酶活力高的一定比例的复合菌株,并进行秸秆复合菌株发酵应用研究。结果表明,最佳复合菌株为:白腐菌+黑曲霉+米曲霉+芽孢杆菌+放线菌(1∶1∶1∶1∶1),其纤维素酶活最高值为203.64 U/g,木聚糖酶活最高值为10017.41 U/g。发酵田间大堆小麦秸秆时,试验组发酵38 d的秸秆,中性洗涤纤维、粗纤维比发酵前显著降低(P<0.05),粗蛋白显著升高(P<0.05)。与对照组发酵38 d的秸秆相比,中性洗涤纤维显著降低(P<0.05),粗蛋白显著升高(P<0.05)。发酵过程中温度有高温期、中温期和低温期,发酵结束时秸秆pH值(7.73)为微碱性,符合发酵堆肥标准。发酵结束后试验组的秸秆比对照组的秸秆腐化程度高。因此,混菌发酵有助于提高秸秆的发酵效果。

基因工程重组乳酸菌防控动物疫病的研究进展

大多数传染性病原体通过黏膜表面进入宿主,因此除了传统诱导系统免疫的注射疫苗外,还应该开发能诱导黏膜免疫的疫苗,从而在黏膜侵入点建立第一道防线,阻止病原体侵入机体。乳酸菌是人和大多数动物肠道内常见的益生菌,具有营养、免疫、抗感染等作用。自20世纪90年代以来,乳酸菌便作为食品级载体用作外源基因的表达,其可刺激机体产生针对其表达的外源蛋白的免疫反应,因而基因工程重组乳酸菌可作为潜在的黏膜免疫候选疫苗。乳酸菌作为疫苗载体具有许多有吸引力的优势:使用方式简单、非侵入性(通过口腔或鼻内)、能接受基因修饰且遗传稳定、表达蛋白不需纯化、成本相对较低、安全性能最高、在体内长期存活并不断表达外源蛋白、单次接种即可产生持久的免疫应答等。目前,选择正常菌群的乳酸菌为载体,构建重组乳酸菌已在预防细菌、病毒、寄生虫等病原感染宿主方面迅速开展起来,将它们用于预防相应疫病模型中均已取得了较好的防治效果。作者就近5年来基因工程重组乳酸菌的制备及其在防控动物疫病方面的研究进展作一综述。

1株宽噬菌谱鸡白痢沙门氏菌噬菌体的分离及生物学特性分析

本研究采用双层琼脂平板法从现代化肉鸡养殖场采集的粪便、污水和垫料样品中分离宽噬菌谱鸡白痢沙门氏菌烈性噬菌体,并通过透射电子显微镜观察、噬菌谱分析、热稳定性、pH稳定性、最佳感染复数及一步生长曲线等对分离纯化的噬菌体进行生物学特性分析。结果显示,试验成功分离纯化出一株鸡白痢沙门氏菌噬菌体,命名STP98-a。该噬菌体噬菌斑直径4~5mm,圆形透明,无晕圈,其头部偏椭圆形,长径约61nm,横径约67nm,尾长约112nm,直径约10nm,属于长尾噬菌体科;能裂解不同血清型鸡白痢沙门氏菌和肠炎沙门氏菌肠亚种,噬菌谱宽;在30~60℃保持高活性;在pH 3.0~12.0稳定;最佳感染复数为0.001;一步生长曲线结果显示,其感染宿主菌潜伏期为5min,裂解期为135min,裂解量为93。综上所述,STP98-a为一株宽噬菌谱鸡白痢沙门氏菌烈性噬菌体,可用于鸡白痢沙门氏菌噬菌体制剂的研发。

复合微生态制剂与饲用抗生素对肉雏鸡免疫性能和肠道微生物菌群的影响

试验选取240只1日龄的黄羽肉雏鸡,随机分为II、II、III、V 4个组,其中I组为对照组,III、III、V组分别添加复合微生态制剂、头孢类药物和氟苯尼考药物,研究添加复合微生态制剂和饲用抗生素对肉雏鸡免疫性能和肠道菌群的影响。结果表明:复合微生态制剂对肉雏鸡法氏囊的发育有明显促进作用,9日龄时复合微生态制剂组法氏囊指数分别高出对照组、头孢组和氟苯尼考组14.4%、31.8%、26.75%(P<0.05);但对脾脏的促进效果不明显。复合微生态制剂的添加可以在一定程度上增加肉雏鸡肠道内的有益菌群数量,头孢类抗生素对小肠内的乳杆菌抑制作用不明显,但能显著降低直肠内的乳杆菌数量。氟苯尼考则对乳杆菌类益生素没有明显副作用。

重组鸡α-干扰素的表达及其生物活性的初步研究

为获得重组鸡α-干扰素并对其进行生物活性研究,本试验对重组大肠杆菌进行诱导表达,收集重组鸡α-干扰素包涵体后进行复性纯化及免疫印迹试验,并通过测定病毒EID50,在接种H9亚型禽流感病毒、新城疫病毒和传染性支气管炎病毒的鸡胚中进行干扰素抗病毒活性试验,运用微变量细胞病变抑制法进行重组鸡α-干扰素抗病毒效价的测定。结果显示复性后重组鸡α-干扰素的免疫印迹试验成功获得了预期条带,在鸡胚中重组鸡α-干扰素具有显著的抗H9亚型禽流感病毒、新城疫病毒和传染性支气管炎病毒等活性作用。在CEF/VSV细胞系上测定重组鸡α-干扰素的抗病毒效价为1.5×210 U/mg左右,高浓度重组鸡α-干扰素具有一定的细胞毒性。结果表明重组鸡α-干扰素蛋白具有免疫原性和抗原性,在鸡胚内具有较好的抑制或杀灭H9亚型禽流感病毒、新城疫病毒和传染性支气管炎病毒的效果,呈广谱性,抗病毒效价较高,为下一步抗病毒制品的创制奠定基础。

大肠杆菌噬菌体的分离及生物学特性研究

试验从鸡场周围环境中采集土样，在伊红美蓝培养基平板上分离纯化大肠杆菌，然后以其为宿主，分离相应的噬菌体，并研究其生物学特性。结果表明，共分离到大肠杆菌4株，经16S rDNA鉴定为埃希氏大肠杆菌。其中，以大肠杆菌LY4为宿主分离纯化到1株烈性噬菌体，负染经电镜观察该噬菌体由多面体头部及尾部组成，噬菌斑直径为2.5～3.8 mm，效价2.0×1010 PFU/mL，最佳感染复数为0.0001；在温度－20～37 ℃、pH 5.0～10.0范围内该噬菌体表现出良好的稳定性，但在人工胃液（pH 1.2）条件下，即可导致死亡；测定其一步生长曲线，该噬菌体潜伏期为20 min，裂解能力强，以上特性表明该噬菌体在鸡舍环境治理中具有潜在的应用价值。

不同微生物青贮剂对全株玉米青贮饲料的影响

选用两种不同的青贮发酵剂对全株玉米进行发酵,观察发酵8 d、10 d、20 d、40 d两种青贮发酵剂对全株玉米微生物消长及营养品质的影响。结果表明,经两种青贮发酵剂处理后,全株玉米青贮饲料均有酒香味;发酵前期(8 d、10 d)乳酸菌生长迅速,酵母菌生长相对缓慢。两种发酵剂对全株玉米青贮饲料的pH值、水分、粗蛋白、粗脂肪、粗灰分和粗纤维含量的影响差异不大,但对总酸、中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维含量影响差异较大,青贮发酵剂B适合短期发酵使用,而青贮发酵剂A适合长期发酵保藏使用。两种青贮发酵剂处理的全株玉米青贮饲料中的限制因子(挥发性盐基氮、霉菌、黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、呕吐毒素)均符合相关标准要求。

红曲霉的生物学特性、酯酶培养技术及质量鉴定

扼要地介绍了红曲霉的生物学特性,红曲霉固体酯酶的培养技术,红曲质量的鉴定及酯酶的酯化力和酯分解率的测定方法。

一株适于生产饲用复合酶制剂菌株的生物学特性及酶系分析

乾氏曲霉又名流球曲霉,是属于黑曲霉群中具有重要应用前景的菌株。而黑曲霉6号是实验室工作人员诱变乾氏曲霉得到的一株纤维素酶、蛋白酶、淀粉酶等酶活较高的菌株。该实验室对黑曲霉6号的一般生物学特性及培养特征进行了研究,并对其主要酶系——纤维素酶、蛋白酶、淀粉糖化酶和果胶酶进行了酶系分析、活性测定和最佳产酶条件的分析,为应用试验打下基础。